分子生物學(xué)遺傳病基因診斷和治療

1、分子生物學(xué)討論三之遺傳病的診斷與腫瘤基因治療遺傳病的基因診斷一、什么是遺傳病遺傳病是指完全或部分由遺傳因素決定的疾病，常為先天性的，也可后天發(fā)病。遺傳病的類型1、染色體病或染色體綜合征：遺傳物質(zhì)的改變在染色體水平上可見，表現(xiàn)為數(shù)目或結(jié)構(gòu)上的改變。2、單基因?。褐敢粚Φ任换虻耐蛔儗?dǎo)致的疾病，分別由顯性基因和隱性基因突變所致。3、多基因?。荷婕岸鄠€基因起作用，與單基因病不同的是這些基因沒有顯性和隱性的關(guān)系，每個基因只有微效累加的作用，因此同樣的病不同的人由于可能涉及的致病基因數(shù)目上的不同，其病情嚴(yán)重程度、復(fù)發(fā)風(fēng)險均可有明顯的不同，且表現(xiàn)出家族聚集現(xiàn)象，環(huán)境的影響較為顯著。二、基因診斷1.基因診斷

2、概念2.基因診斷特點3. 基因診斷應(yīng)用范圍4、基因診斷的發(fā)展過程5、基因診斷遇到的問題6、遺傳病基因診斷的注意事項基因診斷定義某些受精卵或母體受到環(huán)境或遺傳等的影響，引起的下一代基因組發(fā)生了有害改變，產(chǎn)生了疾病，為了有針對性的解決和預(yù)防，故需要通過實驗室的基因診斷、基因分析才能得到確認。又稱DNA診斷或分子診斷?；蛟\斷的特點高特異性高靈敏度早期診斷性應(yīng)用廣泛性基因診斷應(yīng)用范圍1.檢測病原生物的侵入，如肝炎、艾滋病等2.診斷先天遺傳性疾患，產(chǎn)前診斷優(yōu)生學(xué)3.檢測后天基因突變引起的疾病，如腫瘤4.其他比如親子鑒定，法醫(yī)物證基因診斷的發(fā)展過程1976年美籍華裔科學(xué)家簡悅威應(yīng)用液相DNA分子雜交技術(shù)

3、成功地進行了鐮形細胞貧血癥的基因診斷 標(biāo)志著人類遺傳性疾病診斷開始進入基因診斷的新時代發(fā)展過程1、利用連鎖分析和關(guān)聯(lián)分析定位遺傳病致病基因；2、利用分子雜交技術(shù)進行遺傳病的基因診斷；3、利用PCR技術(shù)進行遺傳病的基因診斷；4、基因芯片用于基因診斷；5、利用外顯子組捕獲技術(shù)診斷單基因遺傳??；6、利用全基因組（GWAS）關(guān)聯(lián)分析定位及診斷多基因遺傳病易感基因相關(guān)問題1、標(biāo)準(zhǔn)化問題：缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的操作規(guī)程以及質(zhì)量認證體系。各醫(yī)療機構(gòu)的操作方法不統(tǒng)一，質(zhì)量難保證；2、倫理學(xué)問題；3、所用資源及信息安全問題需要相對明確臨床診斷需要及時向患者及其家屬說明基因診斷的重要性，以啟發(fā)上述成員的理解與主動性需要在基

4、因診斷中建立家系觀點需要注意基因診斷中的倫理問題需要正確理解基因診斷報告需要充分理解產(chǎn)前基因診斷的風(fēng)險遺傳病的基因診斷的注意事項三、基因診斷方法1.核酸分子雜交2.聚合酶鏈反應(yīng)3.單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析4.限制性片段長度多態(tài)性連鎖分析序列測定6.單核苷酸多態(tài)性和全基因組關(guān)聯(lián)分析7.生物芯片11.外顯子組捕獲技術(shù)3.單鏈構(gòu)象多態(tài)性 單鏈DNA呈現(xiàn)一種由內(nèi)部分子相互作用形成的三維構(gòu)象，這種構(gòu)象由堿基順序決定。堿基變異則構(gòu)象改變。而構(gòu)象影響了DNA在非變性凝膠中的遷移率。相同長度但不同核苷酸序列的DNA由于在凝膠中的不同遷移率而被分離。遷移率不同的條帶可被銀染或者熒光標(biāo)記引物檢測，然后用DNA自動測序進

