生化檢驗第二章蛋白質(zhì)

1、共一百零一頁共一百零一頁第一節(jié) 概述(i sh)一、血漿(xujing)蛋白質(zhì) 血漿蛋白質(zhì)功能1.直接在血液中發(fā)揮作用 在血漿中運載弱水溶性物質(zhì) 維持血漿膠體滲透壓 組成血液pH緩沖系統(tǒng)參與凝血與纖維蛋白溶解血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用2.需要時進入組織發(fā)揮作用對組織蛋白起修補作用組成體液免疫防御系統(tǒng)抑制組織蛋白酶參與代謝調(diào)控作用的激素共一百零一頁血漿蛋白質(zhì)的功能(gngnng)及分類運輸(ynsh)載體 血漿脂蛋白(CM、VLDL、LDL、HDL等) 白蛋白 轉鐵蛋白 結合珠蛋白 血色素結合蛋白 銅藍蛋白 視黃醇結合蛋白 甲狀腺素結合球蛋白 皮質(zhì)素結合球蛋白 類固醇激素結合球蛋白 共一百零一頁蛋

2、白酶抑制物： 1-抗胰蛋白酶(y dn bi mi)、1-抗糜蛋白酶 2-巨球蛋白等6種以上血漿酶： 卵磷脂膽固醇?；D移酶、假性膽堿酯酶等 蛋白類激素： 胰島素、胰高血糖素、生長激素等凝血與纖溶蛋白： 纖維蛋白原，凝血酶原，凝血因子、 、，前激肽釋放(shfng)酶、HMW激肽原， 抗凝血酶,纖維蛋白溶酶原等 免疫球蛋白和補體蛋白：IgG、A 、M、D、E C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、 C7、C8、C9、B因子、D因子、備解素等血漿蛋白質(zhì)的功能及分類共一百零一頁血漿(xujing)蛋白質(zhì)的電泳分類醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳： 白蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白

3、分辨率高時：可有1和2 2中也可有兩條 采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，在適當(shdng)條件下可以分出30多個區(qū)帶共一百零一頁各電泳(din yn)區(qū)帶的主要血漿蛋白質(zhì)前白蛋白 甲狀腺素轉運蛋白(dnbi) 0.20.4g/L白蛋白 白蛋白 35551-球蛋白1-抗胰蛋白酶 0.92.0 1-酸性糖蛋白 0.51.2 甲胎蛋白 310-5 高密度脂蛋白 1.73.252-球蛋白結合珠蛋白 0.32.0 2-巨球蛋白 1.253.1 銅藍蛋白 0.20.6-球蛋白 轉鐵蛋白 2.03.6 低密度脂蛋白 2.54.4 C4 0.10.4 2-微球蛋白 0.0010.002 纖維蛋白原 2.04.0 C

4、3 0.71.5 -球蛋白 IgA 0.74.0 IgG 7.016 IgM 0.42.3 C-反應蛋白 0.008 共一百零一頁（一）前白蛋白（prealbumin,PA）即甲狀腺素轉運蛋白(transthyretin，TTR)電泳顯示在白蛋白前方故名PA，肝臟合成，55kD，半壽期僅2.5天。5070與視黃醇結合蛋白組成復合體。能轉運甲狀腺素和三碘甲腺原氨酸， 大約(dyu)結合血漿中10的甲狀腺激素。必需氨基酸含量很高，是組織修補材料。共一百零一頁（二）視黃醇結合(jih)蛋白 （retinol-binding protein，RBP ）肝臟合成，僅21kD，半壽期12h攜帶視黃醇從肝臟

5、轉運到各種靶組織。與TTR以1:1比例結合(jih)，避免RBP從腎小球濾過， 在靶細胞，TTR-RBP降解，視黃醇被攝入細胞，無視黃醇的RBP載體蛋白與TTR無親和性， 被腎小球濾出，腎近端小管細胞吸收并降解。 共一百零一頁（三）白蛋白（albumin ，ALB） 生化(shn hu)特性占血漿總蛋白的5768，不含糖，66.3kD由肝臟合成，1114.7g/d，半壽期約1820天 合成儲備(chbi)大，由血漿膠體滲透壓和蛋白質(zhì)攝入量調(diào)節(jié) 腎病綜合征時合成量可增高到正常的300以上遺傳性變異可發(fā)生電泳遷移率變化，出現(xiàn)雙白蛋白區(qū)帶共一百零一頁（三）白蛋白生理(shngl)作用最重要血漿營養(yǎng)蛋

6、白，胞飲進入細胞，氨基酸合成組織蛋白最重要血漿載體蛋白維持血漿膠體滲透壓的最重要成分(chng fn)緩沖酸堿物質(zhì)的主要血漿蛋白質(zhì)高度溶于水，能運載許多疏水分子 生理pH中為負離子，每分子帶200個負電荷 運輸膽紅素.長鏈脂肪酸.膽汁酸鹽.前列腺素.類固醇激素 無機離子(如Ca2+、Cu2+、Ni2+).藥物(如阿司匹林、青霉素)結合型激素和藥物無活性，ALB含量或pH變化時其活性變化共一百零一頁（四)1-抗胰蛋白酶(y dn bi mi)(1-antitrypsin，1AT或AAT ）蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶：清除病原微生物、壞死組織和衰老紅細胞 蛋白酶過多或活性過強可破壞正常(zhngchn

