藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)課件

1、藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)通過(guò)定量研究藥物進(jìn)入人體后的吸收、分布、代謝和排泄（ADME)等過(guò)程進(jìn)行的。目的：揭示藥物劑型因素、生物學(xué)因素和藥物效應(yīng)間的關(guān)系。取決于腸內(nèi)酶及細(xì)胞對(duì)藥物的代謝及屏障作用第一節(jié) 藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的一般方法一、藥物吸收試驗(yàn)（一）藥物口服吸收評(píng)價(jià)方法藥物吸收？獲得藥物在腸道的吸收動(dòng)力學(xué)、有效吸收部位、吸收機(jī)制、影響吸收的因素研究腸吸收方法指導(dǎo)處方設(shè)計(jì)第一節(jié) 藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的一般方法（一）藥物口服吸收評(píng)價(jià)方法在體腸回流法腸襻法外翻囊法分離腸黏膜法Caco-2細(xì)胞模型法主要研究方法1.在體腸灌注法(in situ intestine perfusion)大鼠麻醉開(kāi)腹，腸腔插管用等滲生

2、理鹽水洗凈腸腔內(nèi)容物用恒速泵使灌注液在腸腔內(nèi)循環(huán)灌流，藥物透過(guò)上皮細(xì)胞，吸收 不同時(shí)間測(cè)定灌注液內(nèi)藥物的濃度變化第一節(jié) 藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的一般方法注意事項(xiàng)用等滲生理鹽水浸漬的紗布覆蓋于腸組織表面以保濕保溫加入不吸收的酚紅或放射性標(biāo)記聚乙二醇4000進(jìn)行濃度校正1.在體腸灌注法優(yōu) 點(diǎn)：保持了生理狀態(tài)，與整體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的吸收研究最接近； 考察吸收過(guò)程藥物的代謝情況；能排除肝首過(guò)效應(yīng)以及藥物在腸壁組織中的代謝等生物轉(zhuǎn)化對(duì)吸收的影響測(cè)得的參數(shù)能較真實(shí)反映藥物的透膜特性1.在體腸灌注法缺 點(diǎn)：該法只限于溶液狀態(tài)給藥，結(jié)果準(zhǔn)確性受多種因素的影響。改進(jìn)措施1.同時(shí)取血液測(cè)定吸收的藥物量；2.在灌注方式上選擇單

3、向灌注，振動(dòng)灌注和循環(huán)灌注1.在體腸灌注法文獻(xiàn)1文獻(xiàn)2文獻(xiàn)31. 研究藥物在小腸內(nèi)的吸收機(jī)制是否為被動(dòng)擴(kuò)散、其吸收過(guò)程有無(wú)載體參與。在體腸灌注模型的應(yīng)用在體腸灌注模型的應(yīng)用 實(shí)驗(yàn)中通過(guò)比較藥物不同劑量組的Ka、t1/2、單位時(shí)間的吸收百分率確定其在小腸內(nèi)的吸收機(jī)理。如不同劑量組的以上三種參數(shù)沒(méi)有顯著差異則表明，其吸收過(guò)程為單純的被動(dòng)擴(kuò)散。如隨著劑量的增加，其Ka減小，吸收半衰期延長(zhǎng)、表觀滲透吸收減小，則說(shuō)明該藥物在小腸內(nèi)的吸收具有載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)特征。原位腸灌注實(shí)驗(yàn)中腸段的選取方法為： 小腸（全腸段）自幽門(mén)1cm開(kāi)始到盲腸上端 十二指腸段 自幽門(mén)1cm開(kāi)始至下行10cm 空腸段 離幽門(mén)15cm開(kāi)始