5、行分析。4.限制性片段長度多態(tài)性 該技術(shù)是利用限制性內(nèi)切酶能識別DNA分子的特異序列，并在特定序列處切開DNA分子，即產(chǎn)生限制性片段的特性。 如果重排、缺失或者核苷酸置換使內(nèi)切酶識別序列變成了不能識別序列或是這種差別使本來不是內(nèi)切酶識別位點的DNA序列變成了內(nèi)切酶識別位點。這樣就導(dǎo)致了用限制性內(nèi)切酶酶切該DNA序列時，就會少一個或多一個酶切位點，結(jié)果產(chǎn)生少一個或多一個的酶切片段。這樣就形成了用同一種限制性內(nèi)切酶切割不同物種DNA序列時，產(chǎn)生不同長度大小、不同數(shù)量的限制性酶切片段這種變化即可作為診斷指標(biāo)。6.單核苷酸多態(tài)性和全基因組關(guān)聯(lián)分析單核苷酸多態(tài)性： 主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變

6、異所引起的DNA序列多態(tài)性。 全基因組關(guān)聯(lián)分析英文名字叫Genome-wide association study簡稱GWAS 全基因組關(guān)聯(lián)分析是指在人類全基因組范圍內(nèi)找出存在的序列變異，即單核苷酸多態(tài)性（SNP），從中篩選出與疾病/性狀相關(guān)的SNPs。 7.生物芯片 又稱為基因芯片(gene chip)、DNA微陣列(DNA microarray) DNA芯片技術(shù)基礎(chǔ)是核酸分子雜交 應(yīng)用微電子加工工藝，在玻璃、塑料、硅片等材料上制備用于生物樣品分離、反應(yīng)或分析的微細結(jié)構(gòu) 目前主要有兩大類： 1. 生物活性微陣列 (bioactive microarray) 2. 基因芯片 (gene chi

7、p), DNA微陣列 (DNA microarray) 包括多肽、蛋白質(zhì)、病毒、 細胞等。蛋白質(zhì)芯片可直接從體液中檢測生物分子（免疫芯片只需少量樣品可一次完成對成千上萬種抗原或抗體等致病因素或生物樣品的檢測分析)。為最重要的生物芯片，廣泛用于基因表達譜分析、新基因發(fā)現(xiàn)、基因突變及多態(tài)性分析、疾病診斷、藥物篩選、基因測序等。9.環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴增技術(shù) 其特點是針對靶基因的6 個區(qū)域設(shè)計4 種特異引物,利用一種鏈置換DNA聚合酶(Bst DNA polymerase) 在等溫條件(65 左右) 保溫幾十分鐘,即可完成核酸擴增反應(yīng)10.免疫組織化學(xué)診斷 對于某些基因表達水平發(fā)生改變的疾病可以采取免疫

8、組織化學(xué)方法進行診斷，優(yōu)點是在不改變細胞結(jié)構(gòu)的情況下，對基因表達終產(chǎn)物蛋白質(zhì)水平及細胞中的部位進行分析外顯子捕獲(exon trapping) 是構(gòu)建一種載體，從其插入片段中識別和回收外顯子序列，從而克隆目的基因。遺傳病的基因診斷典型案例主要內(nèi)容甲型血友病脆性X染色體綜合征成年型多囊腎病DMD/BMD的缺失型脊髓小腦性共濟失調(diào)甲型血友病血友病為一組遺傳性凝血功能障礙的出血性疾病。其共同的特征是活性凝血活酶生成障礙，凝血時間延長，終身具有輕微創(chuàng)傷后出血傾向，重癥患者沒有明顯外傷也可發(fā)生“自發(fā)性”出血。血友病可分為甲型、乙型、丙型和血管性假血友病4種。其中甲型發(fā)病率占人類先天性血液系統(tǒng)疾病的85%

