皰疹病毒課件

1、四、微生物檢驗 HSV感染已有療效顯著的抗病毒治療方法。臨床上迫切需要快速準確的診斷方法。 (一)標本采集 一般采集病損皮膚粘膜的拭子。新鮮水 皰液含有高濃度的病毒，可用棉簽吸取殘 存的水皰液后，用力擦拭病損部位的基底 部，以采集感染的上皮細胞。HSV能在病毒 運送液中存活23天。不得在-20凍存。 （二）標本直接檢查 1.直接顯微鏡檢 查用熒光素標記 或酶標記單克隆抗體檢測HSV抗原。 2.核酸檢測 也可采用DNA雜交或者 PCR法直接檢測標本中的HSVDNA， 敏感性、特異性高。（三）病毒分離和鑒定是最為敏感的方法，并且可對HSV分離株進行分型，能在許多培養(yǎng)細胞產(chǎn)生CPE。常用原代人胚細胞

2、和人二倍體細胞分離HSV。CPE的特點是，感染細胞腫大、變圓，折光性強，有細胞融合，形成多核巨細胞， CPE出現(xiàn)快而明顯?？稍诮臃N后1824h出現(xiàn)CPE，病毒含量如在細胞培養(yǎng)液中加地塞米松，可加快CPE的出現(xiàn)，增加CPE病灶的數(shù)量。 通常采用特異性的MoAb進行組化染色，可進行鑒定和分型。也可用型特異性DNA探針進行的鑒定和分型。(四)抗體檢測雙份血清HSV抗體陽轉(zhuǎn)，可診斷為原發(fā)感染，但無法區(qū)分HSV型別?？笻SVIgM抗體的檢測無法用于區(qū)分原發(fā)感染和復發(fā)感染。復發(fā)感染時抗HSVIgM抗體也升高，單份血清檢出HSVIgG抗體表明個體曾感染過HSV。常用的檢測方法是ELISA。微生物檢驗臨床標本

3、主要有皰疹病損部位的涂片、皮膚刮取物、水皰液、活檢組織和血清。主要通過病毒分離、免疫熒光和原位雜交或者PCR等檢測技術(shù)，在患者的組織或者體液中證實VZV或者其成分的存在。 微生物檢驗 病原學診斷方法包括直接檢查、 病毒分離和鑒定以及血清學診斷。 （一）直接檢查 包括檢測病毒顆粒、病毒包涵體 或者抗原或者核酸。 1檢測病毒顆粒 可采用假復制方法 對HCMV先天性感染患兒的尿液和 口腔標本進行電鏡檢查，敏感性 為噬斑形成單位/ml，優(yōu)點是快速 缺點是不敏感。2檢測病毒包涵體 活檢組織標 本切片或者脫落細胞涂片，以 HE等常規(guī)染色，觀察巨細胞以 及細胞核內(nèi)嗜堿性包涵體?？?用于快速診斷，但敏感性較低

4、。3檢測病毒抗原 活檢組織標本 切片、脫落細胞或者周圍血白 細胞涂片、接種標本并培養(yǎng)數(shù) 日的蓋玻片細胞培養(yǎng)物。進行 免疫熒光染色，檢測特異性抗 原。該法敏感特異快速，可用 于快速診斷。4檢測病毒核酸 用PCR法檢測 核酸。敏感性高，能檢出活 動性感染和潛伏感染。(二)病毒分離和鑒定是診斷最可靠的金標準。將標本接種人胚成纖維細胞，觀察46周，期間盲傳2次。產(chǎn)生特征性的CPE，細胞腫脹變圓，形成巨大細胞，可作出初步診斷。經(jīng)過MoAb免疫染色作出最終鑒定。改良快速診斷法是培養(yǎng)24h后用熒光素標記的MoAb直接檢測表達的早期抗原，在接種后24h即可檢出。 (三)抗體檢測 常用ELISA檢測特異性IgG