4、下行10cm 回腸 離盲腸上行20cm至下行10cm 結(jié)腸段 盲腸后端至下行10cm處2. 通過(guò)小腸原位灌注實(shí)驗(yàn)確定藥物小腸吸收的最佳部位，為藥物劑型設(shè)計(jì)提供參考。通過(guò)對(duì)不同腸段藥物的吸收速率常數(shù)（ka）、吸收半衰期（t1/2）和每小時(shí)吸收百分率的比較確定其最佳吸收腸段。對(duì)供試溶液循環(huán)時(shí)，比較結(jié)扎膽管與不結(jié)扎膽管兩組的藥物吸收數(shù)率常數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)比較。如結(jié)扎膽管組的Ka大于不結(jié)扎膽管組，提示該藥物可能通過(guò)膽管分泌。 3. 揭示藥物的腸分泌特征和膽汁對(duì)藥物吸收的影響比如，通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃芩苷在腸內(nèi)經(jīng)過(guò)菌群代謝為黃芩素而被吸收，被吸收的或靜脈注射的黃芩素可在體內(nèi)還原為黃芩苷，被小腸分泌排出4. 揭示藥物

5、在小腸吸收過(guò)程中有無(wú)相互轉(zhuǎn)化文獻(xiàn)42.腸襻法大鼠麻醉開(kāi)腹腔，腸腔結(jié)扎將含有藥物的人工腸液注入腸襻中取出腸襻，收集沖洗腸腔內(nèi)腸液，測(cè)定其中的藥物剩余量，進(jìn)而了解藥物腸吸收情況。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間吸收 特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，分析時(shí)樣品處理較復(fù)雜。3.分離腸黏膜法大鼠麻醉開(kāi)腹腔，腸腔插管洗凈內(nèi)容物，取出腸段套在玻璃棒上分離制得腸黏膜，固定于擴(kuò)散池上，測(cè)定藥物透過(guò)上皮細(xì)胞的情況。刮掉上皮下組織 3.分離腸黏膜法通過(guò)改變擴(kuò)散池供藥室溶液組成考察離子，pH值及制劑輔料等對(duì)透膜吸收的影響通過(guò)改變?nèi)硬课唬つ?cè)或漿膜側(cè)）考察藥物不同方向轉(zhuǎn)運(yùn)情況，了解是被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)還是主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)還可以進(jìn)行腸道代謝的考察3.分離腸黏膜法特點(diǎn)：

6、1. 腸黏膜易于破損，操作較困難；2. 不同腸段因組織結(jié)構(gòu)的差異，表現(xiàn)出對(duì)藥物透過(guò)屏障的作用不同，可影響吸收研究結(jié)果4. Caco-2細(xì)胞模型法來(lái)源于人的結(jié)腸（直腸）癌組織。Caco-2細(xì)胞與人小腸上皮細(xì)胞在形態(tài)上十分相似，具有相同的細(xì)胞極性和緊密性連接。1.對(duì)聚乙二醇，甘露醇等不能穿過(guò)2.代謝酶類似：谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶，堿性磷酸酶，細(xì)胞色素P450同工酶等Caco-2細(xì)胞模型的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，可以用來(lái)模擬藥物在體內(nèi)經(jīng)小腸上皮吸收的過(guò)程4. Caco-2細(xì)胞模型法1、能夠在細(xì)胞水平提供關(guān)于藥物分子通過(guò)小腸黏膜的吸收，代謝，轉(zhuǎn)運(yùn)的信息,較之以往的翻轉(zhuǎn)囊、腸襻實(shí)驗(yàn)及在體腸吸收模型更適合藥物吸收進(jìn)入腸黏膜

7、細(xì)胞的研究；2、可用于組合化學(xué)藥物庫(kù)的高通量篩選；3、無(wú)種屬差異，重現(xiàn)性好。優(yōu)點(diǎn)： 4. Caco-2細(xì)胞模型法1、缺乏粘蛋白產(chǎn)生細(xì)胞，2、此模型不能說(shuō)明生理參數(shù)，如小腸流動(dòng)性或運(yùn)送時(shí)間在藥物吸收中的作用；3、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間和代系對(duì)Caco-2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和生理學(xué)性質(zhì)有影響，從而影響細(xì)胞對(duì)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)；4、不同實(shí)驗(yàn)室之間的培養(yǎng)條件的差別， 使結(jié)果缺乏可比性。缺點(diǎn)： 4. Caco-2細(xì)胞模型法1、加速的Caco-2細(xì)胞穿透模型2、TC-7模型改進(jìn)： 例1例2（二）藥物口服吸收特征的預(yù)測(cè)方法1、整體動(dòng)物，直觀， 但需消耗大量的樣品和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，且篩選數(shù)量有限，成本較高。2、組織、器官水平藥動(dòng)學(xué)篩選模型