7、g)組織和細胞抗蛋白酶：機體為對抗蛋白酶的異常作用而產(chǎn)生 抗蛋白酶減少可導致某些疾病發(fā)生共一百零一頁（四）1-抗胰蛋白酶(y dn bi mi) 生理功能占血清中抑制蛋白酶活力的90左右能抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、膠原蛋白酶 及白細胞釋放(shfng)的溶酶體蛋白水解酶 形成不可逆的酶-抑制物復合體 共一百零一頁（四）1-抗胰蛋白酶(y dn bi mi) AAT的多種遺傳表型至少有75種，表達的蛋白質(zhì)有M型和Z型、S型 PiMM型最多，占人群(rnqn)95%以上類型：PiMM:PiMS、PiMZ、PiSS、PiSZ、PiZZ 活力：100%:80、60、60、35、15 共一百零一頁（五）1

8、-酸性(sun xn)糖蛋白 (1-acid glycoprotein，1AG或AAG)主要的急性時相反應蛋白 急性炎癥時增高，與免疫防御功能有關AAG可以(ky)結合利多卡因和心得安等 急性心肌梗死時升高，藥物結合狀態(tài)增加 游離狀態(tài)減少，需要增加藥物劑量。 肝臟合成，40kD，又稱血清類黏蛋白，含糖約45，包括1120唾液酸，血清黏蛋白的主要成分，黏蛋白是能被 高氯酸和其它強酸沉淀的一組蛋白質(zhì)。 共一百零一頁（六）結合(jih)珠蛋白（haptoglobin，Hp） 生化特性和表型由肝臟合成，85kD400kD，分子量變化很大22四聚體， 亞基不同而形成的四聚體表型不同 亞基有三種遺傳表型1

9、F、1s 、2，氨基酸數(shù)不同 有些表型的四聚體又形成聚合體，在電泳(din yn)中出現(xiàn)多條帶共一百零一頁 結合珠蛋白的幾種(j zhn)遺傳表型 表 型 亞單位(dnwi)的結構 組 成Hp1-1 (1F)22 80kD，鏈氨基酸83個 1F1S 2 鏈氨基酸245個 (1S) 2 2Hp2-1 (1S2 2 )n 120kD-200kD的聚合體 (1F2 2)n Hp2-2 (2)n 160kD-400kD n =3-8 n不同 在電泳中呈多條帶共一百零一頁能與RBC中釋放的游離Hb結合 每分子Hp結合兩分子Hb 防止Hb從腎丟失而保留鐵，避免Hb對腎臟損傷。Hp不能重新(chngxn)被

10、利用，溶血后其含量急劇降低， 血漿Hp濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復。 （六）結合(jih)珠蛋白 生理功能共一百零一頁由肝實質(zhì)細胞合成，分子量約720kD血漿最大的蛋白質(zhì)，不能從血管擴散至細胞外液也是主要(zhyo)的蛋白酶抑制劑能結合并抑制各種類型的蛋白酶， 如纖維蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶等酶與2MG處于復合物狀態(tài)時 酶底物為大分子，蛋白水解酶活性被抑制 酶底物為小分子，仍能被2MG-蛋白酶水解 （七）2巨球蛋白 (2-acroglobulin，2MG或AMG)共一百零一頁（八）銅藍蛋白（ceruloplasmin,Cp） 生化(shn hu)特性肝實質(zhì)細胞合成(hchng)，1

11、32kD，2區(qū)帶每分子含68個銅原子，含銅而呈藍色95%的血清銅存在于Cp中，另5%呈可擴散狀態(tài) 血循環(huán)中Cp為銅沒有毒性的代謝庫。共一百零一頁與氧化還原反應(fnyng)有關， 既能起氧化作用又能起抗氧化作用。具有鐵氧化酶作用，能將Fe2+氧化為Fe3+ Fe3+再結合到轉鐵蛋白上，使鐵不具毒性還有抑制膜脂質(zhì)氧化的作用 （八）銅藍蛋白(dnbi) 生理功能共一百零一頁（九）轉鐵蛋白（transferrin，TRF） 生化(shn hu)特性肝細胞合成(hchng)，79.6kD，區(qū)帶，半壽期10.5d能可逆結合多價陽離子:鐵、銅、鋅、鈷等， 其對鐵的結合具有臨床重要性共一百零一頁（九）轉鐵蛋

12、白 生理功能從小腸進入血液的Fe2+被Cp氧化為Fe3+， 再被TRF的載體蛋白結合。每種細胞表面都有TRF受體，對TRF-Fe3+ 復合物比對TRF的載體蛋白親和力高得多TRF-Fe3+將大部分Fe3+運輸?shù)焦撬韬铣蒆b 小部分(b fen)則運輸?shù)礁鹘M織細胞，形成鐵蛋白 及合成肌紅蛋白、細胞色素等共一百零一頁（十）2-微球蛋白 （2-microglobulin，2M，BMG）存在于各種有核細胞表面，僅11.8kD是HLA的輕鏈或鏈，可從細胞表面尤其是淋巴 細胞和腫瘤細胞表面脫落(tulu)到血漿中從腎小球濾過，再被腎近端小管重吸收和分解 共一百零一頁（十一)C-反應蛋白 （C-reacti

13、ve protein,CRP） 生化(shn hu)特性因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)的可以(ky)結合 肺炎球菌細胞壁C-多糖的蛋白質(zhì)而命名由肝細胞所合成，115kD電泳分布在慢區(qū)帶，有時可延伸到區(qū)帶共一百零一頁不僅結合多種細胞、真菌及原蟲等多糖物質(zhì) 在鈣離子存在下，還可以結合卵磷脂和核酸可引發(fā)(yn f)對侵入細胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用 結合后的復合體具有對補體系統(tǒng)的激活作用 表現(xiàn)炎癥反應 (十一(ShY)C-反應蛋白 生理功能共一百零一頁二、體液(ty)氨基酸（amino acid，AA） 來源：消化道吸收、體內(nèi)合成、組織蛋白分解作用：合成蛋白質(zhì)，轉變?yōu)槠渌?shngw)活性物質(zhì)分

