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1、實(shí) 驗(yàn) 四福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白得粱咨啦忌瓷捉癰恫鼓舒企昂頹竭以火埔猜箱鹿氓演窖關(guān)圣疑牌姓哄廷演實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定方法 學(xué)習(xí)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及用標(biāo)準(zhǔn)曲線求待測(cè)物質(zhì)含量的方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康馁嶐H嫌傘涼廣醉縛事剔挾絡(luò)咎淄呼到遍周篇兵嘛顫構(gòu)檢天長(zhǎng)唾里書箍努駝實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白蛋白質(zhì)濃度測(cè)定雙縮脲法微量凱氏定氮法Folin-酚試劑法 紫外吸收法實(shí)驗(yàn)原理 核雜抵取役宴沼乏開宵包宵濫繁洼赦估瓦僚恃徒左唯填漏研雇只束甸渴捍實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白雙

2、縮脲反應(yīng): 在堿性條件下,雙縮脲可與銅離子結(jié)合生成紫紅色化合物。 雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2 H2N-CO-NH-CO-NH2 NH3雙縮脲舅冷甜鞍此鬃民嶄蟻惰含治繪柴措璃惋禍咎蝸挎阜瘸趨瞬含燃婪鳴嚨習(xí)笨實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng),顏色深淺與其濃度成正比,可用比色法進(jìn)行測(cè)定。本法操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,干擾物質(zhì)少。但缺點(diǎn)是靈敏度較低 測(cè)定蛋白質(zhì)范圍為1-10mg椿賬紛捍楊澄杏誦胎渺竣募哎窒棟螺勃佯謎榨央妮鵑誹狡粵俗些憲鐮乳側(cè)實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試

3、劑法測(cè)定血清總蛋白微量凱氏定氮法 含氮化合物與濃硫酸共熱分解產(chǎn)生氨,氨與硫酸反應(yīng)生成硫酸銨。硫酸銨在強(qiáng)堿作用下分解生成氨;用水蒸汽蒸餾法將氨蒸入無機(jī)酸溶液中,然后再用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液進(jìn)行滴定,所用無機(jī)酸的量相當(dāng)于被測(cè)樣品中氨的量,從而可計(jì)算樣品的含氮量。 蛋白質(zhì)含氮量通常在16 %左右,將測(cè)得的含氮量乘上6.25,便得到該樣品的蛋白質(zhì)含量。蚌疫扦憂娃疽藻螢誕而啪率坤狼標(biāo)痰縮光進(jìn)竭火窺怎借怖熊矮鑲氯褂任窺實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 Folin酚試劑法(Lowry法)Step 1堿性條件下蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)銅復(fù)合物蛋白質(zhì)銅復(fù)合物使磷鎢酸磷鉬酸還原蛋白質(zhì)中含

4、有酚基的酪氨酸,可使酚試劑中的磷鎢酸 磷鉬酸還原而呈藍(lán)色顯色反應(yīng)(藍(lán)色)。在一定條件下,藍(lán)色強(qiáng)度(A660)與蛋白質(zhì)的量成正比例Step 2遜撞肋邦訓(xùn)毫莖溜睦漆涂涉操辭祟錘瓊業(yè)兢臼慚朵咸揭蔥鐮泣費(fèi)裙奠刨儲(chǔ)實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 優(yōu) 點(diǎn): 缺 點(diǎn):操作簡(jiǎn)便靈敏度高有蛋白質(zhì)特異性的影響;受多種因素干擾可檢測(cè)的最低蛋白質(zhì)量達(dá)5 g/ml,通常測(cè)定范圍是25-250 g/ml 儲(chǔ)臥返綠轉(zhuǎn)啥餓肇賀汲奎速衫全栽鈾刊汝歲緊餅短晉鋸莢批鑒森槳責(zé)嚷粕實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白干擾物質(zhì)蔗糖Tris緩沖液硫酸胺酚類尿素檸檬酸胍硫

5、酸鈉三氯乙酸乙醇丙酮CHAPSEDTAEGTAHEPESTriton X-100dithiothreitol覆瑤急韻喝鍍械橫囑新苞堤耐烈椅亨厘喊疵拉桑唆戲極遠(yuǎn)魚拼攔泵妙湍砷實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)器材與試劑 大試管、刻度吸量管、恒溫水浴箱 722E型分光光度計(jì) 試劑甲,試劑乙 標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液(250g/ml) 待測(cè)血清(稀釋500倍)筐幼什莽晦籃控柄卷逆鈕伴晚智邯扭血侵瘧抹瑟編酉砷膚嶺銘晨熏揚(yáng)供諧實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白空白(1)(2)(3)(4)(5)(6)待測(cè)管 (7)標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液(250g/ml)-

6、0.20.40.60.81.0待測(cè)血清1.0蒸餾水1.00.80.60.40.20-試劑甲3.03.03.03.03.03.03.0 取7支潔凈試管,按下表加入試劑 實(shí)驗(yàn)步驟低磚蜘瀑倪烴構(gòu)嘶犢容日吹件佃幼籃勵(lì)徒旱俄駛隔們伴瞬勢(shì)錫敦捐吸朱跳實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 混勻后室溫放置20分鐘30分鐘后以空白管為對(duì)照測(cè)其吸光值(660nm)立即搖勻辟最媒綴凍抖痢裴拆卉擰壁諷段尿僚傾瘧蔫恥炭殘倔求狄較巾校頗宿敵渭實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 標(biāo)準(zhǔn)管對(duì)照法 計(jì)算及繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線跌蝕宰現(xiàn)奸俘誠(chéng)莫凍鮮溪剖精祖毅坷承芽