8、仍效率低、自動(dòng)化程度低、結(jié)果影響因素多3、細(xì)胞水平和基于藥物-生物膜相互作用的體外藥動(dòng)學(xué)篩選模型， 速率快、成本低、方法重現(xiàn)性好等。1、Caco-2細(xì)胞模型：已經(jīng)作為目前研究藥物經(jīng)小腸吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的經(jīng)典體外模型，也是預(yù)測(cè)藥物口服吸收特征的方法之一。常用細(xì)胞和體外模型2、平行人工膜穿透分析：為Caco-2細(xì)胞模型的替代方法。 使用的穿透膜由磷脂合成，與Caco-2細(xì)胞相比，適用的pH值范圍廣，對(duì)二甲基亞砜耐受性較高，穿透速率依賴于磷脂膜材料的性質(zhì)，成本較低，方法容易改進(jìn)。缺點(diǎn)：耗時(shí)，穿透數(shù)值的測(cè)定要求準(zhǔn)確地測(cè)量釋放池和接受池的藥物濃度。常用細(xì)胞和體外模型2、色譜方法常用細(xì)胞和體外模型藥物作用的動(dòng)力

9、學(xué)過(guò)程被認(rèn)為和色譜基本過(guò)程是相似。(1)固定人工膜柱色譜 將不同的磷脂，以單分子層化學(xué)鍵鍵合在固定相上形成人工膜，進(jìn)行色譜分析的方法。優(yōu)點(diǎn)：試驗(yàn)簡(jiǎn)單，可用于藥物開(kāi)發(fā)研究初期的大量篩選。(2)固定脂質(zhì)體色譜 脂質(zhì)體混懸于水中，化合物在脂質(zhì)體雙分子層和水之間進(jìn)行分配可得脂質(zhì)體-水分配系數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：用于制備脂質(zhì)體的材料磷脂、蛋白質(zhì)、膽固醇的比率，可以調(diào)節(jié)到與生物膜的組成很相似的程度。2、色譜方法（3）膠束液相色譜技術(shù)（4）生物分配膠束色譜常用細(xì)胞和體外模型（三）其他給藥途徑的吸收研究方法1、藥物透皮吸收研究方法2、藥物口腔吸收研究方法自學(xué)二、藥物體內(nèi)分布試驗(yàn) 對(duì)試驗(yàn)藥物在生物體內(nèi)的分布規(guī)律、蓄積情況、

10、主要蓄積器官或組織、蓄積程度，以及分布與藥物效應(yīng)間的關(guān)系進(jìn)行研究的過(guò)程。試驗(yàn)動(dòng)物：小鼠或大鼠選定藥物的一個(gè)有效劑量后，分別在吸收相、分布相和消除相各選一個(gè)時(shí)間點(diǎn)（每個(gè)點(diǎn)至少應(yīng)有5只）取樣測(cè)定藥物的濃度。樣本：包括心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、腸、子宮或睪丸和肌肉等重要組織，特別是能確定藥物的效應(yīng)靶器官和毒性靶器官中藥物的分布特征。三、血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)藥物與血漿蛋白結(jié)合物直接或間接地影響了藥物吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程。只有游離的分子，才能透過(guò)毛細(xì)血管到達(dá)其作用的靶部位產(chǎn)生藥物效應(yīng)。藥物與血漿蛋白結(jié)合，也影響了藥物臨床應(yīng)用的有效性與安全性。在新藥的血漿蛋白結(jié)合研究中，以血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定為主要目的

