纖維素酶在葛根有效成分提取中的應(yīng)用

1、纖維素酶在葛根有效成分提取中的應(yīng)用一、總設(shè)計(jì)思路發(fā)現(xiàn)問題，結(jié)合已有成果，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)分析總結(jié)查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料含量檢測、成分分析設(shè)計(jì)工藝流程確定研究對象二、選題基礎(chǔ)有效成分植物藥材的有效成分被包裹在細(xì)胞壁中細(xì)胞壁主要成分是纖維素，大量的纖維素阻礙了有效成分的溶出。細(xì)胞壁纖維素酶解提取過程 酶解破壁 有效成分的提取 纖維素酶解提取 提高提取率加速有效成分釋放將植物組織溫和分解選用纖維素酶4.3.2.1.酶解優(yōu)點(diǎn)兩種提取方法的比較萃取時(shí)間長需要使用大量溶劑受植物細(xì)胞壁纖維組織的 屏障作用提取率較低（尤其是以富含纖維素的根、莖、皮類藥材為原料提取時(shí),纖維素的屏障作用更為突出） 酶處理法可使細(xì)胞壁發(fā)生不同程

2、度的改變,如軟化、膨 脹和崩潰等可改變細(xì)胞壁的通透性有利于壁內(nèi)的藥效成分溶出,從而提高藥效成分的提取率。 .傳統(tǒng)的水、酸、堿、有機(jī)溶劑提取方法 三、確定實(shí)驗(yàn)對象葛根是一味常用的藥材，為豆科植物野葛或甘葛藤干燥根。葛根多為根部用藥，常為斜切或縱切的塊片，其切面粗糟，纖維性強(qiáng)，對根部入藥藥材酶解法提取的研究有較好的代表性，因此本次實(shí)驗(yàn)選取野葛根藥材最為研究對象進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。葛根素（葛根黃素）1.大豆黃酮（大豆苷元）2.大豆黃酮苷（大豆苷）3.非黃酮類成分如尿囊素等4.葛根主要含黃酮類化合物，含量達(dá)12%四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1. 制備供試液 20g葛根粗粉 加入100mL乙醇回流提取1.5h， 抽濾（再重復(fù)

3、兩次）藥 渣 60%乙醇回流提取4次 合并乙醇溶液，減壓濃縮浸 膏 用少量甲醇溶解， 除去不溶物定容于100mL量瓶中（一）測定纖維素酶對葛根總黃酮的影響 分別取5mL甲醇溶液兩份（A,B） A：用甲（乙）醇定容至25ml作為對照組； B：將甲醇蒸干15mLpH4.8的磷酸鹽緩沖液超聲溶解于25mL三角瓶中加入75mg纖維素酶 50水浴2.5h，水浴蒸干用甲醇超聲溶解，定容于25mL量瓶中。 .處理1.薄層色譜分析.液相或液質(zhì)聯(lián)用3.檢測 按照2005年中華人民共和國藥典一部葛根項(xiàng)下方法進(jìn)行薄層色譜檢查和HPLC法進(jìn)行比較。提取物未經(jīng)任何處理提取物加酶處理3小時(shí)測定結(jié)果通過薄層比較未發(fā)現(xiàn)兩實(shí)驗(yàn)

4、組的斑點(diǎn)有明顯變化 ；通過高效液相測定，對照組與實(shí)驗(yàn)組的譜圖上顯示峰數(shù)目、保留時(shí)間等參數(shù)均有很大變化（二）測定纖維素酶對葛根的作用2g葛根粗粉 25mL水 30mL甲醇超聲25min,過濾 藥渣 加入30mL甲醇超聲25min 合并甲醇溶液 蒸干 用甲醇溶解定容于25mL量瓶中 2g葛根粗粉 緩沖液25mL100mg纖維素酶 50水浴5h 同法處理定容于25mL量瓶中 1.薄層色譜分析2.總黃酮含量測定3.液相或液質(zhì)聯(lián)用檢測 原藥材未經(jīng)酶解原藥材經(jīng)酶解后測定結(jié)果通過薄層比較未發(fā)現(xiàn)兩實(shí)驗(yàn)組的斑點(diǎn)有明顯變化 ；通過高效液相測定，對照組與實(shí)驗(yàn)組的譜圖上顯示峰數(shù)目、保留時(shí)間等參數(shù)均有很大變化 由于缺少

5、對照品，總黃酮含量并未測定，因此無法確定提取率是否增加實(shí)驗(yàn)特色實(shí)驗(yàn)設(shè)置了兩個(gè)對照組進(jìn)行比較分析，較全面的考慮了可能的影響因素： 這是本實(shí)驗(yàn)研究的獨(dú)特性此外，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用三種檢測方法分別進(jìn)行對照分析，這與已經(jīng)發(fā)表的研究文獻(xiàn)相比也具有良好的準(zhǔn)確性 酶解對于藥材有效成分破壞的影響1.酶解對藥材有效成分提取率的影響2.五、前期工作小結(jié)在前期實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用薄層層析法對各供試品 進(jìn)行檢測分析，顯示結(jié)果與對照組相比較斑 點(diǎn)無明顯變化。這與相應(yīng)文獻(xiàn)記載相符合。但是樣品用高效液相測定之后發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，對照組與實(shí)驗(yàn)組的譜圖上顯示峰數(shù)目、保留時(shí)間等參數(shù)均有很大變化。因此我對文獻(xiàn)中纖維素酶解沒有破壞葛根的有效成分這一說法存在質(zhì)疑。 六、后續(xù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 1.用分光光度法對提取物進(jìn)行含量測定，以確 定酶