一輪復習 蘇教版 發(fā)酵工程的培養(yǎng)基與無菌技術(shù)（118張） 課件

1、發(fā)酵工程的培養(yǎng)基與無菌技術(shù)第1課時課標要求1.概述培養(yǎng)基的類型及用途。2.闡明無菌技術(shù)的操作方法。3.概述利用平板劃線法和稀釋涂布平板法，進行微生物分離和純化?？键c一發(fā)酵工程的培養(yǎng)基考點二發(fā)酵工程的無菌技術(shù)內(nèi)容索引重溫高考 真題演練課時精練發(fā)酵工程的培養(yǎng)基考點一培養(yǎng)基(1)概念：主要是指為人工培養(yǎng)微生物等而制備的，適合微生物等_ 的營養(yǎng)基質(zhì)。梳理歸納 夯實必備知識生長、繁殖或積累代謝產(chǎn)物(2)類型按成分分類培養(yǎng)基種類成分優(yōu)點缺點用途天然培養(yǎng)基 或_ 以及它們的提取物或粗消化物取材便利、_ 、配制簡便營養(yǎng)成分難以控制，實驗結(jié)果的重復性較差工業(yè)化生產(chǎn)合成培養(yǎng)基準確稱量的高純度 加_化學成分 ，實驗

2、可重復性好配制過程繁瑣，成本較高研究與育種動植物組織微生物細胞營養(yǎng)豐富化學試劑蒸餾水明確按物理狀態(tài)分類培養(yǎng)基種類特點用途 培養(yǎng)基不含 ，呈 狀態(tài)工業(yè)生產(chǎn) 培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基含 ，呈 或半固體狀態(tài)微生物的分離、鑒定，活菌計數(shù)，菌種保藏凝固劑液體液體固體凝固劑(如瓊脂)固體按用途分類： 培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基基礎(chǔ)特殊培養(yǎng)基種類選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 培養(yǎng)基用途將某種或某類 從混雜的微生物中分離出來快速 不同微生物，也用于 和篩選產(chǎn)生某種_的菌種用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求比較苛刻的 微生物?？稍黾铀栉⑸锏腳微生物分類鑒定分離代謝產(chǎn)物加富異養(yǎng)數(shù)量(3)成分成分含義作用來源碳源_構(gòu)成生物體的細胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)

3、物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機碳源：CO2、NaHCO3等；有機碳源：糖類、牛肉膏等氮源_無機氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機氮源：蛋白胨等提供碳元素的物質(zhì)提供氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)無機鹽為微生物提供除碳、氮之外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素為微生物提供無機營養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等無機化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等水生物體含量最高的無機化合物良好的溶劑，參與化學反應等培養(yǎng)基、代謝產(chǎn)物考向培養(yǎng)基配制及其作用1.(多選)現(xiàn)有兩種固體培養(yǎng)基，已知其配制時所加的成分和含量如下表，假設(shè)用這兩種培養(yǎng)基分別去分離土壤中的兩種微生物，甲、乙適合分離的微生物是考向

4、突破 強化關(guān)鍵能力成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖純淀粉甲培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%A.甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌B.甲培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌C.乙培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌D.乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖純淀粉甲培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%甲培養(yǎng)基中含有的葡萄糖和淀

5、粉是有機物，可以作為碳源和能源，適用于異養(yǎng)微生物生長，由此推出該培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型的自生固氮菌，A錯誤、B正確；乙培養(yǎng)基中不含有機碳源，不含氮源，可用來分離培養(yǎng)自養(yǎng)型的自生固氮菌，C正確、D錯誤。成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖純淀粉甲培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%2.在微生物培養(yǎng)的過程中，需要通過選擇培養(yǎng)或鑒別培養(yǎng)的方法來篩選出目標菌種。下列與之相關(guān)的敘述中，不正確的是A.纖維素分解菌能夠分解剛果紅染料，從而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈B.尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸?/p>

