食品中西布曲明等化合物的測定

1、附件1食品中西布曲明等化合物的測定BJS 2017011范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品（含保健食品）基質(zhì)中西布曲明等 33種違法添加減肥降脂類化合物的高效 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于固體沖飲品（咖啡、奶茶、茶葉等）、餅干、液體飲品等食品（含保健食品）中33種減肥降脂類化合物的定性測定，必要時可參考本方法測定添加成分含量。其他低糖、低脂、低蛋白類基質(zhì)可參照本方法定性檢測。含茶多酚、咖啡因等基質(zhì)（如咖啡、奶茶、茶葉等）中，咖啡因不作檢測，奧利司他僅作定性檢測。含紅曲的基質(zhì)中，洛伐他汀不作檢測。2原理試樣經(jīng)甲醇超聲提取，過濾后，上清液供高效液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。3試劑和材料注:水

2、為GB/T 6682規(guī)定的一級水。乙睛：色譜純。甲酸：色譜純。甲醇（前處理）：分析純。0.1%甲酸水溶液：取甲酸 1mL用水稀釋至1000mL,用濾膜（4.2）過濾后備用。0.1%甲酸乙睛溶液：取甲酸 1mL用乙睛稀釋至1000mL,用濾膜（4.2）過濾后備用。標(biāo)準(zhǔn)品：鹽酸苯丙醇胺、鹽酸去甲偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸甲基麻黃堿、硫酸安非他明、氯曝嗪、氫氯曝嗪、鹽酸甲基安非他明、咖啡因、鹽酸分特拉明、鹽酸氯卡色林、鹽酸安非他酮、芬氟拉明、普伐他汀鈉、味塞米、鹽酸N,N-雙去甲基西布曲明、鹽酸氟西汀、酚Mt鹽酸N-單去甲基西布曲明、口引達(dá)帕胺、鹽酸西布曲明、鹽酸節(jié)基西布曲明、鹽酸豪莫

3、西布曲明、比沙可咤、鹽酸氯代西布曲明、苯扎貝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、鹽酸利莫那班、非諾貝特、奧利司他。上述化合物去鹽根后的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式詳見附錄 A,純度均A 95%。標(biāo)準(zhǔn)儲備液（500 g/mL）分別精密稱取鹽酸苯丙醇胺、鹽酸去甲偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿、鹽酸 偽麻黃堿、鹽酸甲基麻黃堿、硫酸安非他明、氯曝嗪、氫氯曝嗪、鹽酸甲基安非他明、咖啡因、鹽酸分特拉明、鹽酸氯卡色林、鹽酸安非他酮、芬氟拉明、普伐他汀鈉、味塞米、鹽酸N,N-雙去甲基西布曲明、鹽酸氟西汀、酚儆、鹽酸N-單去甲基西布曲明、口引達(dá)帕胺、鹽酸西布曲明、鹽酸芳基西布曲明、鹽酸豪莫西布

4、曲明、比沙可咤、鹽酸氯代西布曲明、苯扎貝特、布美他尼、洛伐 他汀、辛伐他汀、鹽酸利莫那班、非諾貝特、奧利司他（3.6）各10 mg,分別置于20 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為500 g/m而準(zhǔn)儲備液，-20 C保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)中間液 A （1科g/mL ：分別準(zhǔn)確吸取鹽酸苯丙醇胺、鹽酸去甲偽麻黃堿、 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸甲基麻黃堿、硫酸安非他明、鹽酸甲基安非他明、咖啡因、鹽酸分特拉明、 鹽酸氯卡色林、鹽酸安非他酮、芬氟拉明、鹽酸 N,N-雙去甲基西布曲明、鹽酸氟西汀、酚ML鹽 酸N-單去甲基西布曲明、口引達(dá)帕胺、鹽酸西布曲明、鹽酸節(jié)基西布曲明、鹽酸豪莫西布曲明

5、、比 沙可咤、鹽酸氯代西布曲明、苯扎貝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、鹽酸利莫那班、非諾 貝特、奧利司他標(biāo)準(zhǔn)儲備液 （500 wg/ml（3.7）各0.1 mL ,置于同一 50 mL容量并S中，用甲醇稀釋至 刻度，搖勻，制成1科g/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)中間液 B （5 g/mL：分別準(zhǔn)確吸取氯曝嗪、氫氯曝嗪、普伐他汀鈉、味塞米標(biāo)準(zhǔn)儲 備液（500 g g/mL（3.7）各1.0 mL,置于同一 100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成5g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液?？瞻谆|(zhì)提取液：稱取空白試樣適量，與樣品同法處理（5.1）,作為空白基質(zhì)提取液。混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取混合