9、。甲型血友病，即因子促凝成分（：C）缺乏癥，也稱AGH缺乏癥，是一種性聯(lián)隱性遺傳疾病，女性傳遞，男性發(fā)病。甲型血友病的基因診斷主要鑒定患者家系中的攜帶者或?qū)ξ闯錾奶哼M行產(chǎn)前診斷。 甲型血友病的基因診斷1. 1.F 基因到位的DNA印記分析： 1）將基因組用限制性內(nèi)切核酸酶消化 2）用特異探針雜交，放射自顯影分析2. F 基因突變直接檢測： 1）依賴于F 基因內(nèi)或旁側(cè)的多態(tài)性的連鎖分析 2）RFLP連鎖分析 3）VNTR分析 4）STR連鎖分析對于甲型血友病進行基因診斷首先尋找有無基因到位，其次利用基因內(nèi)的遺傳標(biāo)志進行連鎖分析，最后采用PCRSSCP或PCRDGGE分析。脆性X染色體綜合征脆

10、性X染色體綜合征導(dǎo)致患者智障（Martin-Bell綜合征），脆性X綜合癥是由于在人體內(nèi)X染色體的形成過程中的突變所導(dǎo)致。在X染色體的一段DNA，由于遺傳的關(guān)系有時會發(fā)生改變。一種為完全改變，另一種為DNA過度甲基化。如果這兩種改變的程度較小，那么患者在臨床表現(xiàn)方面可以沒有特殊的癥狀或者只有輕微的癥狀。反之，如果這兩種改變的程度較大，就可能出現(xiàn)如下所述的脆性X綜合癥的種種癥狀。 脆性X染色體綜合征基因診斷常用的方法： （1）PCRASO （2）DNA連鎖鏈分析 （3）Southern印跡雜交法 （4）PCR擴增成年型多囊腎病 成年型多囊腎病是一種常染色體顯性遺傳病，發(fā)病率高，約1000人中有1

11、名致病基因的攜帶者，起病較晚，多在30歲以后，主要為腎和肝中出現(xiàn)多發(fā)性囊腫，臨床表現(xiàn)為腰疼、蛋白尿、血尿、高血壓、腎盂腎炎、腎結(jié)石等，最終可導(dǎo)致腎功能衰竭和尿毒癥。 診斷：本病基因定位在16p13，與珠蛋白基因3端相鄰，但致病基因尚未克隆，基因產(chǎn)物的生化性質(zhì)和疾病發(fā)病機理也尚未闡明。因此，只能用連鎖分析來進行基因的發(fā)病前診斷和產(chǎn)前診斷。由于通過家系分析，已證實APKD的致病基因與珠蛋白基因3端附近的一段小衛(wèi)星DNA序列即3HVR(3 hypervariable region)緊密連鎖，而后者在人群中具有高度多態(tài)性，因此可以通過RFLP連鎖分析進行診斷。DMD/BMD的缺失型 DMD/BMD是一

12、種連鎖隱性遺傳的神經(jīng)肌肉系統(tǒng)受累的致死性遺傳病。DMD/BMD有70%左右為缺失型。 診斷：此基因很大，缺失可發(fā)生在不同部位，因此應(yīng)盡可能采用多對引物作PCR擴增（多重PCR）來檢測。如擴增產(chǎn)物電泳后發(fā)現(xiàn)有帶紋的缺失，即可作出診斷并對缺失定位（圖139），在進行產(chǎn)前診斷時，一般可先通過檢測家系中有關(guān)成員，即確定先證者的缺失區(qū)，然后有針對性地作PCR擴增，包括缺失部分的兩端，以判斷胎兒或有關(guān)患兒是否也獲得了相同的基因缺失，但非缺失型不能用此法查出。脊髓小腦性共濟失調(diào) 脊髓小腦性共濟失調(diào)是以小腦性共濟失調(diào)為主要癥狀的常染色體顯性遺傳性疾病，病理改變以小腦、脊髓、腦干變性為主，臨床主要特征為小腦性共

