條件恐懼刺激對大鼠杏仁核區(qū)神經(jīng)細胞增殖的影響

1、條件恐懼刺激對大鼠杏仁核區(qū)神經(jīng)細胞增殖的影響蔣麗珠1，劉 晨2 ，陳 旦2，王 慧2，黃菊芳2（671000云南 大理，大理學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院神經(jīng)精神教研室1；410013長沙，中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)與神經(jīng)生物學(xué)系2）摘要 目的：探討條件恐懼性刺激對大鼠杏仁核區(qū)神經(jīng)細胞增殖的影響，分析杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞與恐懼記憶的關(guān)系。方法：實驗大鼠隨機分成兩組：條件恐懼刺激組和對照組，每組36只，條件恐懼刺激前3d動物腹腔內(nèi)注射BrdU標(biāo)記新生神經(jīng)細胞，條件恐懼刺激組大鼠采用單調(diào)聲配對足底電擊造成條件恐懼刺激模型，對照組大鼠僅給予單調(diào)聲刺激。條件恐懼刺激后1、7、14、21、30、60d行動物行為學(xué)檢測

2、，后處死動物行BrdU的免疫組織化學(xué)染色。結(jié)果：條件恐懼刺激后各時間點條件恐懼刺激組大鼠靜止不動時間均明顯高于相應(yīng)時間點的對照組（P0.01），且條件恐懼刺激組動物杏仁核區(qū)BrdU免疫陽性細胞數(shù)明顯少于同時間點的對照組（P0.05)；條件恐懼刺激組和對照組大鼠在條件恐懼刺激后重新置入條件恐懼刺激箱中僅給予單調(diào)聲刺激, 條件恐懼刺激組大鼠表現(xiàn)為明顯的僵立行為，各時間點條件恐懼刺激組大鼠靜止不動時間均顯著長于同時間點的對照組（P0.01）。見表1。表1 2組大鼠條件恐懼刺激后靜止不動時間的變化（s）組別1d7d14d21d30d60d對照組48.3310.7463.009.8555.007.375

3、1.678.9588.3316.8747.336.61條件恐懼刺激組455.006.35a443.007.23a445.0010.15a409.3320.61a458.337.17a275.679.70aa: P0.01，與同時間點的對照組比較2.2 條件恐懼刺激對大鼠杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞增殖的影響B(tài)rdU的免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示BrdU陽性細胞分布于杏仁核區(qū)的外側(cè)核、基底核、內(nèi)側(cè)核、皮質(zhì)，BrdU免疫染色表達于細胞核，呈點狀（圖1）。條件恐懼刺激刺后1 d，條件恐懼刺激組大鼠杏仁核區(qū)的BrdU陽性細胞數(shù)少于同時間點的對照組（P0.05），7、14、21、30、60d條件恐懼刺激組的BrdU陽性

4、細胞數(shù)與1 d類似：均少于同時間點的對照組（P0.05）。條件恐懼刺激組、對照組BrdU陽性細胞數(shù)都在條件恐懼刺激后7d達峰值，后隨著存活時間的延長兩組動物杏仁核區(qū)BrdU陽性細胞呈進行性減少。見表2,圖1。表2 條件恐懼刺激后2組大鼠杏仁核區(qū)BrdU陽性細胞數(shù)組別1d7d14d21d30d60d對照組190481.682608110.492288100.24129662.3570884.2940258.89條件恐懼刺激組69652.31a1356119.84a 93098.22a35272.77a24624.25a21613.86a a: P0.05，與同時間點的對照組比較A-F：1、7、1

5、4、21、30、60d對照組；A1-F1：1、7、14、21、30、60d條件恐懼刺激組圖1 條件恐懼刺激后大鼠杏仁核區(qū)BrdU免疫組織化學(xué)染色（標(biāo)尺：50m）3 討論BrdU為胸腺嘧啶脫氧核苷的類似物，在細胞周期的S期DNA合成時可整合到細胞核中，為常用的新生神經(jīng)細胞標(biāo)記物。在成年哺乳動物腦內(nèi)能持續(xù)產(chǎn)生具有功能新神經(jīng)元的神經(jīng)干細胞主要位于沿著側(cè)腦室分布的室管膜下區(qū)和海馬的齒狀回，近來研究發(fā)現(xiàn)杏仁核、皮質(zhì)也有新生神經(jīng)細胞5。室管膜下區(qū)的神經(jīng)干細胞通過分裂增殖后沿著嘴側(cè)遷移流遷移到嗅球分化為嗅球的顆粒細胞與小球周細胞，與嗅覺的辯別和嗅覺的記憶研有關(guān)；齒狀回的神經(jīng)干細胞通過增殖、遷移后，分化為齒狀

6、回的顆粒細胞，參與動物情緒行為的調(diào)節(jié)，與依賴海馬的學(xué)習(xí)記憶有關(guān)6。但關(guān)于杏仁核區(qū)新神經(jīng)細胞的功能尚不清楚。本實驗行為學(xué)檢測結(jié)果顯示條件恐懼刺激后1d條件恐懼刺激組大鼠靜止不動時間顯著高于同時間點的對照組（P0.01），7、14、21、30d條件恐懼刺激組大鼠靜止不動時間類似1d，這說明條件恐懼刺激組大鼠成功地對聲音和足底配對刺激形成了條件反射聯(lián)系，記住了足底電擊這一恐懼事件。BrdU免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示條件恐懼刺激組、對照組大鼠杏仁核區(qū)BrdU陽性細胞數(shù)都在條件恐懼刺激后7d達峰值，后隨時間的推移呈進行性減少；各時間點條件恐懼刺激組大鼠杏仁核區(qū)BrdU免疫陽性細胞數(shù)均明顯少于相應(yīng)時間點的對照組

7、。Biebl等7研究發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)新生神經(jīng)干細胞在出生后短時間內(nèi)增殖增加，后出現(xiàn)死亡高峰，特別是出生后13周，且用BrdU標(biāo)記神經(jīng)干細胞時隨著動物存活時間的延長神經(jīng)干細胞的不斷增殖BrdU陽性信號會出現(xiàn)逐漸衰減。本實驗中兩組動物BrdU陽性細胞數(shù)在條件恐懼刺激后7d達峰值，后呈逐漸減少的變化趨勢可能與此有關(guān)。我們的實驗結(jié)果還提示條件恐懼刺激對大鼠杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞的增殖產(chǎn)生了負向影響并持續(xù)較長時間（60d），Kawamura等8研究發(fā)現(xiàn)孕期應(yīng)激可導(dǎo)致胚胎杏仁核區(qū)BrdU陽性細胞減少，我們的實驗結(jié)果顯示與之類似。Ehninger等9研究發(fā)現(xiàn)富集環(huán)境可促進小鼠杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞的增殖，結(jié)合本實驗結(jié)果

8、說明杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞的增殖受社會環(huán)境因素的影響。Okuda等10研究發(fā)現(xiàn)杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞可分化為成熟神經(jīng)元，在海馬新生神經(jīng)元對情景恐懼記憶的形成及其隨時間延長而衰減有重要作用6，因此我們推測杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞對聽覺條件恐懼記憶隨時間延長而衰減也有重要作用，但需進一步研究。 本實驗結(jié)果說明聽覺條件恐懼刺激對大鼠杏仁核區(qū)新生神經(jīng)細胞的增殖產(chǎn)生長時間的負向影響，這種負向影響可能是大鼠恐懼記憶難以消退的主要原因。參考文獻：1 Mirescu C, Peters JD, Gould E. Early life experience alters response of adult neurog

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