實(shí)驗(yàn)五、顯微直接計(jì)數(shù)法

1、實(shí)驗(yàn)五酵母的顯微鏡直接計(jì)數(shù)目的要求 1.了解血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)及計(jì)數(shù)原理。 2.掌握使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。 實(shí)驗(yàn)原理 測(cè)定微生物數(shù)量方法很多，通常采用的有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法和光電比濁計(jì)數(shù)法。 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，又稱血球計(jì)數(shù)板，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造血球計(jì)數(shù)板的計(jì)算方法 血球計(jì)數(shù)板上刻有一長(zhǎng)寬各為1毫米的方形大格，其體積為0.1mm3。計(jì)數(shù)板有兩種刻度，一種是每大格分為16個(gè)中格，而每中格又分25個(gè)小格，每大格為1625小格=400小格，而另一種，則是每大格分為25個(gè)

2、中格，而每中格又分為16個(gè)小格，則每大格為2516=400小格（計(jì)數(shù)板上的標(biāo)識(shí)為XBK25） 計(jì)數(shù)時(shí)，如果使用16格25格規(guī)格的計(jì)數(shù)室，要按對(duì)角線位，取左上、右上、左下、右下4個(gè)中格（即100個(gè)小格）的酵母菌數(shù)。如果使用25 格 16格規(guī)格的計(jì)數(shù)室除了取其4個(gè)對(duì)角方位外，還需再數(shù)中央的一個(gè)中格(即80個(gè)小方格)的酵母菌數(shù)。(6)當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計(jì)數(shù)大方格的上方和左方線上的酵母細(xì)胞(或只計(jì)數(shù)下方和右方線上的酵母細(xì)胞)。計(jì)數(shù)公式 (1)1625的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式： 酵母細(xì)胞數(shù)ml=（100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù) 100）40010000稀釋倍數(shù) (2)25x16的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式

3、： 酵母細(xì)胞數(shù)ml=（80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)80）40010000稀釋倍數(shù)實(shí)驗(yàn)器材 顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、酵母菌液、蓋玻片、吸管、吸水紙。操作步驟1. 鏡檢計(jì)數(shù)室 先檢查計(jì)數(shù)板是否有破損，然后對(duì)計(jì)數(shù)板進(jìn)行鏡檢，若有污物，則用自來(lái)水沖洗，用電吹風(fēng)吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)，并在顯微鏡下看清計(jì)數(shù)板結(jié)構(gòu)。2. 加 樣 品 在血球計(jì)數(shù)板上蓋上蓋玻片, 用滴管將搖勻的酵母菌液由蓋玻片邊的小槽滴一小滴（不宜過(guò)多）,讓菌液自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。3. 計(jì) 數(shù) 靜置幾分鐘后將血球計(jì)數(shù)板置于載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室的位置，再換高倍鏡計(jì)數(shù)。 25個(gè)中格的取計(jì)數(shù)板四角和中間位置的五個(gè)中方格計(jì)菌數(shù)。重復(fù)計(jì)2-3次，取其平均值，按公式計(jì)算每毫升酵母菌液中菌體的個(gè)數(shù)。4.清洗血球計(jì)數(shù)板 計(jì)數(shù)后將血球計(jì)數(shù)板用自來(lái)水沖洗干凈，勿用硬物刷，吹干后鏡檢。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌干凈為止。注意事項(xiàng)1、加樣時(shí)先搖勻菌液，計(jì)數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生。2、菌液濃度以每小格有5-10個(gè)菌體為宜。3、計(jì)數(shù)時(shí)，格線上的菌體只計(jì)左上或右下。4、如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞一半及以上時(shí)作為2個(gè)菌體計(jì)算。5、清洗計(jì)數(shù)板時(shí)切勿用手或硬物刷洗，在水龍頭上用水注清洗，直到洗凈為止。結(jié)果記錄 第一個(gè)中格第二個(gè)中格第三個(gè)中格第四個(gè)中格第五個(gè)中格第一次測(cè) 定第二次測(cè) 定第三次測(cè) 定平 均思