13、濟失調(diào)，可伴有構(gòu)音障礙、震顫、錐體束征以及癡呆等。 診斷：依據(jù)神經(jīng)系統(tǒng)臨床檢查的程序來判斷患者是否存在小腦及脊髓神經(jīng)失調(diào)的臨床體征，然后會查問他的家族史（包括已故的親人），最后結(jié)合磁共振（MRI）及基因測試，排除其他累及小腦和腦干的變性病，才能判斷患者是否患上脊髓小腦性共濟失調(diào)。遺傳病的基因診斷以血紅蛋白病為例血紅蛋白病血紅蛋白?。╤emoglobinopathy）是由于血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)異常（異常血紅蛋白?。蛑榈鞍纂逆満铣伤俾十惓＃ㄖ榈鞍咨烧系K性貧血，又稱海洋性貧血）所引起的一組遺傳性血液病。臨床可表現(xiàn)溶血性貧血、高鐵血紅蛋白血癥或因血紅蛋白氧親和力增高或減低而引起組織缺氧或代償性紅細胞

14、增多所致紫紺。異常血紅蛋白病鐮刀狀紅細胞貧血（Hbs）不穩(wěn)定血紅蛋白病（unstable hemoglobinpathies）血紅蛋白M?。℉bM）氧親和力改變的血紅蛋白病地中海貧血地中海貧血（-thalassemia,簡稱地貧）地中海貧血（梩halassemia,簡稱地貧）鐮刀狀紅細胞貧血（Hbs）異常血紅蛋白鏈的第6位谷氨酸被纈氨酸所代替。這個疏水氨基酸正好適合另一血紅蛋白分子鏈EF角上的“口袋”，這使兩條血紅蛋白鏈互相“鎖”在一起，最終與其他血紅蛋白鏈共同形成一個不溶的長柱形螺旋纖維束，使紅細胞扭旋成鐮刀形。診斷方法鐮刀形細胞性貧血癥的基因診斷可采用PCR-限制性內(nèi)切酶譜分析法。先用PC

15、R從患者基因組DNA擴增含突變位點的珠蛋白基因片段。再選擇適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶水解PCR產(chǎn)物,根據(jù)酶切產(chǎn)物在電泳圖譜上的片段數(shù)量和大小做出判斷.也可與特意的寡核苷酸探針進行Southern印記雜交分析,根據(jù)雜交圖譜做出判斷.限制性內(nèi)切酶采集制備血液DNA內(nèi)切酶Mst消化電泳轉(zhuǎn)膜P32標(biāo)記的珠蛋白cDNA雜交放射自顯影PCR/限制性內(nèi)切酶設(shè)計引物PCR擴增產(chǎn)物進行限制性內(nèi)切酶酶切電泳EB染色直接觀察地中海貧血 地中海貧血(-mediterranean anemia)是指 鏈的合成受部分或完全抑制的一組血紅蛋白病?；純撼錾鷷r無癥狀，多于嬰兒期發(fā)病，生后36 個月內(nèi)發(fā)病者占50%，偶有新生兒期發(fā)病者。

16、發(fā)病年齡愈早，病情愈重。嚴(yán)重的慢性進行性貧血，需依靠輸血維持生命，34 周輸血1 次，隨年齡增長日益明顯。地中海貧血基因診斷PCR/ASO斑點雜交法 合成兩對PCR引物 合成等位特異寡核苷酸探針 制備DNA樣品 PCR擴增 斑點印跡雜交RFLP分析法腫瘤基因治療基本策略和常用方法基本策略(一)治療性基因的獲得(二)基因載體的選擇(三)靶細胞的選擇(四)基因轉(zhuǎn)移方法(五)轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞的選擇鑒定(六)回輸體內(nèi)（一）目的基因的選擇和制備 基因治療的首要問題是選擇用于治療疾病的目的基因。 要求：在體內(nèi)僅有少量的表達就可顯著改善癥狀；該基因的過高表達不會對機體造成危害。 在抗病毒和病原體的基因治療中。所選擇

17、的靶基因應(yīng)在病毒和病原體的生活史和起重要的作用并且該序列是特異的。制備目的基因：正向表達的基因可以是cDNA（complementary DNA），也可是基因組DNA(genomic DNA)片段?？捎脗鹘y(tǒng)的方法（人工合成）獲取，也可采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction PCR)等新技術(shù)進行體外擴增。部分反義基因也可采用此法獲得，但多數(shù)情況下采用人工合成的方式制備。（二）基因的轉(zhuǎn)運目前已有多種基因轉(zhuǎn)運的方式，其基本原則是將外源基因運到細胞內(nèi)。已使用的有病毒載體和非病毒載體兩大類。病毒載體：病毒具有一些獨特的性質(zhì)如多數(shù)病毒可感染特異的細胞，在細胞內(nèi)不易降解；RN