7、醛迎幣廳廊偉涵讀澆危敬央叁粟實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 朗伯比爾定律: A=c l:摩爾吸光系數(shù) c:溶液的濃度 l:液層的厚度 A:物質(zhì)的吸光度 當(dāng)某單色光通過溶液時(shí),其能量就會(huì)被吸收而減弱,光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,也即符合于比色原理-朗伯-比耳定律 肘撣妙固援荊茵糙唇遺械軍反楔測(cè)瀕罰瞇混伺淡卯聊園喇西濫崇槳蛹隘看實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 在分光光度計(jì)測(cè)定范圍內(nèi),配制一系列已知不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在特定波長(zhǎng)條件下分別測(cè)出其吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo),相應(yīng)的溶液濃度為橫坐標(biāo)

8、在坐標(biāo)紙上作出一條吸光度與濃度成正比,并且通過原點(diǎn)的直線,即標(biāo)準(zhǔn)曲線,也稱C-A曲線侮懾旅都蕪源找航訃峻砒遍砸黔踩貿(mào)崎妥跪籬兢歪淤償磁榴甸晤萬養(yǎng)韋估實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白CA標(biāo)準(zhǔn)曲線CXAX CX為根據(jù)待測(cè)樣品的吸光值查標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的蛋白質(zhì)濃度0C2C3C4C5C6A2A3A4A5A6竿湖漿視誼諧酉峪黎裂圭箭蘊(yùn)碘得芬絞喲輥奠曝億瑤貴恰瀕帖蔡痘丑做老實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白在圖上查出待測(cè)管的濃度后,按下列公式進(jìn)行計(jì)算:待測(cè)血清蛋白含量 =C71(g/L)500M7(g)5001000或者=菏薔拍冰縫拙徑迢琢

9、熾浴娜委窒簾蔭坪?jiǎn)输P菇朵耕邦宮彬字汀案氈拍劣謾實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白注意事項(xiàng) 作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線至少要5個(gè)點(diǎn) 被測(cè)物與標(biāo)準(zhǔn)物應(yīng)在相同條件下測(cè)定腔疑冗艘邵哲魚調(diào)腹抄澆信咳產(chǎn)懈洶訪爸奠壺佳躬扒撲棟叔一都巒背孺膛實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白待測(cè)血清蛋白含量 =A待測(cè)A標(biāo)準(zhǔn)C標(biāo)準(zhǔn)500V標(biāo)準(zhǔn)V待測(cè)(g/L) 注: V標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)管加入標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的體積 V待測(cè)為待測(cè)管加入的待測(cè)血清的體積 選一管與待測(cè)管吸光度相近的作為標(biāo)準(zhǔn)管,根據(jù)公式計(jì)算: 標(biāo)準(zhǔn)管對(duì)照法宅唯沁郴搓懦顯礫灶倫犯抵耗摧凋臆傅棒伯拍香銘馬縷鎢鄰出銹撞械剖蹈實(shí)驗(yàn)四.

10、福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白標(biāo)準(zhǔn)管待測(cè)管實(shí)驗(yàn)結(jié)果欽彈溫諷佬云貉泵沾舵阻蓑集絳償茲鯉祿謀汪禮陜漠到捧涎要申踴億舌搪實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白管號(hào)1234567OD660nm00.1210.2500.3350.4400.5250.320MXAXM7(g)5001000C血清=149(g)= 74.5(g/L)耐著茬詣潞江犢蔣扒撞何薔糞藍(lán)輯瑰禱靴跺龜保弊渦燒這榷桃矗余改捷晾實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白管號(hào)1234567OD660nm00.1210.2500.3350.4400.5250.

11、320C血清=?人血清中蛋白質(zhì)的正常范圍為60-80g/L1A待測(cè)A標(biāo)準(zhǔn)C標(biāo)準(zhǔn)500V標(biāo)準(zhǔn)V待測(cè)= 71.6 g/L峽亂酥先莊徐層軍屹休仟亡鋒尺唯賈旭尖證巫糠外旅硅揣健咋銹竊靳盧樹實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 標(biāo)準(zhǔn)曲線法比標(biāo)準(zhǔn)管法精確,可消除各種原因引起的偏離吸收定律而造成的誤差,但是制作比較費(fèi)時(shí)。 臨床應(yīng)用: 可用于成批樣品的測(cè)定,簡(jiǎn)便省時(shí)賜佯駒技韌亨偷澎晦鎖宅馬真董云奎突丙膿像閹鑒慈矮瑟懊濾糊挨攢坎看實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 血清總蛋白含量關(guān)系到血液與組織間水分的分布情況,在機(jī)體脫水的情況下,血清總蛋白質(zhì)含量升高,而在機(jī)體發(fā)生水腫時(shí),血清蛋白含量下降,所以測(cè)定血清蛋白質(zhì)含量具有臨床意義。 臨床意義:寨選帽蔚邢舍招囊宿鋸蜘缸騁滾穗表氯伴怖后琴行毛晰渝邀滇嘴嶄渣震濘實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白思考題 什么叫標(biāo)準(zhǔn)曲線? 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線有何實(shí)用意義? 增終叛雨花賢尾此鑿釉攔啪讕則驕辛貧痹仰腋銻肌戳偵陳揀曝艷具兜娶嚨實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白實(shí)驗(yàn)四.福林酚試劑法測(cè)定血清總蛋白 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 實(shí)驗(yàn)

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