實驗五、顯微直接計數(shù)法

1、實驗五酵母的顯微鏡直接計數(shù)目的要求 1.了解血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)及計數(shù)原理。 2.掌握使用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物計數(shù)的方法。 實驗原理 測定微生物數(shù)量方法很多，通常采用的有顯微鏡直接計數(shù)法、平板計數(shù)法和光電比濁計數(shù)法。 顯微鏡直接計數(shù)法 將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，又稱血球計數(shù)板，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。血球計數(shù)板的構(gòu)造血球計數(shù)板的計算方法 血球計數(shù)板上刻有一長寬各為1毫米的方形大格，其體積為0.1mm3。計數(shù)板有兩種刻度，一種是每大格分為16個中格，而每中格又分25個小格，每大格為1625小格=400小格，而另一種，則是每大格分為25個

2、中格，而每中格又分為16個小格，則每大格為2516=400小格（計數(shù)板上的標(biāo)識為XBK25） 計數(shù)時，如果使用16格25格規(guī)格的計數(shù)室，要按對角線位，取左上、右上、左下、右下4個中格（即100個小格）的酵母菌數(shù)。如果使用25 格 16格規(guī)格的計數(shù)室除了取其4個對角方位外，還需再數(shù)中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數(shù)。(6)當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計數(shù)大方格的上方和左方線上的酵母細(xì)胞(或只計數(shù)下方和右方線上的酵母細(xì)胞)。計數(shù)公式 (1)1625的血球計數(shù)板計算公式： 酵母細(xì)胞數(shù)ml=（100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù) 100）40010000稀釋倍數(shù) (2)25x16的血球計數(shù)板計算公式

3、： 酵母細(xì)胞數(shù)ml=（80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)80）40010000稀釋倍數(shù)實驗器材 顯微鏡、血球計數(shù)板、酵母菌液、蓋玻片、吸管、吸水紙。操作步驟1. 鏡檢計數(shù)室 先檢查計數(shù)板是否有破損，然后對計數(shù)板進(jìn)行鏡檢，若有污物，則用自來水沖洗，用電吹風(fēng)吹干后才能進(jìn)行計數(shù)，并在顯微鏡下看清計數(shù)板結(jié)構(gòu)。2. 加 樣 品 在血球計數(shù)板上蓋上蓋玻片, 用滴管將搖勻的酵母菌液由蓋玻片邊的小槽滴一小滴（不宜過多）,讓菌液自行進(jìn)入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。3. 計 數(shù) 靜置幾分鐘后將血球計數(shù)板置于載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室的位置，再換高倍鏡計數(shù)。 25個中格的取計數(shù)板四角和中間位置的五個中方格計菌數(shù)。重復(fù)計2-3次，取其平均值，按公式計算每毫升酵母菌液中菌體的個數(shù)。4.清洗血球計數(shù)板 計數(shù)后將血球計數(shù)板用自來水沖洗干凈，勿用硬物刷，吹干后鏡檢。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌干凈為止。注意事項1、加樣時先搖勻菌液，計數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生。2、菌液濃度以每小格有5-10個菌體為宜。3、計數(shù)時，格線上的菌體只計左上或右下。4、如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞一半及以上時作為2個菌體計算。5、清洗計數(shù)板時切勿用手或硬物刷洗，在水龍頭上用水注清洗，直到洗凈為止。結(jié)果記錄 第一個中格第二個中格第三個中格第四個中格第五個中格第一次測 定第二次測 定第三次測 定平 均思