14、解途徑：脫氨基成氨及-酮酸(轉變?yōu)樘?、脂肪或分解供?小部分脫羧基生成CO2和胺類體液氨基酸含量可反映體內(nèi)氨基酸代謝紊亂情況氨基酸代謝紊亂有遺傳性原發(fā)性和繼發(fā)性 共一百零一頁（一）遺傳性原發(fā)性氨基酸代謝(dixi)紊亂 為遺傳性代謝酶缺陷引起，種類(zhngli)很多 是相關基因突變所致，至今已發(fā)現(xiàn)70余種絕大多數(shù)疾患罕見，而病情卻嚴重如果診斷足夠早，某些疾患可以治療共一百零一頁1.氨基酸血癥（Aminoacidemia）酶缺陷(quxin) 在氨基酸代謝起點，其催化的氨基酸在血中增加 在代謝途徑中間，酶催化前的中間代謝物堆積 有時因正常途徑受阻，通過旁路代謝的產(chǎn)物可增多氨基酸血癥（amino

15、aciduria)： 氨基酸、或其中間代謝物、或其旁路代謝物在血液中增高。 如酪氨酸血癥、組氨酸血癥、精氨酸血癥等共一百零一頁2. 氨基酸尿癥（Aminoaciduria）血漿增多的氨基酸及其代謝物均從腎小球濾過(l u) 超出腎小管重吸收能力從尿排出即為氨基酸尿癥 尿液中濃度經(jīng)常比血漿更高血漿和尿液氨基酸增多可同時存在 稱某種氨基酸血癥或氨基酸尿癥有時是傳統(tǒng)習慣腎小管細胞膜存在氨基酸載體轉運蛋白 當某種載體缺乏時，相應氨基酸從尿中排出增加 血漿中這些氨基酸濃度可在正常范圍或偏低 共一百零一頁 遺傳性氨基酸代謝紊亂的缺陷酶 及其血和尿中增高(znggo)的成分(帶*為尿中氨基酸) 疾病名稱 缺

16、乏的酶 血漿（尿）中增高的成分苯丙酮酸尿癥 苯丙氨酸羥化酶 苯丙氨酸、 *苯丙酮酸I型酪氨酸血癥 延胡索酸乙酰乙酸酶 酪氨酸、甲硫氨酸尿黑酸尿癥 尿黑酸氧化酶 尿黑酸（輕度）同型胱氨酸尿癥 胱硫醚合成酶 甲硫氨酸、同型胱氨酸組氨酸血癥 組氨酸酶 組氨酸、丙氨酸甘氨酸血癥 甘氨酸氧化酶 甘氨酸支鏈酮酸尿癥 支鏈酮酸氧化酶 纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等胱硫醚尿癥 胱硫醚酶 胱硫醚型高脯氨酸血癥 脯氨酸氧化酶 脯氨酸、 *羥脯氨酸精氨酸琥珀酸尿癥 精氨酸琥珀酸酶 谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等精氨酸血癥 精氨酸酶 精氨酸、 *胱氨酸胱氨酸尿癥 腎小管堿性氨基酸載體 *胱氨酸.精氨酸.賴氨酸.鳥氨酸色氨酸代

17、謝綜合癥 腎小管中性(zhngxng)氨基酸載體 *所有中性氨基酸二羧基氨基酸尿癥 腎小管酸性氨基酸載體 *谷氨酸、天冬氨酸亞氨基甘氨酸尿癥 腎小管亞氨基酸載體 *脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸共一百零一頁（二）繼發(fā)性氨基酸代謝(dixi)紊亂 與氨基酸代謝有關的器官出現(xiàn)嚴重(ynzhng)病變 如肝臟和腎臟疾患、蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良、燒傷等肝功能衰竭：支鏈氨基酸/芳香族氨基酸比值 （BCAA/AAA比值）下降繼發(fā)性腎性氨基酸尿：由腎小管損害、腎近曲小管功能障礙，使氨基酸重吸收減少而引起 共一百零一頁三、嘌呤(piolng)核苷酸（一）嘌呤核苷酸代謝 嘌呤核苷酸的合成：從頭合成途徑(tjng)、補救途徑(

18、tjng)嘌呤核苷酸的分解：終產(chǎn)物是尿酸，人類不能再分解共一百零一頁嘌呤核苷酸合成(hchng)代謝主要原料(yunlio)：5-磷酸核糖氨基酸一碳單位 共一百零一頁共一百零一頁二、高尿酸血癥（hyperuricemia） 分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類，以前者為多原發(fā)性高尿酸血癥： 遺傳性嘌呤代謝紊亂和/或尿酸排泄障礙引起, 多數(shù)由多基因遺傳缺陷(quxin)所致。病因不明，與代謝綜合征關系密切繼發(fā)性高尿酸血癥： 高嘌呤飲食、腎臟疾病、血液病、藥物等引起共一百零一頁嘌呤(piolng)代謝紊亂在原發(fā)性高尿酸血癥的病因中約占10主要原因：嘌呤代謝酶缺陷 大多數(shù)屬多基因(jyn)遺傳缺陷，機制不明 由單