6、標(biāo)準(zhǔn)中間液A（1科g/mL）3.8）和混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 B（5科g/mL）（39）適量，用甲醇稀釋，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液S1S5,濃度依次為混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A （3.8）中各化合物1 g/L 2科g/L 5科g/L 8科g/L 10科g/L及混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 B （3.9）中各 化合物5 g/L 10 g/b 25科g/b 40科g/L 50科g/L臨用新制或依儀器響應(yīng)情況配制適當(dāng)濃度 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。或根據(jù)需要采用空白基質(zhì)提取液（3.10）,配制適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。空白溶液：除不加試樣外，均按試樣同法操作，作為空白溶液。4儀器和設(shè)備高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI

7、）離子源。微孔濾膜：0.22 m,有機(jī)相型。電子天平：感量分別為 0.01 mg和0.01 g。5分析步驟試樣制備固體試樣：取適量混勻，研細(xì)，稱取粉末 1.0g （精確至0.01 g）,精密稱定，置具塞試管中， 精密加入甲醇10mL,密塞，稱重，超聲提取10min,放冷，再次稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量， 搖勻，用微孔濾膜（4.2）過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實際濃度適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)，備用。液體試樣：取適量搖勻，吸取 1.0mL,置具塞試管中，精密加入甲醇 9mL,密塞，稱重，超 聲提取10min,放冷，再次稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（4.2）過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實際濃度適當(dāng)稀釋至

8、線性范圍內(nèi)，備用。儀器參考條件色譜條件a）色譜柱： Waters CORTECS T3 （2.1 100 mm, 2.7 n,或性能相當(dāng)者。b）流動相：A為含0.1%甲酸水溶液，B為含0.1%甲酸乙睛溶液，梯度洗脫程序見表1。c）流速：300L/mind）柱溫：30c柱。e）進(jìn)樣量：1b表1梯度洗脫程序表時間/min流動相A/%流動相B/%09555955222982729827.595532955注：在有共流出成分影響目標(biāo)化合物檢測時，可以適當(dāng)調(diào)節(jié)流動相比例，使盡可能與干擾成分分離，減少干擾。質(zhì)譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b）掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（ MRM ）。c）干燥氣、霧

9、化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)參數(shù)使質(zhì) 譜靈敏度達(dá)到檢測要求，毛細(xì)管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、噴嘴電壓、碰撞能量、 碎裂電壓等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測離子對和定量離子對等信息詳見附錄B。注：（1）方法提供的監(jiān)測離子對等測定條件為推薦條件，各實驗室可根據(jù)所配置儀器的具體情況作適當(dāng)調(diào)整；在 樣品基質(zhì)有測定干擾的情況下，可選用其他監(jiān)測離子對。（2）為提高檢測靈敏度，可根據(jù)保留時間分段監(jiān)測各化合物。定性測定按照高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物的色譜保留時間，以相對于最強(qiáng)離子豐度的百分比作為定性離子對的相對豐

10、度，記錄濃度相當(dāng)?shù)脑嚇优c標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中相應(yīng)成分的相對離子豐度。當(dāng)試樣中檢出與33種化合物中某標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量色譜峰保留時間一致的色譜峰（變化范圍在2.5%之內(nèi)），并且相對離子豐度允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，可以確定試樣中檢出相應(yīng)化合物。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%50205010-20 1.JI J基西布曲明18氟西汀Fluoxetine54910-89-3C17H18F3NO309.33乂19酚MtPhenolphthalein77-09-8C20H14O4318.32-COH20N-單去甲基西布曲明N-monodesmethyl sibutramine168835-

11、59-4C16H25ClN266.830L21口引達(dá)帕胺Indapamide26807-65-8C16H16ClN3O3S365.8322西布曲明Sibutramine106650-56-0C17H26ClN279.85I23西布曲明11-Desisobutyl-11-benzylSibutramine1446140-91-5C20H24ClN313.860324彖莫西布曲明Homosibutramine935888-80-5Ci8H28ClN293.8725比沙可咤Bisacodyl603-50-9C22H19NO4361.392a26氯代西布曲明Chloro Sibutramine7664

12、62-77-5C17H25Cl2N314.29Cl27果扎貝特Bezafibrate41859-67-0C19H20ClNO4361.82JJ28布美他尼Bumetanide28395-03-1C17H20N2O5S364.42I c5429洛伐他汀Lovastatin75330-75-5C24H 36。5404.5430辛伐他汀Simvastatin79902-63-9C25H 38。5418.57Jyr J1031利莫那班Rimonabant168273-06-1C22H21Cl3N4O463.79( 廣NH N32非諾貝特Fenofibrate49562-28-9C20H21ClO436

