免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2011

1、第三節(jié)免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫細(xì)胞的種類與特征免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫細(xì)胞分離的臨床意義免疫系統(tǒng)的組成中樞：胸腺、骨題免疫髓官淋巴結(jié)、脾臟、粘膜相關(guān)淋巴組織等免疫柔統(tǒng)免疫細(xì)腿：淋巴細(xì)腿、單核巨噬細(xì)跑、粒細(xì)腮、DC、肥大細(xì)腮、NK細(xì)腹免疫分子：擾體.補(bǔ)體、細(xì)腮囲子、MHC、TCR、粘附分子等定義：人類在種菜迸丫匕過程中形炭萌、經(jīng)遺傳獲霄萌免疫，遇病原體后莒先養(yǎng)逑速趙彷N乍用萌免疫血普組欣：皮U粧膜及茸產(chǎn)將、細(xì)脛（驅(qū)細(xì)腥、單核丟噬細(xì)腿.DC.NKT、中幢粒細(xì)跑、yST細(xì)脛、B1細(xì)胞丿等特點(diǎn)：先天具有.無濟(jì)伏期.無特弄無記憶牲乍用時(shí)同：096小時(shí)Adaptiveimmunity定義：機(jī)體在圭満過程中,丫

2、接觸擾原牲將質(zhì)而獲浮的免疫。TvB細(xì)腮諛列病原體眈分后產(chǎn)主的免疫龐答特涼：后天獲語、有潛伏期、特弄牲，記憶牲賽與細(xì)腮:T細(xì)脛和B細(xì)脛趙乍用時(shí)間：晚,般在感辭后45天發(fā)揮乍用一、免疫細(xì)胞的種類與特征免疫細(xì)胞的分類凡參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞，通稱為免疫細(xì)胞(immunocyte),其中包括淋巴細(xì)胞.單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞.NK細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞DC.肥大細(xì)胞.粒細(xì)胞等根據(jù)免疫細(xì)胞在免疫應(yīng)答中的作用可分為三類免疫活性細(xì)胞(immunocompetentcells)抗原提呈細(xì)胞(antigen-presentingcells，APC)其他細(xì)胞淋巴細(xì)胞（T、B細(xì)胞）樹突狀細(xì)胞NK細(xì)胞單核細(xì)胞/巨噬細(xì)

3、胞中性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞肥大細(xì)胞W紅細(xì)胞血小板免疫細(xì)胞種類Immunology免疫細(xì)胞的起源與分化粒/巨噬細(xì)胞前體細(xì)胞巨核/紅細(xì)胞前體細(xì)胞共同淋巴樣前體細(xì)胞共同髓樣前體細(xì)胞巨核細(xì)胞有核紅細(xì)胞Lz效應(yīng)1匕XZ細(xì)胞漿細(xì)胞活化的T細(xì)胞T細(xì)胞B細(xì)胞粒細(xì)胞（或多形核白細(xì)胞;驚：驚：囂未誠體單核細(xì)胞專囂0肥大細(xì)胞巨噬細(xì)胞未成熟樹突狀細(xì)胞血小板紅細(xì)胞1/淋巴結(jié)0成熟樹突秋細(xì)胞免疫活性細(xì)胞具有待異性抗原受體.在接受抗原刺激下發(fā)生克隆性活化、增值和分化，產(chǎn)生適應(yīng)性免疫應(yīng)答(adaptiveimmuneresponse)6&細(xì)胞。這類細(xì)胞是機(jī)體產(chǎn)生待異性免疫應(yīng)答的包括T細(xì)胞、I?(aniigenpre

4、sentingce_LAPC)皆H憐asm*芾#列弄常搟鋼粛如廉爭flff満8松淞轎雷褂。目掛-frM刪SAPC鑿活W開弗冷溺對浴并搟津B密津其他細(xì)胞自然殺傷（NK）細(xì)胞，肥大細(xì)胞,1中性粒細(xì)胞，嗜破性粒細(xì)胞，血小板等NK細(xì)胞肥大細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜中性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞血小板免疫細(xì)胞的特征免疫細(xì)胞的特征1、免疫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征理化性狀2、免疫細(xì)胞的表面分子特征：白細(xì)胞分化抗原指血細(xì)胞分化成熟為不同譜系.分化的不同階段以及細(xì)胞活化過程中，出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面標(biāo)記分子聚類分化群（分化抗原，clusterofdifferentiation,CD）：應(yīng)用單克隆抗體鑒定為主的方法，將來自不同實(shí)驗(yàn)室的單克