19、酶缺陷引起者僅占12 共一百零一頁單酶缺陷(quxin)原因：次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT)缺乏 PRPP合成酶亢進G-6-P酶缺乏，引起G-6-磷酸增多 沿磷酸戊糖途徑生成較多PRPP，嘌呤合成(hchng)增多腺嘌呤磷酸核糖轉移酶(APRT)缺乏 腺嘌呤不能經(jīng)補救途徑合成腺苷酸而出現(xiàn)堆積 腺嘌呤代謝產(chǎn)物2，8-二羥腺嘌呤由尿排出增加 可產(chǎn)生腎結石，不是高尿酸血癥 共一百零一頁2.尿酸排泄(pixi)障礙原發(fā)性高尿酸血癥中8090具有尿酸排泄障礙腎臟功能大多正常，僅存在尿酸排泄障礙屬多基因(jyn)遺傳性疾病，易感基因(jyn)和發(fā)病機制不明確 共一百零一頁2.尿酸排泄(pix

20、i)障礙腎臟對尿酸鹽的排泄有四個階段： 腎小球 濾過血漿中的全部尿酸鹽 減少 近曲小管 重吸收濾液中大部分 增多 近端小管 再分泌 減少 髓絆降支 被動重吸收 增多 終尿排出尿酸鹽只占濾過量的610 總量約為2.4mmol3.0mmol/d腎臟尿酸排泄障礙(zhng i)涉及以上各個過程 共一百零一頁3.代謝(dixi)綜合征與高尿酸血癥原發(fā)性高尿酸血癥與肥胖、原發(fā)性高血壓、 血脂異常、糖尿病、胰島素抵抗(dkng)關系密切。高尿酸血癥是代謝綜合征的一個組成部分肥胖和高甘油三酯血癥是高尿酸血癥的相關因素 但血液尿酸和TG等之間相互作用的機制仍不清楚共一百零一頁4.高嘌呤(piolng)飲食短時

21、間內(nèi)從飲食攝入大量含嘌呤食物會生成大量尿酸 超過腎臟排泄能力導致血液尿酸升高各類葷菜(hnci)都含嘌呤，尤其是各種動物內(nèi)臟和海鮮嘌呤極高：腦.肝.腎.心.蛤蜊.鳳尾魚.沙丁魚.肉汁等嘌呤較高蔬菜：菠菜.韭菜.扁豆.豌豆.大豆.豆制品等飲料：咖啡、濃茶含一定量嘌呤酒類：啤酒可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒不存在雞蛋和牛奶含豐富蛋白質(zhì)而嘌呤較低，水果中嘌呤很少共一百零一頁5.各種( zhn)腎臟疾病各種腎小球疾病 濾過功能等減退慢性鉛中毒 腎小管損害藥物(yow)競爭性抑制腎小管排泌尿酸： 雙氫克尿塞/利尿酸/速尿/吡嗪酰胺/小劑量阿司匹林血液乳酸或酮酸等有機陰離子濃度增高： 腎小管對尿酸的分泌受

22、到競爭性抑制而排出減少共一百零一頁6.細胞破壞(phui)增多使核酸分解及尿酸生成增多：骨髓增生性疾病核酸合成增加和周轉加速白血病、淋巴瘤、紅細胞增多癥等惡性腫瘤的化療和放療后細胞破壞(phui)過多溶貧、SLE、牛皮癬、心梗、肺結核等 組織細胞破壞增多共一百零一頁 高尿酸血癥和痛風的病因分類 類 型 病因或遺傳特征原發(fā)性高尿酸血癥 尿酸排泄減少，占80-90 多基因性常染色體顯性遺傳 尿酸產(chǎn)生過多 從頭合成嘌呤過多(占原發(fā)性10-20) 多基因性常染色體顯性遺傳 特異性酶缺陷(占原發(fā)性1) 青春(qngchn)性原發(fā)性痛風 HGPRT部分缺乏，X-連鎖 青春期尿酸結石癥 （突變型）PRS活性

23、增強 Lesch-Nyhan綜合征 HGPRT完全缺乏，X-連鎖 Con gierke病 葡萄糖-6-磷酸酶缺乏或不足 繼發(fā)性高尿酸血癥 尿酸排泄減少 腎功能減退 慢性腎疾患 腎小球濾過減少 糖尿病腎病 腎小管排泌尿酸減少 高血壓、內(nèi)分泌疾病、 有機酸增加 、鉛中毒腎病尿酸產(chǎn)生過多 骨髓增殖性疾?。喊籽?、多發(fā)性骨髓瘤、紅細胞增多癥 慢性溶血性貧血 全身擴散的癌癥，惡性腫瘤化療或放療 嚴重的剝脫性牛皮癬共一百零一頁一、體液總蛋白定量二、體液白蛋白定量三、血清蛋白質(zhì)電泳(din yn)四、免疫固定電泳五、體液個別蛋白質(zhì)六、體液氨基酸七、體液尿酸 第二節(jié) 常用體液(ty)蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢

24、測項目 共一百零一頁一、 體液(ty)總蛋白體液總蛋白(dnbi) 數(shù)量種類眾多定量測定時作了如下假定：1.所有血漿蛋白是單純的多肽鏈，糖脂類和金 屬有機物等均不計在內(nèi)，其含氮量平均為162.各種蛋白質(zhì)理化性質(zhì)雖不同，但與化學試劑的 反應性（如呈色、沉淀）一致。共一百零一頁測定蛋白質(zhì)時利用蛋白質(zhì)特有的結構或性質(zhì)：重復的肽鏈結構；分子中均含有(hn yu)氮原子；與色素結合的能力；沉淀后借濁度或光折射測定；酪氨酸和色氨酸殘基對酚試劑反應或紫外光吸收臨床實驗室測定體液蛋白質(zhì)的方法有多種 各種方法性能和應用情況不同 最多用的是雙縮脲法 一、 體液(ty)總蛋白共一百零一頁（一）雙縮脲法（biurea

