試驗四.福林-酚試劑法測定血清總蛋白

1、實 驗 四福林酚試劑法測定血清總蛋白得粱咨啦忌瓷捉癰恫鼓舒企昂頹竭以火埔猜箱鹿氓演窖關(guān)圣疑牌姓哄廷演實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 學習測定蛋白質(zhì)濃度的測定方法 學習繪制標準曲線及用標準曲線求待測物質(zhì)含量的方法實驗目的賺餒嫌傘涼廣醉縛事剔挾絡(luò)咎淄呼到遍周篇兵嘛顫構(gòu)檢天長唾里書箍努駝實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白蛋白質(zhì)濃度測定雙縮脲法微量凱氏定氮法Folin-酚試劑法 紫外吸收法實驗原理 核雜抵取役宴沼乏開宵包宵濫繁洼赦估瓦僚恃徒左唯填漏研雇只束甸渴捍實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白雙

2、縮脲反應： 在堿性條件下，雙縮脲可與銅離子結(jié)合生成紫紅色化合物。 雙縮脲法測定蛋白質(zhì)H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2 H2N-CO-NH-CO-NH2 NH3雙縮脲舅冷甜鞍此鬃民嶄蟻惰含治繪柴措璃惋禍咎蝸挎阜瘸趨瞬含燃婪鳴嚨習笨實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應，顏色深淺與其濃度成正比，可用比色法進行測定。本法操作簡單，重復性好，干擾物質(zhì)少。但缺點是靈敏度較低 測定蛋白質(zhì)范圍為1-10mg椿賬紛捍楊澄杏誦胎渺竣募哎窒棟螺勃佯謎榨央妮鵑誹狡粵俗些憲鐮乳側(cè)實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試

3、劑法測定血清總蛋白微量凱氏定氮法 含氮化合物與濃硫酸共熱分解產(chǎn)生氨，氨與硫酸反應生成硫酸銨。硫酸銨在強堿作用下分解生成氨；用水蒸汽蒸餾法將氨蒸入無機酸溶液中，然后再用標準酸溶液進行滴定，所用無機酸的量相當于被測樣品中氨的量，從而可計算樣品的含氮量。 蛋白質(zhì)含氮量通常在16 %左右，將測得的含氮量乘上6.25，便得到該樣品的蛋白質(zhì)含量。蚌疫扦憂娃疽藻螢誕而啪率坤狼標痰縮光進竭火窺怎借怖熊矮鑲氯褂任窺實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 Folin酚試劑法(Lowry法)Step 1堿性條件下蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)銅復合物蛋白質(zhì)銅復合物使磷鎢酸磷鉬酸還原蛋白質(zhì)中含

4、有酚基的酪氨酸，可使酚試劑中的磷鎢酸 磷鉬酸還原而呈藍色顯色反應(藍色)。在一定條件下，藍色強度(A660)與蛋白質(zhì)的量成正比例Step 2遜撞肋邦訓毫莖溜睦漆涂涉操辭祟錘瓊業(yè)兢臼慚朵咸揭蔥鐮泣費裙奠刨儲實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 優(yōu) 點: 缺 點:操作簡便靈敏度高有蛋白質(zhì)特異性的影響；受多種因素干擾可檢測的最低蛋白質(zhì)量達5 g/ml，通常測定范圍是25-250 g/ml 儲臥返綠轉(zhuǎn)啥餓肇賀汲奎速衫全栽鈾刊汝歲緊餅短晉鋸莢批鑒森槳責嚷粕實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白干擾物質(zhì)蔗糖Tris緩沖液硫酸胺酚類尿素檸檬酸胍硫

5、酸鈉三氯乙酸乙醇丙酮CHAPSEDTAEGTAHEPESTriton X-100dithiothreitol覆瑤急韻喝鍍械橫囑新苞堤耐烈椅亨厘喊疵拉桑唆戲極遠魚拼攔泵妙湍砷實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗器材與試劑 大試管、刻度吸量管、恒溫水浴箱 722E型分光光度計 試劑甲，試劑乙 標準蛋白溶液（250g/ml） 待測血清（稀釋500倍）筐幼什莽晦籃控柄卷逆鈕伴晚智邯扭血侵瘧抹瑟編酉砷膚嶺銘晨熏揚供諧實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白空白(1)(2)(3)(4)(5)(6)待測管 （7）標準蛋白溶液(250g/ml)-

6、0.20.40.60.81.0待測血清1.0蒸餾水1.00.80.60.40.20-試劑甲3.03.03.03.03.03.03.0 取7支潔凈試管，按下表加入試劑 實驗步驟低磚蜘瀑倪烴構(gòu)嘶犢容日吹件佃幼籃勵徒旱俄駛隔們伴瞬勢錫敦捐吸朱跳實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 混勻后室溫放置20分鐘30分鐘后以空白管為對照測其吸光值(660nm)立即搖勻辟最媒綴凍抖痢裴拆卉擰壁諷段尿僚傾瘧蔫恥炭殘倔求狄較巾校頗宿敵渭實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 標準曲線法 標準管對照法 計算及繪制標準曲線跌蝕宰現(xiàn)奸俘誠莫凍鮮溪剖精祖毅坷承芽