11、。常用方法平衡透析法超濾法超速離心法各種色譜法應(yīng)選用一種方法至少進(jìn)行3個(gè)藥物濃度（包括有效濃度在內(nèi)）的血漿蛋白結(jié)合率試驗(yàn)，每個(gè)濃度至少應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)3次，以了解藥物的血漿蛋白結(jié)合率是否有濃度依賴性1游離型藥物與結(jié)合型藥物（非特異性的結(jié)合）在血漿、組織中均存在游離型和結(jié)合型的藥物尿液中含微量P，血漿中含大量P，唾液中P為血漿1/10與藥物 結(jié)合的蛋白主要有白蛋白，a1-酸性糖蛋白、脂 蛋白 弱酸性藥物主要與白蛋白結(jié)合 弱堿性藥物與白蛋白、a1-酸性糖蛋白結(jié)合藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合通過(guò)共價(jià)鍵（氫鍵，離子間靜電力等）2血漿蛋白結(jié)合率Df+P Db K= 解離常數(shù)血漿蛋白結(jié)合率： = =PDfDbDbDb+D

12、f11+K/np+Df/np 結(jié)合力強(qiáng)的藥物可以置換結(jié)合力弱的藥物，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)蛋白是藥物相互作用類型之一。由此可見(jiàn)，K、np是影響的重要因素 np K 藥物在足夠高濃度時(shí)使結(jié)合部位飽和，濃度再增高，多余的藥物均呈游離狀態(tài)，結(jié)合部分比率降低，藥物血漿蛋白結(jié)合率是藥代動(dòng)力學(xué)的重要參數(shù)之一。 3血漿蛋白結(jié)合的測(cè)定平衡透析法、超濾法、凝膠過(guò)濾法、光譜法等。（1）平衡透析法 原理 計(jì)算= 100% 袋內(nèi)-袋外袋內(nèi)藥物注意事項(xiàng)a. 蛋白質(zhì)溶液 新鮮血漿 pH7.4，至少三個(gè)濃度測(cè)定b. 緩沖液 0.13mol/L磷酸鹽緩沖液，因?yàn)镹a3PO4 抑制酸性藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合c. 溫度與平衡時(shí)間 37 1648h

13、注意防腐劑加入，藥物的分解d. 透析袋 滲漏檢測(cè) 3%三氯醋酸e. 攪拌 保持動(dòng)態(tài)平衡影響因素a. 藥物膜上吸附b. Donnan效應(yīng) 由于電荷的影響，可造成平衡時(shí)半透膜兩側(cè)游離藥濃不同，donnan效應(yīng)，加入中性鹽可消除。c. 空白值增加d. 緩沖液體積變化，水分進(jìn)入血漿 游離藥濃 此法用于測(cè)定藥物時(shí)，耗費(fèi)時(shí)間太長(zhǎng)，一般少采用（2）超濾法原理 計(jì)算注意事項(xiàng) a裝置 50l5ml，選擇不同型號(hào)超濾膜，保濕。 b速度與時(shí)間 300010000r/min 515min c溫度 37，25，4影響因素 a膜吸附 b超濾液的體積 超濾液/總體積0.30.6 c超濾膜溫度三、藥物與血漿蛋白結(jié)合對(duì)體內(nèi)藥物

14、分析的影響1血漿不同對(duì)體內(nèi)藥物分析的影響 2平衡狀態(tài)不同對(duì)體內(nèi)藥物分析的影響 3平衡狀態(tài)受破壞對(duì)體內(nèi)藥物分析的影響4游離與結(jié)合同時(shí)出現(xiàn)時(shí)對(duì)體內(nèi)藥物分析的影響（二）超濾法取血漿或血清與藥物混合，恒溫振蕩至平衡后，用離心力或加壓使溶液中的游離藥物通過(guò)半透膜，然后再分別測(cè)定超濾液和超濾前蛋白質(zhì)溶液中藥物濃度，最后計(jì)算出藥物的血漿蛋白結(jié)合率。優(yōu)點(diǎn)：實(shí)現(xiàn)血漿中游離藥物的快速分離，僅十幾分鐘至數(shù)十分鐘即可收集到足夠供測(cè)定的血漿超濾液，加之與高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合，超濾法已廣泛用于大規(guī)模生物樣品的游離藥物濃度測(cè)定。缺點(diǎn)：1）分離過(guò)程中存在結(jié)合平衡不穩(wěn)定2）對(duì)高蛋白結(jié)合率藥物的游離濃度難以準(zhǔn)確檢測(cè)3）結(jié)