5、隆抗體所識別的同一分化抗原稱為CD抗原CD抗原常用于鑒定和檢測淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志人CD分組分組CD(舉例)T細(xì)胞CD2、CD3.CD4.CDS.CD8、CD28.CD152(CCD154(CD40L).CD272(BTLA).CD278(ICOS)CD294(CRTH2)B細(xì)胞CD19CD20、CD21CD40CD79a(Iga)CD79b(Igp)CD80(B7-1).CD86(B7-2).CD267(TACI)、CD268(BAFFR)CD269(BCMA).CD307(IRTA2)髓樣細(xì)胞CD14.CD35(CR1)CD64(FcyRI)CD256(APRIL)CD257(BAFF).CD

6、312(EMR2)血小板CD36.CD41(整合蛋白allb).CD42a-CD42dCD51(整合蛋白av八CD61(整合蛋白卩3八CD62P(P選凝素)NK細(xì)胞CD16(FcyRIII).CD56(NCAM-1).CD94.CD158(KIR).CD161(NKR-P1A).CD314(NKG2D)CD335(NKp46)、CD336(NKp44)、CD337(NKp30)非譜系CD30.CD32(FcyRII).CD45RA.CD45RO.CD46(MCP)CD55(DAF).CD59.CD252(OX40L).CD279(PD1)CD281-CD284(TLR1-TLR4).CD289

7、(TLR9).CD305(LAIR-l).CD306(LAIR-2).CD319(CRACC)黏附分子CDlla-CDllcCD15.CD15s(sLx).CD18(整合蛋白卩2).CD29(整合蛋白卩1).CD49a-CD49f.CD54(ICAM-1).CD62E(E整合蛋白).CD62L(L整合蛋白人CD324(E-cadherin).CD325(N-cadherin)CD326(EpCAM)細(xì)胞因子/趨化因子受體CD25(IL-2Ra).CD95(Fas).CD116-CDwl37.CD178(FasL)、CD183(CXCR3).CD184(CXCR4).CD195(CCR5)CD2

8、61-CD264(TRAILR1-TRAILR4)內(nèi)皮細(xì)胞CD105(TGF-pRIII)CD106(VCAM-l).CD140(PDGFR)CD144(VE鈣黏蛋白人CD299(DCSIGN-related).CD309(VEGFR2)JAM1(CD321)JAM2(CD322)碳水化合物結(jié)構(gòu)樹突狀細(xì)胞CD15u.CD60a-CD60c.CD75.CDw327-CDw329(siglec6.7.9)CD85(ILT/LIR).CD273(B7DC)CD274-CD276(B7H1-B7H3)CD3O2(DCL1)CD303(BDCA2).CD304(BDCA4)干細(xì)胞/祖細(xì)胞基質(zhì)細(xì)胞CD13

9、3、CD243CD292(BMPR1A).CD293(BMPR1B).CD331-CD334(FGFR1-FGFR4).CD339(Jagged-l)紅細(xì)胞CD233-CD242分組人CD分組CD（舉例）（五）NK細(xì)胞的分離技術(shù)二免疫細(xì)胞的方離技術(shù)（一）夕卜周血單個(gè)枚細(xì)胞分離T淋巴細(xì)胞及其亞群的分離（三）B淋巴細(xì)胞及其亞群的分離）Mo/M0分離技術(shù)免疫細(xì)胞分離基本原理不同纟田胞密度不同不同纟田胞表面生物學(xué)特4生不同不同纟田胞表面分化抗原不同免疫細(xì)胞的分離技術(shù)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)的可以采取下列不同的分離方法h密度樺度離心法2、黏附分離法（尼龍毛法、貼壁法.親和板法）3、璉性分離法4、熒光澈活分離法5、