13、0.8333奧利司他Orlistat96829-58- 2C29H53NO5495.73乎11附錄B質(zhì)譜參考條件a）離子源：電噴霧離子源 （ESI）;b）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）;c）掃描方式：正離子模式和負(fù)離子模式；d）毛細(xì)管電壓：正離子模式， 4000V;負(fù)離子模式，3500V;e）離子源溫度：200 c ；f）干燥氣流量：12L/min ;g）霧化氣壓力：25Psi;h）鞘氣溫度：250 c ；鞘氣（N2）流量：10L/min ;i）噴嘴電壓：正離子模式，500V;負(fù)離子模式，2000V;j）其他質(zhì)譜參數(shù)見表 B.1。表B.1西布曲明等33種化合物定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)參考值

14、序號化合物名稱電禺方式了(m/z)子離子（m/z）碰撞能量（V）保留時間（min）1苯丙醇胺ESI+152.1134.1*92.52117.1172去甲偽麻黃堿ESI+152.1134.0*92.81117.0213麻黃堿ESI+166.1148.0*93.64116.9214偽麻黃堿ESI+166.1148.0*93.97117.0215甲基麻黃堿ESI+180.1162.1*134.50147.0256氯曝嗪ESI-293.9214.0*374.75178.7497安非他明ESI+136.191.0*215.23119.058氫氯曝嗪ESI-296.0268.8*175.89204.925

15、9甲基安非他明ESI+150.191.0*296.82119.0910咖啡因ESI+195.1138.0*217.46110.12911分特拉明ESI+150.191.0*177.74133.0912氯卡色林ESI+196.1128.9*379.76144.12113安非他酮ESI+240.1184.0*910.08131.03314芬氟拉明ESI+232.1158.9*3310.51187.01315普伐他汀ESI-423.2303.1*1711.81321.21716吠塞米ESI-329.0284.9*1711.98205.02517口引達(dá)帕胺ESI+366.1132.1*1312.381

16、17.15318酚MtESI+319.1225.1*2112.50140.94519N,N-雙去甲基西布曲明ESI+252.2124.9*3312.52138.9920氟西汀ESI+310.144.2*1312.68148.0521N-單去甲基西布曲明ESI+266.2124.9*2912.69138.91322比沙可咤ESI+362.1183.9*3712.73226.01723西布曲明ESI+280.2124.9*3312.91138.91324基西布曲明ESI+314.291.0*4913.23124.92525彖莫西布曲明ESI+294.2124.9*4113.26138.91726氯

17、代西布曲明ESI+314.2159.0*3313.53172.81727果扎貝特ESI+362.1138.9*3313.8213316.11328布美他尼ESI+365.1240.0*2114.01184.12529洛伐他汀ESI+405.3285.1*917.18199.1930辛伐他汀ESI+419.3285.0*917.97199.12131利莫那班ESI+463.1362.8*3718.0484.13332非諾貝特ESI+361.1233.0*1718.86138.93333奧利司他ESI+496.4319.2*1722.62337.19定量離子對。14附錄C標(biāo)準(zhǔn)色譜圖_氯噫嗪(tn/

18、z) 293.9-214.0A氧氯唾嗪(M) 296.0-268.8普伐他汀(fii/z) 423.2-303.1I映塞米329.0 7M9S iE V 5 S 2 E mCuta hiTm lnn|圖C.1負(fù)離子模式4種化合物標(biāo)準(zhǔn)品的提取離子（定量）色譜圖15w范內(nèi)罅腺去甲偽麻黃堿_JL麻黃堿偽麻黃晡甲基麻黃堿1安非他明甲基安非他晅|咖啡因I .分特拉明氯卡色林安非他酹芬氟拉明L唧達(dá)帕胺酣酰16(氏)1SE1 -134.1 (m/z) 152.1-F 134.0 (m/z) 166+1 * 1430m/z 166.1 +I4&U(足旬 180,1-162.1136J9l.O(fltt) 150.191.0195.1-138ftt/z) ISO.) -M1.0的 196.1-1洱9ftt/z) 240.1 14. II(ffvt) 23工1-IS.9f* 366.1 73? J(fltt) 319.】 *225. JN.N-雙去甲基西布曲明252.2 114.9氟西汀310.1-44.2N-單去甲基西布曲明(/n/;)266.2-J24.9比沙可喔f比3611-1抖3,9西布曲明伽蚊”的上一S4.9節(jié)基西布曲膽 (w)314.29L0奈莫西布曲明 (ni/z) 294,2124.9向代西布曲距(3