15、合藥物在透過(guò)濾膜時(shí)會(huì)出現(xiàn)泄漏4）超濾裝置對(duì)藥物具有吸附性（三）超速離心法（四）色譜法1、凝膠過(guò)濾法2、親和色譜法3、高效前沿分析法其他方法（自學(xué)）四、藥物生物轉(zhuǎn)化試驗(yàn)藥物在體內(nèi)發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致藥物藥理活性發(fā)生相應(yīng)變化的過(guò)程，稱為藥物的生物轉(zhuǎn)化（biotransformation)或稱為機(jī)體對(duì)藥物的代謝（metabolism）1、研究對(duì)象的個(gè)體差異2、藥物代謝研究大多選用健康成年男性為受試者3、藥物代謝的預(yù)測(cè)要考慮受試者的年齡、性別、疾病狀態(tài)、遺傳因素、誘導(dǎo)和抑制引起的酶學(xué)改變、食物的影響等諸多因素。肝臟藥物代謝研究方法1、細(xì)胞色素P450（CYP450）是一組含有亞鐵血紅素蛋白的酶，被稱

16、為混合功能氧化酶或單加氧酶。許多P450具有遺傳多態(tài)性，是引起個(gè)體間及種族間對(duì)同一底物代謝能力不同的原因之一。細(xì)胞色素P450CYP450命名方法：根據(jù)P450分子的氨基酸序列，能反映種族間P450基因超家族內(nèi)的進(jìn)化關(guān)系的統(tǒng)一命名法。凡P450酶系的氨基酸同源性大于40%,則視為同一家族，以CYP后標(biāo)示數(shù)字表示，如CYP2；氨基酸同源性大于55%為同一亞族，在家族的表達(dá)后加大寫(xiě)英文字母，如CYP2D；每一亞族中的單個(gè)P450酶，則是在表達(dá)式后再加上一阿拉伯?dāng)?shù)字，如CYP2D6。人體肝臟中已有CYP450中的20多種同工酶，分為4個(gè)家族（CYP1-CYP4），它們與藥物代謝密切相關(guān)，其中CYP3

17、A亞家族擔(dān)負(fù)著最廣泛的藥物及內(nèi)源性物質(zhì)的代謝，該亞家族異構(gòu)酶最豐富，約占人肝臟CYP總量的30%，腸CYP總量的70%。細(xì)胞色素P450細(xì)胞色素P450CYP3A4 是人體肝臟主要的藥酶，約有38個(gè)類別，共計(jì)150多種藥物是他的底物。CYP1A2是另一個(gè)重要的藥酶，在藥物代謝、前致癌物活化過(guò)程中有重要作用，其含量與活性不僅與藥物效應(yīng)有關(guān)，還與部分腫瘤易感性密切相關(guān)。 可直觀地反映作為生命機(jī)體的整體在生理狀態(tài)下的藥物代謝情況，但結(jié)果易受個(gè)體的健康狀態(tài)、合并用藥影響，試驗(yàn)的實(shí)施受倫理道德的限制。2、藥物代謝的整體試驗(yàn)方法3、藥物代謝的離體試驗(yàn)方法可以排除體內(nèi)因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾，直接觀察底物的選擇