18、A病毒能整合到染色體以及基因水平較高等。因此病毒載體是良好的基因轉(zhuǎn)運載體。目前已被用作載體的病毒有逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)的病毒。皰疹病毒和肝炎病毒等?！灸孓D(zhuǎn)錄病毒用作載體時需進行幾步改造（1）將天然的野生型RNA前病毒轉(zhuǎn)變成DNA載體，并插入欲轉(zhuǎn)移的相關(guān)外源基因。其基本原則是用標(biāo)記基因和外源基因替代病毒的編碼基因示。（2）制備輔助細胞為載體DNA提供其喪失的功能。（3）將載體DNA導(dǎo)入輔助以產(chǎn)生病毒載體。（4）病毒載體感染靶細胞，外源基因在細胞內(nèi)得以表達?！糠遣《据d體：這類載體的發(fā)展較快，目前主要是脂質(zhì)體，載體優(yōu)點缺點逆轉(zhuǎn)錄病素毒基因組小并且簡單 可穩(wěn)定整合于宿主基因組生物學(xué)特性清楚可高效

19、轉(zhuǎn)入復(fù)制中的細胞對宿主細胞無害僅感染分裂細胞 隨機整合（可能導(dǎo)致突變）常常只有短暫表達病毒滴度低（107pfu/ml）可能會與有復(fù)制能務(wù)的病毒重組插入容量有限（10kb）腺相關(guān)病毒基因組小（5kb） 可特異整合于人19號染色體以人細胞作為宿主無毒、無致病性尚未研究清楚 需腺病毒輔助復(fù)制攜帶外源基因能力有限（4kb）難得到高滴度病毒常見基因轉(zhuǎn)運載體的優(yōu)缺點腺病毒適于原位使用，尤其是肺 (在不分裂細胞中可進行高效率的體內(nèi)感染)病毒滴度高（1010pfu/ml）生物學(xué)特性清楚不與宿主基因組整合(只有短暫表達) 載本基因組復(fù)雜病毒蛋白可能引起免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)插入外源基因能力有限（7-8kb）脂質(zhì)體無

20、感染能力 理論上無DNA大小限制毒性低無特異性靶細胞 轉(zhuǎn)染效率低僅有短暫表達體內(nèi)應(yīng)用困難受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運無感染能力 特異性轉(zhuǎn)染靶細胞理論上無DNA大小限制構(gòu)建靈活轉(zhuǎn)染效率低 體內(nèi)應(yīng)用困難可能有免疫原性只有短暫表達（三）靶細胞的選擇理論上講，無論何種細胞均具有接受外源DNA的能力，目前基因治療中禁止使用生殖細胞作為靶細胞，而只能使用體細胞，用于轉(zhuǎn)基因的體細胞必須取材方便，含量豐富，容易培養(yǎng)，壽命較長。可選擇的細胞有淋巴細胞、造血細胞、上皮細胞、角質(zhì)細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、肝細胞、肌肉細胞和腫瘤細胞等。在實際上應(yīng)用中應(yīng)具體根據(jù)目的條件選擇。（四）細胞轉(zhuǎn)染 這是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)

21、。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独换瘜W(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。名稱機制轉(zhuǎn)染效率用途優(yōu)缺點影響因素磷酸鈣轉(zhuǎn)染法內(nèi)吞作用20%細胞被轉(zhuǎn)染瞬時表達1、簡單有效 2、適用于貼壁、非貼壁細胞3、常作首選方法1、Ca2+，DNA濃度 2、PH值，沉淀反應(yīng)時間3、氯喹，甘油和丁酸鈉處理DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)染法抑制核酸酶