25、 method） 【測定原理】蛋白質(zhì)中兩個相鄰肽鍵(-CO-NH-)在堿性溶液中能與二價銅離子作用產(chǎn)生穩(wěn)定的紫紅色絡和物。此反應與雙縮脲(兩個尿素縮合物H2N-OC-NH-CO-NH2)在堿性溶液與Cu2+作用形成紫紅色反應相似(xin s)。因此將蛋白質(zhì)與堿性銅反應的方法稱為雙縮脲法共一百零一頁（一）雙縮脲法【參考區(qū)間】隨年齡增大有所增高，60歲后則稍有下降。新生兒:4670 g/L，數(shù)月到2歲:5175g/L， 3歲及以上:6080 g/L。成人:6483g/L(直立行走)和6078g/L(臥床)【臨床意義】濃度下降常由白蛋白濃度下降而引起濃度增高見于慢性炎癥(ynzhng)等多克隆免疫球

26、蛋白增多，以及漿細胞病的單克隆免疫球蛋白增多癥。共一百零一頁（一）雙縮脲法【方法評價】（1）特異性：至少含兩個-CONH-才能與Cu2+絡合， 氨基酸及二肽無反應，三肽以上才能反應。 體液小分子肽含量(hnling)極低，可忽略不計。（2）呈色一致性：因呈色強度與肽鍵數(shù)量即蛋白質(zhì) 含量成正比，故各種蛋白質(zhì)呈色強度基本相同， 為目前所有總蛋白測定方法中最好。共一百零一頁（一）雙縮脲法【方法評價】（3）臨床應用：檢測范圍10120g/L靈敏度不高，但很適合血清總蛋白濃度對胸腹水總蛋白的檢測低限為0.47g/L 生物(shngw)檢測限為1.33g/L 胸腹腔積液TP在4.550 g/L，可采用該法

27、蛋白質(zhì)濃度很低的腦脊液和尿液無法定量共一百零一頁（二）測定體液總蛋白(dnbi)的其他方法 1.染料結合法 酸性環(huán)境蛋白質(zhì)帶正電荷，可與染料陰離子反應而產(chǎn)生顏色改變(gibin)。染料有氨基黑、麗春紅、考馬斯亮藍、鄰苯三酚紅鉬等，前兩種常作血清蛋白電泳的染料?？捡R斯亮藍可用于尿液、腦脊液等定量測定，雖簡便和靈敏，但比色杯對染料有吸附作用。鄰苯三酚紅鉬法沒有考馬斯亮藍法的缺點。各法均存在與不同蛋白質(zhì)結合力不一致的問題共一百零一頁 （二）測定(cdng)體液總蛋白的其他方法 1.染料結合法 鄰苯三酚紅鉬法（pyrogallol red molybdate，PRM） 原理：在酸性介質(zhì)中，鄰苯三酚紅-

28、鉬酸鹽與蛋白質(zhì)形成復合物，最大吸收峰從467nm轉移至594nm。靈敏度高，檢測下限約1020mg/L，上限約2g/L 試劑不吸附比色杯，可用于自動生化分析儀中各種蛋白質(zhì)呈色程度不同，球蛋白約為白蛋白70 加入適量十二烷基(wn j)磺酸鈉，球蛋白反應性有所升高該法適用于蛋白質(zhì)濃度低的尿液、腦脊液等 共一百零一頁（二）測定體液(ty)總蛋白的其他方法 2.凱氏定氮法（Kjeldahl method） 1883年建立，是經(jīng)典的蛋白質(zhì)測定方法。原理：測定樣品中的含氮量，推算出蛋白質(zhì)含量。蛋白質(zhì)中含氮量較為恒定，平均16,即1克氮相當于6.25克蛋白質(zhì)。 準確性好，精密度高，靈敏度高，適用于任何形態(tài)

29、的樣品測定，至今仍被認為(rnwi)是測定許多生物樣品中蛋白質(zhì)含量的參考方法。但操作復雜、費時，不適合臨床常規(guī)測定。 共一百零一頁（二）測定體液(ty)總蛋白的其他方法 3比濁法（turbidimetry）某些酸如三氯乙酸、磺基水楊酸等能與蛋白質(zhì)結合而產(chǎn)生微細沉淀，由此產(chǎn)生的懸浮液濁度大小與蛋白質(zhì)的濃度成正比。優(yōu)點是操作簡便、靈敏度高， 可測定尿液、腦脊液等蛋白質(zhì)較低的樣品。缺點是影響濁度大小的因素較多，包括加入試劑的手法、混勻技術、反應溫度等，且各種( zhn)蛋白質(zhì)形成的濁度亦有較大的差別。共一百零一頁 （二）測定(cdng)體液總蛋白的其他方法 3比濁法 芐乙氯銨法是目前臨床上較多應用的

30、比濁法原理：芐乙氯銨在堿性條件下與蛋白質(zhì)形成(xngchng)沉淀，其懸浮液穩(wěn)定，660nm 處進行濁度測定。靈敏度、準確度、對白蛋白和球蛋白的反應一致性都優(yōu)于其他比濁法，檢測范圍較廣。精密度仍不夠理想。 共一百零一頁 （二）測定體液總蛋白的其他方法(fngf) 4. 酚試劑法（phenol reagent method）Folin在1921年首創(chuàng)，用于酪氨酸和色氨酸測定 后由吳憲用于蛋白質(zhì)定量原理：蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸使磷鎢酸和磷鉬酸還原為鎢藍和鉬藍。靈敏度較高各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸含量不同， 如ALB含色氨酸0.2，球蛋白色氨酸23 因此只適合測定單一蛋白質(zhì)。受還原性物質(zhì)(wzh)干擾