10、為*（花環(huán)沉降法）poojqejaqdudd)碼(OWSdsjpojuapnuououi疇溶4審Btef*星令酬晦的責(zé)珂留匕（一）不同細(xì)胞密度不同單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單枚細(xì)胞）的密度為1.077左右人的紅細(xì)胞密度為1.093,1.077粒細(xì)胞密度為1.092,1.077血小板密度輔助性T細(xì)胞HelperTcells，Th效應(yīng)T細(xì)胞EffectorTcells，TE細(xì)胞毒T細(xì)胞CytotoxicTlymphocytes，CTLA遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)T細(xì)胞DelayedTcells,Td初始T細(xì)胞NaiveTcellsA調(diào)節(jié)性T細(xì)胞RegulatoryTcells,Tr記憶T細(xì)胞MemoryTcell

11、s,Tm抑制性T細(xì)胞SuppressorTcells,輔助性T細(xì)胞HelperTcells，ThThl:細(xì)胞免疫Th2：體液免疫Thl7：炎癥反應(yīng)輔助性T細(xì)胞HelperTcells，ThTh1%pMHCL4Th2L17IFNGIL4IL-237IL-23ROIL-12IL-12R初始T八柬激ThOCXCR3a31尸川GpMHCTCRIL-4IFN-yR(Stat6T-bepribi1FNGIFNyIL-4R亠IFN-yTNF-a細(xì)胞免疫CCR3.4.8IL-4IL-5IL-13體液免疫IL-17IL-17FTh17輔助性T細(xì)胞HelperTcells，Th濾泡輔助性T細(xì)胞（Tfollicul

12、arhelper,Tfh）通過細(xì)胞因子IL-10和IL-21來調(diào)節(jié)B細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)性T細(xì)胞RegulatoryTcells,TrCD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的分化Foxp+T調(diào)節(jié)細(xì)胞可以從胸腺直接分化，也可在TGF-p作用下從Foxp3-T細(xì)胞分化。（二）T淋巴細(xì)胞及其亞群的分離玫瑰花結(jié)法（E花環(huán)沉降法）尼龍毛柱分離法淘洗法免疫磁珠法流式細(xì)胞術(shù)分選法玫瑰花結(jié)法人T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)CD2分子,即綿羊紅細(xì)胞受體，B細(xì)胞則無。在適當(dāng)?shù)臈l件下，可與綿羊紅細(xì)胞(SRBC)結(jié)合，形成玫瑰花結(jié)(rosette)個(gè)為紅細(xì)胞環(huán)繞T細(xì)胞，形似花環(huán)，所以又稱E花環(huán)(Erosette)該實(shí)驗(yàn)常用于臨床檢

13、測人外周血T淋巴細(xì)胞的數(shù)量和比例，由此可間接反映機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀況方法淋巴細(xì)胞+SRBC懸液-37C水浴10min-低溫低速離心fT細(xì)胞形成E花環(huán)而沉于管底懸液中為B細(xì)胞。尼龍毛柱分離法A混合單個(gè)核細(xì)胞懸液在通過尼龍毛柱時(shí)，B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞和一些輔助細(xì)胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而T細(xì)胞不與尼龍毛粘附的特性，這是獲得富含T細(xì)胞群的有效方法優(yōu)點(diǎn)簡單，快速，經(jīng)濟(jì)，尼龍毛可反復(fù)利用可分離大量細(xì)胞細(xì)胞不會被激活，可用于功能測定缺點(diǎn)純度不髙耗時(shí)淘洗法也叫親合板結(jié)合分離法(immunepanningisolation)。A利用親合層析和抗體固相包被原理，將相應(yīng)抗體結(jié)合于塑料平板上，由于各種淋巴細(xì)