22、 內(nèi)吞作用在BDC-1，CV-1和COS細胞中較高瞬時表達操作簡單1、需高濃度DNa 2、DEAE葡聚糖濃度3、溫育時間Poly-brene轉(zhuǎn)染法不清楚低分子量DNA轉(zhuǎn)染率高于磷酸鈣法CHO細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化子能得到較多的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化子1、受體細胞類型 2、轉(zhuǎn)染調(diào)控信號3、DNA濃度原生質(zhì)體融合胞膜融合50-100%轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定子得率為0.2-0.02%瞬時表達 穩(wěn)定表達1、操作復(fù)雜 2、不能進行共轉(zhuǎn)染3、慎用于篩選營養(yǎng)缺陷型變異株1、溶菌酶、PEG濃度 2、溫育時間電穿孔高壓在膜上形成微孔效率較高瞬時表達 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化 1、需精密儀器 2、可用于動物、植物細胞和細菌1、電場強度 2、脈沖長度3、溫度，DN

23、A濃度4、培養(yǎng)液脂質(zhì)體脂膜融合50-60%轉(zhuǎn)染瞬時表達 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化1、操作簡單 2、可用于體內(nèi)試驗1、脂質(zhì)體質(zhì)量 2、DNA濃度胞核微注射法直接注射50-100%轉(zhuǎn)染穩(wěn)定轉(zhuǎn)化 1、需要特殊儀器 2、處理樣品數(shù)量少3、高效1、注射技術(shù) 2、DNA濃度（五）外源基因的表達及檢測在篩選出轉(zhuǎn)化分子后還需要鑒定轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞中外源基因的表達狀況。其中包括對目的基因和標(biāo)記基因表達的鑒定。常用方法有原位雜交，Northrn雜交，NRA打點雜交，免疫組織化學(xué)染色等，前幾項是檢測外源基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA，后者則是檢測外源基因翻譯出的蛋白質(zhì)。 常用方法 補償性基因治療 補償性基因治療是指向缺失某種抑癌基因的細胞內(nèi)導(dǎo)入正常

24、的抑癌基因，逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的表型、抑制細胞增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡，以達到治療目的。 用基因替代等方法可恢復(fù)和增強腫瘤抑制基因的功能，如將克隆的抑癌基因Rb、p53、p16等導(dǎo)人腫瘤細胞，可以逆轉(zhuǎn)其惡性行為，誘導(dǎo)細胞凋亡。 但是由于腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制十分復(fù)雜，涉及多種癌基因和抑癌基因的多步驟改變，因而難以通過拮抗某一種癌基因完全控制腫瘤的惡性行為。 抗腫瘤血管形成基因治療 腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移與新生血管的形成密切相關(guān)，因此抗血管形成基因治療是非常有潛力控制腫瘤生長的治療方法?？鼓[瘤血管形成基因治療的研究主要包括：針對血管形成生長因子及其受體的基因治療，血管形成抑制因子基因治療，針對腫瘤血管內(nèi)皮細胞的自殺

25、基因治療等。腫瘤耐藥基因治療 即化療保護性基因治療，是指化療前向骨髓內(nèi)導(dǎo)入耐藥基 因，保護骨髓細胞不受抗腫瘤藥物的損害。 有實驗表明，將藥物劑量提高510倍可以克服腫瘤細胞的抗藥性，但大劑量化療對人體正常組織及造血系統(tǒng)的損害較重，限制了化學(xué)藥物的用量。 多耐藥基因 (MDRl)編碼P糖蛋白的跨膜蛋白，它有抗腫瘤藥物位點和 ATP位點2個結(jié)合位點，通過ATP供能可將細胞內(nèi)藥物泵出 從而保護正常細胞免受藥物損害。 目前，腫瘤耐藥基因治療的方案是轉(zhuǎn) 入MDRI基因、DHFR基因、MGMT基因等，或者聯(lián)合使用2 種或多種耐藥基因轉(zhuǎn)入造血干細胞，使造血干細胞獲得廣譜抗 藥性。 自殺基因療法 自殺基因療法又稱為病毒導(dǎo)向的酶解前藥療法 其原理是將一些病毒或細菌基因組中的前 藥轉(zhuǎn)換酶基因（也叫自殺基因)導(dǎo)入腫瘤細胞，該基因 編碼特殊的酶可將原先對高等動物無毒性的前藥在 腫瘤細胞中代謝為毒性產(chǎn)物，從而引起這些細胞自 殺。 其作用是：促進免 疫效應(yīng)細胞的分化增殖、