31、(帶-SH化合物、糖類、酚類等) 共一百零一頁 （二）測定體液總蛋白的其他(qt)方法 5直接紫外吸收法根據(jù)蛋白質(zhì)在280nm或215/225nm紫外吸收值，計算蛋白質(zhì)含量。 蛋白質(zhì)濃度（g/L）1.45A280nm-0.74A260nm 準確性受蛋白中芳香族氨基酸含量影響甚大 而且尿酸和膽紅素在280nm附近有干擾。不適合血清(xuqng)、尿液等組成復雜的體液蛋白質(zhì)， 常用于較純的酶、免疫球蛋白等測定。 共一百零一頁二、體液(ty)白蛋白 【檢測方法】包括電泳法、免疫化學法和染料結合法。電泳法只能測其百分含量，乘TP濃度得其濃度 用于ALB定量不方便且精密度不如直接(zhji)定量免疫化學

32、法包括免疫比濁法和放射免疫法等 特異性好、靈敏度高，ALB易純化、抗血清易制備，適合尿液和腦脊液等低濃度ALB的測定血清ALB測定可采用染料結合法 共一百零一頁二、體液(ty)白蛋白【檢測方法】 染料結合法 原理：陰離子染料溴甲酚綠(bromcresol green ，BCG) 溴甲酚紫(bromcresol purple ，BCP)能與ALB結合， 其最大吸收峰發(fā)生轉移。 BCG與ALB形成的藍綠色復合物在630nm處有吸收峰， BCP與ALB形成的綠色(l s)復合物在603nm處有吸收峰。 而球蛋白基本不結合這些染料。 共一百零一頁二、體液(ty)白蛋白【參考區(qū)間】隨年齡有所變化，04天

33、：2844 g/L 4天14歲：3854 g/L，此后下降成人：3552 g/L，60歲為3246 g/L 走動者比臥床者平均高3 g/L【醫(yī)學決定水平】：35gL時正常(zhngchng) 2834gL為輕度缺乏 2127gL為中度缺乏 21gL則嚴重缺乏 低于28gL時，會出現(xiàn)組織水腫共一百零一頁【臨床意義】ALB增高僅見于嚴重失水時，無重要臨床意義低ALB血癥見于下述許多疾病情況：（1）白蛋白合成(hchng)不足： 嚴重肝臟合成功能下降如肝硬化、重癥肝炎 蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良或吸收不良ALB受飲食蛋白質(zhì)攝入量影響，可作為營養(yǎng)狀態(tài)的評價指標，早期缺乏時不易檢出。二、體液(ty)白蛋白共一百零一

34、頁【臨床意義】 （2）白蛋白丟失： 尿中丟失如腎病綜合征、慢性腎小球腎炎、 糖尿病腎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(hn bn ln chun)性腎病等 胃腸道蛋白質(zhì)丟失，因黏膜炎癥壞死 皮膚丟失如燒傷及滲出性皮炎等（3）白蛋白分解代謝增加： 組織損傷如外科手術和創(chuàng)傷 組織分解增加如感染性炎癥疾病等 二、體液(ty)白蛋白共一百零一頁【臨床意義】（4）白蛋白的分布異常： 門靜脈高壓時大量ALB從血管(xugun)內(nèi)漏入腹腔（5）無白蛋白血癥： 極少見的遺傳性缺陷，血漿ALB含量常低于1g/L二、體液(ty)白蛋白共一百零一頁【方法評價(pngji)】 （1）兩種染料結合法均操作簡便、重復性好（2）特異性B

35、CG與ALB為快反應，30秒基本完全 血清和球蛋白能起慢反應，程度較ALB低 縮短反應時間能避免非特異性反應BCP與ALB即時完全反應 無球蛋白非特異性干擾 但BCP與牛、豬等ALB的反應性比人ALB程度低二、體液(ty)白蛋白共一百零一頁【方法評價】 （3）臨床應用：兩法均適合于血清白蛋白測定BCP法檢測范圍為550g/L，上限較低BCG法檢測范圍為560g/L，應用更方便(fngbin)BCG法測定胸腹腔積液ALB檢測低限為0.44g/L 生物檢測限0.98g/L，胸腹腔積液1.535 g/L 能采用BCG法測定尿液和腦脊液ALB定量則不適宜采用該法二、體液(ty)白蛋白共一百零一頁三、血

36、清蛋白電泳(din yn)（serum protein electrophoresis,SPE） 【檢測原理】pH 8.6緩沖液中血清中各種蛋白質(zhì)都電離成負離子，在電場中向正極移動；因各種蛋白質(zhì)pI不同，在相同pH下帶電荷量有差異，各蛋白質(zhì)分子大小(dxio)與分子形狀也不相同，故在同一電場中泳動速度不同。血清蛋白質(zhì)被分成5個主要區(qū)帶 從正極起依次為ALB、1、2、球蛋白共一百零一頁三、血清蛋白電泳(din yn)【參考(cnko)區(qū)間】白蛋白57681球蛋白1.05.72球蛋白4.911.2球蛋白713球蛋白9.818.2正常人SPE圖譜不同染色劑和電泳條件參考區(qū)間不同各實驗室應建立 自己的

37、參考區(qū)間共一百零一頁三、血清蛋白電泳(din yn) 圖譜類型TPAlb12低蛋白血癥型NNN腎病型NN肝硬化型NNN-（融合）彌漫性肝損害型NM蛋白血癥型在 - 區(qū) 帶 中 出 現(xiàn) M 蛋 白 區(qū)帶慢性炎癥型急性時相反應型NNN高2()-球蛋白血癥型妊娠型NN蛋白質(zhì)缺陷型個 別 區(qū) 帶 出 現(xiàn) 特 征 性 缺 乏【臨床意義】 1.血清蛋白電泳(din yn)異常圖譜 共一百零一頁三、血清蛋白電泳(din yn)【臨床意義】 2.血清蛋白電泳典型圖譜 （1）腎病(shn bn)型：ALB下降，2顯著升高 明顯升高，不變或相對下降（2）肝硬化型：ALB下降，明顯升高 典型者和區(qū)帶融合，見-橋腎病