18、性代謝，為藥物代謝的整體試驗(yàn)提供可靠的理論依據(jù)。（1）離體肝臟灌注法（2）器官組織切片法（3）肝微粒體體外溫孵法由制備的肝微粒體輔以氧化還原型輔酶，在模擬生理溫度及生理溫度及生理環(huán)境條件下進(jìn)行生化反應(yīng)的體系。3、藥物代謝的離體試驗(yàn)方法一般用差速離心法，貯存將其存放在-70C -40C的低溫冰柜中，并在使用時(shí)檢測(cè)藥酶活性。肝微粒體的制備肝微粒體體外溫孵法，較其他的體外代謝方法的酶制備技術(shù)簡(jiǎn)單，代謝過(guò)程快，結(jié)果重現(xiàn)性好，易大量操作，便于積累代謝樣品供結(jié)構(gòu)研究。3、藥物代謝的離體試驗(yàn)方法（4）肝細(xì)胞體外培養(yǎng)法（5）轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系法（6）“人源化”整體動(dòng)物模型法（五）藥物排泄實(shí)驗(yàn)1、尿排泄實(shí)驗(yàn) 取實(shí)驗(yàn)動(dòng)

19、物，置于代謝籠內(nèi)，預(yù)先收集空白尿樣后，收集給藥后不同時(shí)間段的尿液。然后，測(cè)定尿液中藥物或其代謝物濃度，評(píng)價(jià)藥物經(jīng)尿排泄的速率與程度。當(dāng)藥物或其代謝物以葡萄醛酸結(jié)合物、硫酸酯等形式排泄入尿時(shí)，可以用酶進(jìn)行結(jié)合物的水解，而后進(jìn)行測(cè)定。尿排泄實(shí)驗(yàn)常用方法 代謝籠法、導(dǎo)尿法、壓迫膀胱法、輸尿管插管法、膀胱插管法。2、膽汁排泄實(shí)驗(yàn)對(duì)膽總管進(jìn)行插管可獲得膽汁。以大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行膽汁排泄實(shí)驗(yàn)。分時(shí)段收集一定體積的膽汁，測(cè)定膽汁中藥物或其代謝物濃度，評(píng)價(jià)藥物經(jīng)膽汁排泄的速率與程度。對(duì)結(jié)合型藥物或其代謝物，仍可用酶水解方法水解后，再測(cè)定藥物的濃度。3、糞排泄實(shí)驗(yàn)用代謝籠，可以分離、收集糞樣，經(jīng)處理后，可以測(cè)定

20、糞便中藥物或其代謝物濃度，評(píng)價(jià)藥物經(jīng)糞排泄的速率與程度。第二節(jié) 新藥開(kāi)發(fā)研究中的藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)藥品注冊(cè)管理辦法于2007年6月18日經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局局務(wù)會(huì)審議通過(guò)，現(xiàn)予公布，自2007年10月1日起施行。 中藥、天然藥物注冊(cè)分類及申報(bào)資料要求 化學(xué)藥品注冊(cè)分類及申報(bào)資料要求 一、藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)在新藥開(kāi)發(fā)研究中的作用臨床前藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的目的：揭示新藥在動(dòng)物體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，闡明藥物吸收、分布、代謝和排泄等過(guò)程的動(dòng)力學(xué)特征，并根據(jù)數(shù)據(jù)模型提供重要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，為藥理學(xué)、毒理學(xué)、藥效學(xué)、臨床試驗(yàn)，以及臨床合理用藥提供參考資料。通過(guò)對(duì)先導(dǎo)化合物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)，初步判斷是否具有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)

21、研究的必要；通過(guò)對(duì)藥動(dòng)學(xué)規(guī)律的揭示，為藥物劑型選擇、劑型設(shè)計(jì)提供依據(jù)，并提供制劑體內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)與方法；通過(guò)測(cè)定體液、組織和器官中的藥物濃度，分析藥物效應(yīng)、藥物毒性與體內(nèi)濃度間的相關(guān)關(guān)系，進(jìn)行藥物體內(nèi)分布與藥物效應(yīng)靶器官相關(guān)性分析；臨床前藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的作用：通過(guò)對(duì)藥物在不同種屬動(dòng)物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)，了解藥物體內(nèi)過(guò)程的種屬差異，為藥物藥效種屬差異的分析提供依據(jù)；通過(guò)對(duì)動(dòng)物體內(nèi)過(guò)程規(guī)律的認(rèn)識(shí)，為新藥臨床藥動(dòng)學(xué)、藥效學(xué)、毒理學(xué)研究及臨床應(yīng)用提供依據(jù)。臨床前藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的作用：一、藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)在新藥開(kāi)發(fā)研究中的作用臨床藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的目的：旨在了解新藥在人體內(nèi)吸收、分布和消除的動(dòng)力學(xué)規(guī)律與