5、和IgM抗體。(四)結(jié)果分析1先天性感染的診斷 在出生最初 3周內(nèi)從新生兒尿液、呼吸道分泌 物或者其他體液分離出HCMV是最 敏感和特異的確診依據(jù)。2血清學試驗結(jié)果的分析 6個月 以上的患兒，母體抗體已經(jīng)消失， 如果出現(xiàn)雙份血清抗體陽轉(zhuǎn)，可 作出原發(fā)感染的診斷，可診斷為 近期感染。 3免疫功能缺損個體HCMV感染檢 測結(jié)果的分析 檢出HCMV提示 存在活動性感染，但不能確定 HCMV感染與疾病的相關(guān)性。（五）評價HCMV檢測結(jié)果分析必須結(jié)合患者的臨床評價，才能對HCMV感染和疾病提供準確的診斷，及時進行對應的抗病毒治療?？乖诸悵摲诳乖?，為潛伏感染細胞所 合成，包括EBV核抗原(EBNA)和

6、潛 伏期膜蛋白(LMP)。這類抗原的表 達表明存在EBV基因組。早期抗原(EA)，屬于病毒非結(jié)構(gòu)蛋 白，其合成不依賴于病毒DNA的復制。 EA的表達顯示開始病毒復制，是增 殖標志。晚期抗原(LA)，包括衣殼抗原(VCA) 和包膜抗原(MA)。微生物檢驗 病原學診斷方法包括直接檢測病 毒抗原或者核酸、病毒分離和鑒 定以及抗體檢測。 (一)直接檢查 在病變組織中檢測EBV抗原或者 核酸是EBV感染診斷的重要方法。 大部分病變組織中存在EBV的核蛋 白和膜蛋白等病毒產(chǎn)物以及EBV基 因組核酸。用核酸雜交和PCR或者 RT-PCR可檢出基因組核酸及其轉(zhuǎn)錄 產(chǎn)物。（二）病毒分離和鑒定分離EBV的標本可以

7、是唾液、咽漱液及血細胞等，咽漱液中分離率最高，可達80以上。將咽漱液接種人臍帶血淋巴細胞，培養(yǎng)4周，如果出現(xiàn)大量的轉(zhuǎn)化淋巴細胞，則提示病毒培養(yǎng)陽性，鑒定通過免疫熒光技術(shù)檢測EBV核抗原。 (三)抗體檢測是最常用的診斷方法。由于不同病人體內(nèi)針對EBV不同的抗原成分所產(chǎn)生的抗體的組成及水平均有一定的特征性，為疾病診斷提供了參考指標。 （四）結(jié)果分析與評價根據(jù)抗體模式和滴度，可歸為3大類：易感：抗VCA抗體陰性；原發(fā)感染：抗VCA抗體陽性，EBNA 抗體陰性；既往感染且具有免疫力：抗VCA抗 體和抗EBNA抗體均陽性。80的 EBV活動性感染的患者產(chǎn)生抗EA D抗體。 第五節(jié)人皰疹病毒6、7、8型

8、一、人皰疹病毒6型 感染在人群中十分普遍。少數(shù)發(fā)生 幼兒急疹或嬰兒玫瑰疹。在器官移 植等患者，可發(fā)生重癥感染，如腦 炎和肺炎等。 為皰疹病毒科中的一個獨特成員。 基因組DNA為160170kb，G+C mol 為4344。在CD4+T細胞中增殖 良好。 微生物學檢驗包括病毒分離和鑒定、病毒核酸檢測和抗體檢測。采集患者外周血單個核細胞，與經(jīng)過PHA刺激的臍帶血淋巴細胞共同培養(yǎng)。出現(xiàn)腫大的氣球樣細胞提示存在病毒，可用免疫熒光法鑒定。是HHV-6活動性感染的強有力的診斷依據(jù)。采用核酸雜交技術(shù)檢出HHV-6核酸。用血清學方法檢出患者血清中的特異性IgM和IgG抗體。從患者外周血中檢出病毒或者病毒DNA是HHV-6活動性感染的強有力的診斷依據(jù)。二、人皰疹病毒7型從慢性疲勞綜合征患者的外周血單個核細胞、幼兒急疹患者、腎移植患者以及各種免疫抑制治療病人中分離出HHV-7。在健康人的唾液中大量存在HHV-7。目前認為HHV-7是一種普遍存在的人類皰疹病毒，但除了幼兒急疹外，還沒有發(fā)現(xiàn)其他任何疾病和HHV-7存在著必然的聯(lián)系。 三、人皰疹病毒8型是從伴