38、型肝硬化型共一百零一頁三、血清蛋白電泳(din yn)【臨床意義】 3.免疫球蛋白增多 （1）單克隆免疫球蛋白增多：或間色澤深染的窄區(qū)帶,單克隆免疫球蛋白或其輕鏈或重鏈片段，稱M蛋白(monoclonal protein)，見于漿細胞病。M蛋白電泳位置大致反應Ig類型(lixng)，IgA位于區(qū)后部或和之間，IgM位于區(qū)中部，IgG位于區(qū)后部。共一百零一頁三、血清蛋白電泳(din yn)【臨床意義】 3.免疫球蛋白增多 （2）多克隆免疫球蛋白增多為各種合成Ig細胞的全面增殖(zngzh) 區(qū)帶呈彌散性升高見于慢性肝病、肝硬化、結締組織病、慢性感染、惡性腫瘤、獲得性免疫缺陷綜合征、淋巴母細胞性淋

39、巴結病。共一百零一頁三、血清蛋白電泳(din yn)【方法評價】影響精密度的因素很多，如電泳介質(zhì)性質(zhì)，緩沖液成分和濃度、電壓大小、電泳時間、染色液成分、電泳時溫度。實驗室之間的精密度較差，實驗室內(nèi)精密度也遠不如生化指標(zhbio)定量測定。采用自動電泳儀及其配套的商品試劑，每次電泳時電壓.時間.甚至溫度等都能準確控制，精密度明顯提高。共一百零一頁四、體液(ty)尿酸【檢測方法】早期常采用氧化還原法，以磷鎢酸法較常用， 特異性差，臨床實驗室已不再采用。尿酸酶紫外吸收法是測定尿酸的參考方法。尿酸酶-過氧化物酶法：目前常采用 原理：尿酸酶氧化尿酸生成尿囊素和H2O2，后者在過氧化物酶催化下，使2，

40、4-二氯酚和4-氨基安替比林縮合(suh)生成醌類有色化合物。共一百零一頁四、體液(ty)尿酸【參考區(qū)間】1血清尿酸 男性210420mol/L，女性150350mol/L2尿液尿酸 膳食嘌呤(piolng)含量對尿酸排出量影響很大無嘌呤膳食：男2480mol/d，女稍低低嘌呤膳食：男2830mol/d，女2360mol/d高嘌呤膳食：5900mol/d均衡膳食：14804430mmol/d共一百零一頁四、體液(ty)尿酸【臨床意義】1血清尿酸 為發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥，后者的主要危害是引起痛風2尿尿酸排出量 可判斷腎臟(shnzng)排泄尿酸的能力 分析高尿酸血癥是否由腎臟排泄障礙所引起共一百零一頁

41、四、體液(ty)尿酸【方法評價】尿酸酶-過氧化物酶法過氧化物酶催化反應特異性較差，維生素C、膽紅素等還原性物質(zhì)有負干擾。血清尿酸濃度在幾百mol/L水平，遠低于血糖、總膽固醇等，膽紅素等負干擾容易被觀察到。 試劑中加入膽紅素氧化酶能消除膽紅素干擾?？捎糜谘搴湍蛞耗蛩釡y定 檢測上限(shngxin)約為700mol/L，尿液尿酸應稀釋測定 共一百零一頁一、蛋白質(zhì)代謝(dixi)紊亂的生物化學診斷蛋白質(zhì)的變化與人類許多疾病密切相關病理情況下血漿蛋白質(zhì)的變化資料已越來越多隨技術發(fā)展(fzhn)許多微量血漿蛋白質(zhì)分析已較容易第三節(jié) 蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢測的臨床應用共一百零一頁（一）肝臟疾病(j

42、bng)的血漿蛋白質(zhì)變化1.多種血漿蛋白質(zhì)含量(hnling)下降 ALB為血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，是肝病最常用的蛋白質(zhì)指標，因半壽期長而不很靈敏，在嚴重慢性肝炎、肝硬化以及重癥肝炎時有明顯下降。PA是肝臟合成功能的敏感指標，肝功能下降時顯著降低。肝病時血漿膽堿酯酶因合成減少而降低。其他如轉鐵蛋白、結合珠蛋白、銅藍蛋白、1-酸性糖蛋白等在肝功能明顯下降時也可出現(xiàn)減少。共一百零一頁（一）肝臟(gnzng)疾病的血漿蛋白質(zhì)變化2.凝血蛋白質(zhì)和凝血酶原時間(PT)嚴重肝臟疾病有明顯Fg缺乏和某些凝血因子減少凝血酶原時間是真正的功能性試驗(shyn)，延長提示嚴重肝功能障礙，對肝合成功能的快速變化敏感

43、。PT對輕微的肝細胞功能障礙不敏感，急性病毒性或中毒性肝炎若PT延長，是爆發(fā)性肝衰竭早期指標。共一百零一頁（一）肝臟(gnzng)疾病的血漿蛋白質(zhì)變化3.免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）增高 慢性肝病網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)受損或門靜脈旁路形成時升高急性肝炎輕度升高，慢性活動性肝炎和肝硬化顯著升高 尤其是自身免疫性肝炎IgG升高常見于慢性活動性肝炎IgA升高常見于各種( zhn)肝硬化，酒精性肝硬化時尤其顯著原發(fā)性膽汁性肝硬化IgM大量升高 病毒性肝炎早期可出現(xiàn)IgM升高共一百零一頁（二）對某些疾病(jbng)的重要診斷意義1.遺傳性蛋白合成缺陷與疾病 年輕肺氣腫者 1-抗胰蛋白酶 缺陷wilson病