22、特點(diǎn)，揭示疾病對(duì)藥物體內(nèi)過(guò)程的影響規(guī)律，探討聯(lián)合用藥的藥物體內(nèi)過(guò)程相互作用等。二、新藥臨床前體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)的基本內(nèi)容與要求（一）試驗(yàn)藥品質(zhì)量穩(wěn)定且與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究所用試驗(yàn)藥品一致。一方面可用于指導(dǎo)藥物的處方篩選和制備工藝優(yōu)化；另一方面可用于揭示新藥的藥動(dòng)學(xué)特征及其與藥物效應(yīng)間的相關(guān)關(guān)系。（二）臨床前藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià)常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有犬、小鼠、大鼠、家兔和豚鼠。藥物動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)從同一動(dòng)物多次取樣，盡量避免合并樣本的研究方法。創(chuàng)新藥物應(yīng)選用兩種動(dòng)物，其中一種為嚙齒類動(dòng)物，另一種為非嚙齒類動(dòng)物；其他類別藥物，可選用一種動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；口服藥不宜選用家兔等食草類動(dòng)物。同一動(dòng)物多次采樣的試驗(yàn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少應(yīng)有3

23、只動(dòng)物的給藥數(shù)據(jù)。當(dāng)不得不采用合并樣本的研究方法時(shí)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少應(yīng)有5只動(dòng)物的給藥數(shù)據(jù)。在進(jìn)行速釋、緩釋、控釋制劑藥動(dòng)學(xué)研究時(shí)，原則上應(yīng)用成年beagle犬或雜種犬，其體重差值一般不超過(guò)1.5kg。至少應(yīng)設(shè)3個(gè)劑量組，其中1個(gè)劑量應(yīng)相當(dāng)于藥效學(xué)試驗(yàn)的有效劑量，高劑量一般接近于該藥物的最大耐受量，以了解藥物在體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過(guò)程是否有非線性動(dòng)力學(xué)特征。劑量取樣點(diǎn)應(yīng)兼顧吸收相、分布相和消除相。取樣點(diǎn)通?？砂才?-13個(gè)，即吸收相應(yīng)取樣2-3次，達(dá)峰濃度處取樣2-3次，分布相取樣2-3次，消除相取樣3-4。取樣一般持續(xù)到3-5個(gè)半衰期或血藥濃度Cmax的1/10-1/20。數(shù)據(jù)處理采用適宜的房室模型或

24、非房室模型方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。（三）組織分布試驗(yàn)必須注意取樣的代表性，如僅取1/4或1/2個(gè)腎臟時(shí)，應(yīng)注意取樣的對(duì)稱性。試驗(yàn)中，若發(fā)現(xiàn)藥物在某組織的藥物濃度較高，則應(yīng)進(jìn)一步研究藥物在該組織的消除情況。（四）血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)選用一種方法至少應(yīng)進(jìn)行三個(gè)濃度（應(yīng)包括有效濃度在內(nèi)）的血漿蛋白結(jié)合率試驗(yàn)，每個(gè)濃度至少重復(fù)試驗(yàn)3次，以了解血漿蛋白結(jié)合率是否有濃度依賴性。（五）排泄試驗(yàn)至少應(yīng)有5只動(dòng)物的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。選定一個(gè)有效劑量，給藥后按一定的時(shí)間間隔分段收集全部的尿液、糞便，直至收集到藥物已排盡為止。對(duì)尿、糞便應(yīng)每隔一定時(shí)間收集1次，以測(cè)定藥物經(jīng)此途徑排泄的速率。（六）結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化試驗(yàn)在創(chuàng)新藥物