14、胞亞群具有不同抗原性的特點(diǎn)和表面標(biāo)志，加細(xì)胞懸液后，凡抗原陽性的細(xì)胞則與相應(yīng)的固相抗體結(jié)合，抗原陰性的細(xì)胞可從未吸附的細(xì)胞懸液中獲取同理若用特異性抗原交聯(lián)于塑料板上，則可分離得到具有特異抗原受體的淋巴細(xì)胞。但淋巴細(xì)胞受體與特異抗原或抗體連接后有可能引起細(xì)胞激活，因此，凡欲去除細(xì)胞懸液內(nèi)某一細(xì)胞亞群時(shí)，本法更合適親和板分離淋巴細(xì)胞示意圖與板匕抗體對應(yīng)的喪面抗原洶巴細(xì)胞混合液加入板屮IJ.洗滌板上除0其他細(xì)胞T淋巴細(xì)胞淘洗分離原理利用丁淋巴細(xì)胞表面某種標(biāo)志性抗原與包被在固相載體上的特異性單抗結(jié)合，將T細(xì)胞與其他細(xì)胞分離的方法方法（以CD4+T細(xì)胞為例）1.羊抗兔ig包被平皿2.CD4一抗培育T細(xì)胞

15、，倒入平皿，4C孵育1小時(shí);3.收集未粘附的CD4-T細(xì)胞PBS漂洗非特異吸附的CD4-T細(xì)胞收集粘附的CD4+T細(xì)胞，可以用刮板刮取并在顯微鏡下觀察免疫磁珠法(Magneticactivatedcellsorting,MACS)免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細(xì)胞得以分離免疫磁珠細(xì)胞分選原理直接標(biāo)記和間接標(biāo)記ENAiCMMtNrLMAMilO忡EVALUATIOH!OuCATIO*iEXHKTlSE陽性選擇

16、法（正選）OO陰性選擇法（負(fù)選）正選和負(fù)選的比較正選優(yōu)點(diǎn)只需要一種抗體分離出的細(xì)胞純度高對于比例小的細(xì)胞群，正選容易得到高純度缺點(diǎn)需要特異性附靶細(xì)胞標(biāo)記可能引起細(xì)胞活化負(fù)選需要的細(xì)胞沒有被抗體等標(biāo)記對需要的細(xì)胞，不需要特異性的細(xì)胞標(biāo)記需要多種抗體標(biāo)記不需要的細(xì)胞It!16TTof免疫磁珠細(xì)胞分選裝置Affiiltcnyibiotac.ccn盲刨區(qū)|P百復(fù)嚇文件Si(l奩君牧慈工具肋電）|E8出|免疫爲(wèi)h.從年HXCS.MACS.厳MAIS.AkacsANg.bPart.Ac-;ACDe-AsaAcub七刪:a.MACSCellSeparationReagentsIforhumancellsIT

17、cellsICD4*TcellschonaclarquaccCCD4+Tcells一VindovsInternetExplorerMACSC?CellSepardtionReagentsforhumancellsStemandpregenixorcellsTcellsPanTcellsACD獷TcellsCDe*7cells0Regulator/TcellsOthertcellsubsetsNKcellsBCellsMcnoc/tesDendriticcell;Antigen-presentingcellsGranulocytes3ndmyeloidcellsLeukocytesErythro

18、idcellsMegfloryocytesandplateletsEndothelialcell;EpithelialcellsFibroblastsNeuralcellsCytckirc-producingcellsTumorcellsFcrcccotorblockingfornon-humanprimatecellsformousecellsforratcellsforindrectmagneticlabalirgforapoptcticanddeadcellsforisolaricnofmitochondriaMACSCellSeparatiorColumnsMACSSep33torsa

19、utcHACSCellSeparationCD/1MicroBeadsProductApplicationsordernoCD4MicroBcads,humanPositiveselectionofhuman130045101Thelpercells;deplecicnofhumanThelpercells,mcnDcyt*srderdriticcellsWholeBloodCD4MicroRefldsProductApplicatioiifiorderno.WholeBloodCD4IsclatonM84callsfrom130090877MicroBcads,humanhumanwhole

20、bleedandbonemarrowCD4MultiSortKitProductApplicationsorderno.CD4MultiSortKitrhumanIsclatondFhum3rThelper130-055101cellsubsetsCD4TCellIsolationKitilProductApplicationsorderno.CD4TCellIsolationKitII,Isclobonofuntouded130-091-155humanhumanThelpercellsPomPBMCsbydepletiorcfnor-U：乙*TcellsNdiveCD4TCellIsold