44、 銅藍蛋白遺傳性 減少2.貧血的診斷和鑒定 缺鐵性貧血 轉鐵蛋白 升高(shn o)溶血性貧血 結合珠蛋白 減少 共一百零一頁（三）急性(jxng)時相反應 （acute phase reaction，APR）急性時相反應 是機體對急性炎癥(ynzhng)(如感染、自免等)和組織損傷(如創(chuàng)傷、手術、心肌梗死、腫瘤等)的非特異性的，血漿蛋白質(zhì)濃度變化：如AAT、AAG、Hp、Cp、C4、C3、Fg和CRP等顯著升高或升高，PA、ALB、TFR出現(xiàn)下降。以上血漿蛋白質(zhì)統(tǒng)稱為急性時相反應蛋白 （acute phase proteins,APPs） 升高的蛋白質(zhì)稱為正向APPs 下降的蛋白質(zhì)稱為負向A

45、PPs 共一百零一頁APR的機制(jzh)是對炎癥的一般反應損傷部位釋放(shfng)的細胞因子（IL，干擾素）引發(fā) 肝細胞中上述蛋白質(zhì)合成量的改變。正向APPs是機體防御機制的一個部分尤其是活化補體、蛋白酶抑制劑對酶活性的抑制Hp對被破壞紅細胞中釋放Hb的保護作用等作為營養(yǎng)蛋白的負向APPs此時合成減少 可為合成正向APPs提供更多的氨基酸原料 共一百零一頁APR的時相C-反應蛋白首先升高12小時內(nèi)AAG也升高然后AAT、Hp、C4和Fg升高最后是C3和銅藍蛋白升高通常(tngchng)在25天內(nèi)這些APPs達到最高值共一百零一頁（四）類固醇激素對血漿(xujing)蛋白質(zhì)的影響雌激素增多：

46、如妊娠、使用避孕藥 AAT、TRF升高，Cp顯著增加，AMG增加 AAG和Hp合成減少糖皮質(zhì)激素增加： 包括(boku)庫欣綜合征和外源性強的松、地塞米松等 可引起AAG升高共一百零一頁（五）器官組織(zzh)損傷導致的血漿蛋白質(zhì)變化正常血漿含來源于組織細胞的各種各樣蛋白質(zhì)，但相當微量。某些器官或組織病變時，如肝炎、心肌損傷(snshng)、胰腺炎、惡性腫瘤等，則能向血漿中釋放出更多的某種蛋白質(zhì)或酶。檢測這些蛋白質(zhì)有助于以上疾病的診斷，這些將在其他相關章中敘述。 共一百零一頁二、氨基酸代謝紊亂(wnlun)的生物化學診斷遺傳性氨基酸代謝紊亂(wnlun)可從三個水平上診斷： 異常的DNA檢測

47、產(chǎn)前篩查和產(chǎn)后檢測酶缺陷 血清和尿液氨基酸檢測血清或尿液氨基酸定性和/或定量檢測最常用共一百零一頁三、高尿酸血癥與痛風的生物化學診斷(zhndun)（一）高尿酸血癥和痛風的概念血清尿酸濃度超過參考值上限稱為高尿酸血癥，即男性和絕經(jīng)后女性大于420mol/L，絕經(jīng)前女性大于350mol/L。血液尿酸濃度增高到一定程度時，可出現(xiàn)尿酸鹽結晶形成和沉積，并引起特征性急性關節(jié)(gunji)炎、痛風石、慢性關節(jié)(gunji)炎、關節(jié)(gunji)畸形、慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸性尿路結石，即為痛風。共一百零一頁（二）痛風的發(fā)生(fshng)機制血液或滑囊液中的尿酸鈉濃度達到飽和狀態(tài)，將出現(xiàn)結晶沉淀。在體溫37、

48、pH7.4時，尿酸鈉的溶解度約為420mol/L，而在30時為268mol/L。飽和狀態(tài)的尿酸鈉，與血漿特異性1、2球蛋白結合后，仍具有一定的穩(wěn)定性。遇有下列情況(qngkung)即可使尿酸鈉呈微小結晶析出： 血漿1、2球蛋白減少 局部pH降低 局部體溫降低 共一百零一頁（二）痛風的發(fā)生(fshng)機制尿酸鈉結晶易沉淀在血管較少、粘多糖含量較豐富的軟骨、關節(jié)腔內(nèi)及其他結締組織中。運動時這些組織(zzh)容易發(fā)生缺氧，糖酵解加速和乳酸產(chǎn)生增多，pH降低。運動、飲酒、應激、局部損傷等都可誘發(fā)這些部位的尿酸鈉結晶形成及急性炎癥發(fā)作。尿酸鈉結晶可吸附IgG，在補體參與下誘發(fā)多型核白細胞吞噬作用，促使白細胞膜破裂，釋放各種炎癥介質(zhì)，導致組織發(fā)生炎癥反應。 共一百零一頁（三）高尿酸血癥和痛風 的生物化學(shn w hu xu)診斷及治療1.高尿酸血癥及其類型的判斷（1）尿酸排泄量 普通飲食(ynsh)4800mol/24h 低嘌呤飲食3600mol/24h 為生成過多型共一百零一頁（三）高尿酸血癥和痛風