25、的生物轉(zhuǎn)化試驗(yàn)中，微量代謝物的分離、純化及結(jié)構(gòu)確證是十分困難的。三、新藥臨床藥動(dòng)學(xué)研究的基本內(nèi)容與要求（一）新藥臨床藥動(dòng)學(xué)研究的基本內(nèi)容在新藥期臨床試驗(yàn)中，應(yīng)進(jìn)行健康受試者的藥動(dòng)學(xué)研究，包括單次給藥的藥動(dòng)學(xué)研究和多次給藥的藥動(dòng)學(xué)研究。在新藥期或期臨床試驗(yàn)時(shí)，臨床藥動(dòng)學(xué)研究?jī)?nèi)容包括新藥在相應(yīng)患者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究，以及單次給藥和多次給藥的藥動(dòng)學(xué)研究，以了解病理狀態(tài)對(duì)新藥體內(nèi)過(guò)程的影響。（二）新藥臨床藥動(dòng)學(xué)研究的基本要求1、臨床藥動(dòng)學(xué)研究的GCP要求保證藥物臨床試驗(yàn)過(guò)程規(guī)范，結(jié)果科學(xué)可靠，保護(hù)受試者的權(quán)益，并保障其安全。課題研究方案必須經(jīng)負(fù)責(zé)該課題研究單位的倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。2、受試藥物的要求應(yīng)在符合

26、GMP條件的車(chē)間制備，制備過(guò)程應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格執(zhí)行GMP的要求。申請(qǐng)人對(duì)臨床研究用藥物的質(zhì)量負(fù)有全部責(zé)任。3、受試者的選擇在新藥期臨床試驗(yàn)中，當(dāng)藥物毒性過(guò)大，有可能對(duì)受試者身心造成損傷時(shí)，選擇健康受試者是不適宜的，應(yīng)選用患有相應(yīng)疾病的患者作為受試者，并在期或期臨床試驗(yàn)時(shí)完成，如細(xì)胞毒性類抗腫瘤藥物、抗心律失常藥物、具有較大依耐性的鎮(zhèn)痛藥等。4、藥物劑量確定根據(jù)期臨床耐受性試驗(yàn)結(jié)果和期臨床試驗(yàn)擬采用的治療劑量，可確定臨床藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)的給藥劑量，通常要求2-3個(gè)劑量組。5、藥時(shí)曲線的數(shù)據(jù)測(cè)定試驗(yàn)期間受試者均應(yīng)在監(jiān)護(hù)室內(nèi)接受觀察，并避免劇烈活動(dòng)，禁止飲茶、咖啡和含咖啡飲料。單劑量試驗(yàn)時(shí)，12例以上受試者，在試

27、驗(yàn)前1d的晚上統(tǒng)一進(jìn)清淡飲食，進(jìn)入監(jiān)護(hù)室或病房，而后禁食，不禁水，過(guò)夜。次日晨，受試者接受空腹給藥試驗(yàn)，藥物用150-200ml溫開(kāi)水送服，2h后統(tǒng)一進(jìn)早餐，4h以后統(tǒng)一進(jìn)午餐。6、藥時(shí)曲線數(shù)據(jù)處理一般選用房室模型或非房室模型法進(jìn)行處理，并估算新藥的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。單次給藥需獲得的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)包括Ka，Tmax ,Cmax , AUC, V, K, t1/2和Cl等。7、新藥臨床藥動(dòng)學(xué)研究報(bào)告提供充分的生物樣本檢測(cè)方法的建立與評(píng)價(jià)結(jié)果；提供各個(gè)受試者的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)及曲線圖、血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)的平均值及曲線；提供各受試者的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及平均值；對(duì)多次給藥與單次給藥的藥動(dòng)學(xué)規(guī)律與特點(diǎn)進(jìn)行比較，并對(duì)新藥臨床藥動(dòng)學(xué)規(guī)律和特點(diǎn)進(jìn)行扼要的討論和小節(jié)。第三節(jié) 藥物體內(nèi)過(guò)程評(píng)價(jià)中的生物樣品檢測(cè)方法一、生物樣品