21、tlociKitUProductApplicationsorderno.NaiveCD4rcellIsolationIsclatonoruntouched130094131KitIIrhuinanhumannav1helFerCllsFpmEHCsbydepletionorron-CD4TcellsondmemoryTcellsMemoryCD4*TCellIsolationKitProductApplicationsordernoMemoryCD4*TCellIsoldliunTsclationofuncoucbed130-091-893Kit,humanhum亦memoryThelperc

22、ellsfrom=BMCsbydeplericrcfncn-CD-lTcellsandnaiveTcellsCD”centralMemoryICellisolationKitToolboxiSiCon-aciHchSharePrintthispageMyfavoritesYourcurrentfavoritelistisempty.SeorchthiswebsiteScorchAdvancedsearch免疫磁珠法陽性選擇T細(xì)胞將特異性抗T細(xì)胞表面分子的單克隆抗體與磁性小珠形成免疫磁珠，用這種免疫磁珠從PBMC中結(jié)合T細(xì)胞在磁場中，結(jié)合T細(xì)胞的免疫磁珠固定了，未結(jié)合的其它細(xì)胞被洗脫下來撤離磁場

23、，再從免疫磁珠上洗脫T細(xì)胞免疫磁珠法陰性選擇T細(xì)胞免疫磁珠法陰性選擇T細(xì)胞將多種特異性抗非T細(xì)胞表面分子的單克隆抗體與磁性小珠形成免疫磁珠，用這種免疫磁珠從PBMC中結(jié)合非T細(xì)胞在磁場中，結(jié)合其它細(xì)胞的免疫磁珠固定了，未結(jié)合的T細(xì)胞被洗脫下來免疫磁珠法陰性選擇CD4+T細(xì)胞實(shí)例CD4+TCellIsolationKitIICD4-PEPBMCbeforeseparationCD4-PEUntouchedCD4+TcellsoHLLeAQOggn迅kbbchngofun*wonkdcclkwithbiotinyhtedanbody44Tcdlsareretainedin3MACS*Columnp

24、lacedInaMACSSeparator.CD4*T11$throughChetolumnandare-collectedastheensfifhed,ufihbalwlcedfraction.Non-CD4+TcellsinPBMC,i.e.,CD8+Tcells,ylbTcells,Bcells,NKcells,dendriticcells,monocytes,granulocytes,anderythroidcells,areindirectlymagneticallylabeledbyusingacocktailofbiotin-conjugatedantibodiesagainst

25、CD8,TCRyCD19,CD56,CD14,CD16,CD36,CD123,andCD235a(glycophorinA).ThesecellsaresubsequentlymagneticallylabeledwithAnti-BiotinMicroBeadsfordepletion.Thereby,highlypureCD4+Tcellsareobtained熒光激活細(xì)胞分離法(fluorescenceactivatedcellsorterFACS)FACS用途：用流式細(xì)胞儀對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的_門技術(shù)原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個(gè)細(xì)胞的液滴，在

26、激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計(jì)算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%流式細(xì)胞儀工作原理示意圖分選樣品一01=18FSCCD5PerCP方法（以CD4+T細(xì)胞為例）PBMC用PBS洗滌，低溫離心棄上清;加入含AB血清的PBS封閉，4C孵育10分鐘;加入適量的PerCP-CD3，APC-CD4抗體，4C孵育30分鐘;PBS洗滌，低溫離心棄上清并用RPMI1640重懸;流式細(xì)胞術(shù)分選;（三）B淋巴細(xì)胞及其亞群的分離A如果僅考慮PBMC中T細(xì)胞和B細(xì)胞，那么所有從PBMC中分離T淋巴細(xì)胞的方法實(shí)際上也可用于分離B

27、淋巴細(xì)胞。B細(xì)胞表面標(biāo)志SmlgFc受體、補(bǔ)體受體.EB病毒受體，部分CD分子是B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以Smlg為B細(xì)胞所特有，是鑒定B細(xì)胞可靠的指標(biāo)CD19/CD5分子：可將B細(xì)胞區(qū)分為B1細(xì)胞和B2細(xì)胞，B1細(xì)胞為CD19和CD5雙陽性，而B2細(xì)胞僅為CD19陽性，B2細(xì)胞為通常所指的B細(xì)胞去除Mo/M0法終濃度5mML-leucinePMBC,混勻，室溫35smethylester(L-LME)重懸離心，400g,10min,棄上清，PBS洗滌細(xì)胞重懸于25mlRPMI除細(xì)胞團(tuán)塊1640培養(yǎng)基，過尼龍毛柱，去玫瑰花結(jié)法去除T細(xì)胞抗CD19或CD20單抗標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢驗(yàn)B細(xì)胞純度免