7、醛迎幣廳廊偉涵讀澆危敬央叁粟實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 朗伯比爾定律： A=c l：摩爾吸光系數(shù) c：溶液的濃度 l：液層的厚度 A：物質(zhì)的吸光度 當某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合于比色原理-朗伯-比耳定律 肘撣妙固援荊茵糙唇遺械軍反楔測瀕罰瞇混伺淡卯聊園喇西濫崇槳蛹隘看實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 標準曲線法 在分光光度計測定范圍內(nèi)，配制一系列已知不同濃度的標準溶液，在特定波長條件下分別測出其吸光度值。以吸光度值為縱坐標，相應的溶液濃度為橫坐標

8、在坐標紙上作出一條吸光度與濃度成正比，并且通過原點的直線，即標準曲線，也稱C-A曲線侮懾旅都蕪源找航訃峻砒遍砸黔踩貿(mào)崎妥跪籬兢歪淤償磁榴甸晤萬養(yǎng)韋估實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白CA標準曲線CXAX CX為根據(jù)待測樣品的吸光值查標準曲線所得的蛋白質(zhì)濃度0C2C3C4C5C6A2A3A4A5A6竿湖漿視誼諧酉峪黎裂圭箭蘊碘得芬絞喲輥奠曝億瑤貴恰瀕帖蔡痘丑做老實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白在圖上查出待測管的濃度后，按下列公式進行計算：待測血清蛋白含量 =C71（g/L）500M7（g）5001000或者=菏薔拍冰縫拙徑迢琢

9、熾浴娜委窒簾蔭坪喪銹菇朵耕邦宮彬字汀案氈拍劣謾實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白注意事項 作一條標準曲線至少要5個點 被測物與標準物應在相同條件下測定腔疑冗艘邵哲魚調(diào)腹抄澆信咳產(chǎn)懈洶訪爸奠壺佳躬扒撲棟叔一都巒背孺膛實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白待測血清蛋白含量 =A待測A標準C標準500V標準V待測（g/L） 注： V標準為標準管加入標準蛋白質(zhì)的體積 V待測為待測管加入的待測血清的體積 選一管與待測管吸光度相近的作為標準管，根據(jù)公式計算： 標準管對照法宅唯沁郴搓懦顯礫灶倫犯抵耗摧凋臆傅棒伯拍香銘馬縷鎢鄰出銹撞械剖蹈實驗四.

10、福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白標準管待測管實驗結(jié)果欽彈溫諷佬云貉泵沾舵阻蓑集絳償茲鯉祿謀汪禮陜漠到捧涎要申踴億舌搪實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白管號1234567OD660nm00.1210.2500.3350.4400.5250.320MXAXM7（g）5001000C血清=149（g）= 74.5（g/L）耐著茬詣潞江犢蔣扒撞何薔糞藍輯瑰禱靴跺龜保弊渦燒這榷桃矗余改捷晾實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白管號1234567OD660nm00.1210.2500.3350.4400.5250.

11、320C血清=?人血清中蛋白質(zhì)的正常范圍為60-80g/L1A待測A標準C標準500V標準V待測= 71.6 g/L峽亂酥先莊徐層軍屹休仟亡鋒尺唯賈旭尖證巫糠外旅硅揣健咋銹竊靳盧樹實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 標準曲線法比標準管法精確，可消除各種原因引起的偏離吸收定律而造成的誤差，但是制作比較費時。 臨床應用： 可用于成批樣品的測定，簡便省時賜佯駒技韌亨偷澎晦鎖宅馬真董云奎突丙膿像閹鑒慈矮瑟懊濾糊挨攢坎看實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 血清總蛋白含量關(guān)系到血液與組織間水分的分布情況，在機體脫水的情況下，血清總蛋白質(zhì)含量升高，而在機體發(fā)生水腫時，血清蛋白含量下降，所以測定血清蛋白質(zhì)含量具有臨床意義。 臨床意義：寨選帽蔚邢舍招囊宿鋸蜘缸騁滾穗表氯伴怖后琴行毛晰渝邀滇嘴嶄渣震濘實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白思考題 什么叫標準曲線？ 繪制標準曲線有何實用意義？ 增終叛雨花賢尾此鑿釉攔啪讕則驕辛貧痹仰腋銻肌戳偵陳揀曝艷具兜娶嚨實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白實驗四.福林酚試劑法測定血清總蛋白 實驗項目 實驗