28、疫磁珠法陽性選擇B細(xì)胞免疫磁珠法陽性選擇B細(xì)胞將特異性抗B細(xì)胞表面分子CD19的單克隆抗體免疫磁珠與PBMC混合，用這種免疫磁珠從PBMC中結(jié)合B細(xì)胞在磁場中，結(jié)合B細(xì)胞的免疫磁珠固定了，未結(jié)合的其它細(xì)胞被洗脫下來撤離磁場，再從免疫磁珠上洗脫CD19+B細(xì)胞將多種特異性抗非B細(xì)胞表面分子的單克隆抗體與磁性小珠形成免疫磁珠，用這種免疫磁珠從PBMC中結(jié)合非B細(xì)胞在磁場中，結(jié)合其它細(xì)胞的免疫磁珠固定了，未結(jié)合的B細(xì)胞被洗脫下來免疫磁珠法陰性選擇B細(xì)胞實(shí)例CO19PEPBMCbeforeseparationudUFWco二TfCD19PEUntouchedBcellsoda(D4eyBCellIso

29、lationKitIIMagneticIdbellngofunwarnedcellsandAnti*BiotinMicrofteadsNon-8clKretainedin.aMACSColumnplxedinaMACSSeparator.BcellsjMSiihrough(hiecatumndnidarecolltM45thnrkMd,unbteldcollfraction.Non-Bcells,i.e.9Tcells,NKcells,monocytes,dendriticcells,granulocytes,platelets,anderythroidcells,areindirectlym

30、agneticallylabeledusingacocktailofbiotinylatedCD2，CD16,CD14,CD36,CD43,andCD235a(glycophorinA)antibodies.ThesecellsaresubsequentlymagneticallylabeledwithAnti-BiotinMicroBeadsfordepletionHighlypureBcellsareobtainedbydepletionofmagneticallylabelednon-Bcells（四）Mo/M0分離技術(shù)A單核巨噬細(xì)胞包括骨髓中的前單核細(xì)胞、外周血中的單核細(xì)胞、以及組織內(nèi)

31、的巨噬細(xì)胞（M（p）oM（p來源于血液中的單核細(xì)胞，而單核細(xì)胞又來源于骨髓中的前體細(xì)胞。Mo/M0細(xì)胞*表面標(biāo)志A表面標(biāo)志抗原：CD14,但CD14也表達(dá)在粒細(xì)胞。CD14主要強(qiáng)表達(dá)在單核-巨噬細(xì)胞，弱表達(dá)在粒細(xì)胞上黏附法無血清RPMI1640培養(yǎng)液將PBMC2x106cell/ml重懸；75ml培養(yǎng)瓶中加入10ml細(xì)胞懸液，于培養(yǎng)箱內(nèi)37C孵育1小時(shí)；吸盡培養(yǎng)液，RPMI1640培養(yǎng)液漂洗2遍，去除非黏附細(xì)胞；細(xì)胞刮片輕輕刮取黏附的單核細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)快速，方便純度和得率均較低缺點(diǎn)易引起Mo/M0激活，引起基因表達(dá)和分泌蛋白免疫磁珠法陰性選擇單核細(xì)胞免疫磁珠法陽性選擇單核細(xì)胞將特異性抗單核細(xì)胞表面分子CD14的單克隆抗體免疫磁珠與PBMC混合，用這種免疫磁珠從PBMC中結(jié)合單核細(xì)胞在磁場中，結(jié)合單核細(xì)胞的免疫磁珠固定了，未結(jié)合的其它細(xì)胞被洗脫下來*撤離磁場，再從免疫磁珠上洗脫CD14+單核細(xì)胞將多種特異性抗非單核細(xì)胞表面分子的單克隆抗體與磁性小珠形成免疫磁珠,用這種免疫磁珠從PBMC中結(jié)合