6、為氨，從而使酚紅指示劑變紅C.在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應抗性的菌株D.在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長的乳酸菌菌落周圍會出現(xiàn)“溶鈣圈”纖維素分解菌能夠分解纖維素，在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后，紅色復合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，A錯誤；尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘保古囵B(yǎng)基呈堿性，從而使酚紅指示劑變紅，B正確。3.如表所示為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述錯誤的是成分NaNO3K2HPO4MgSO47H2O(CH2O)蒸餾水青霉素含量3 g1 g0.5 g30 g定容至1 000 mL0.1萬單元A.根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培

7、養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基B.微生物無法在該培養(yǎng)基表面形成肉眼可見的菌落C.根據(jù)培養(yǎng)基的配方可知，該培養(yǎng)基培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是異 養(yǎng)型D.固體培養(yǎng)基中加入少量水即可形成液體培養(yǎng)基成分NaNO3K2HPO4MgSO47H2O(CH2O)蒸餾水青霉素含量3 g1 g0.5 g30 g定容至1 000 mL0.1萬單元液體培養(yǎng)基中加入凝固劑(如瓊脂)可形成固體培養(yǎng)基，題表所示的培養(yǎng)基配方中沒有加凝固劑，因此屬于液體培養(yǎng)基，A正確、D錯誤；微生物在固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長，形成肉眼可見的菌落，B正確；該培養(yǎng)基中的(CH2O)可作為有機碳源，因此其培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型，C正確。發(fā)酵工程的無

8、菌技術(shù)考點二1.發(fā)酵工程的滅菌方法(1)化學試劑滅菌法：采用 滅菌的方法。一般不用于培養(yǎng)基滅菌。(2)射線滅菌法：利用紫外線等產(chǎn)生的 進行滅菌的方法。(3)干熱滅菌法：包括 滅菌法和 法等。(4)濕熱滅菌法：利用 進行滅菌的方法。(5)過濾除菌法：通過 從而達到除菌目的的方法。梳理歸納 夯實必備知識滅菌劑高能粒子干熱空氣火焰灼燒飽和蒸汽過濾阻留微生物2.發(fā)酵工程的滅菌設(shè)備(1)電熱鼓風干燥箱： 滅菌設(shè)備常用于空的 、金屬工具和其他耐高溫的物品的滅菌。(2)高壓蒸汽滅菌鍋： 滅菌設(shè)備，其使用包括加水、 、加熱、排空冷空氣、 、出鍋等步驟。(3)空氣除菌設(shè)備。干熱玻璃器皿濕熱裝鍋保溫保壓3.發(fā)酵工

9、程的無菌操作器具(1)接種器工具接種：是指在 條件下將微生物接入 的操作過程。常用的工具有 等，在涂布平板接種時要用 ，穿刺接種時要用接種針，在 或在固體培養(yǎng)基平板上進行 時要用接種環(huán)。(2)轉(zhuǎn)移器具移液管：用來準備移取一定 的溶液或 化學試劑的量器。微量取液器：取液量 時使用，分為固定容量的和可調(diào)容量的兩種。玻璃涂布器、接種針、接種環(huán)無菌培養(yǎng)基玻璃涂布器斜面接種劃線接種體積分裝很少超凈工作臺：是一種經(jīng)過空氣凈化而形成 操作環(huán)境的設(shè)備。優(yōu)點是操作 。4.微生物接種和傳代的無菌技術(shù)(1)穿刺接種：常用于 微生物。(2)斜面接種：常用的菌種傳代和低溫下 菌種的方法。(3)斜面接種和培養(yǎng)酵母菌主要目

10、的： 、擴大培養(yǎng)和 等。主要步驟：準備接種 試管口滅菌挑取少許菌種 培養(yǎng)。高潔凈方便厭氧保存菌種轉(zhuǎn)移保存純凈菌種接種環(huán)滅菌劃線接種5.微生物分離、純化和培養(yǎng)的無菌技術(shù)(1)兩種純化方法的比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法分離結(jié)果關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線一系列的梯度稀釋；涂布平板操作接種用具接種環(huán)涂布器優(yōu)點可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離可以計數(shù)，可以觀察菌落特征缺點不能計數(shù)操作復雜，需要涂布多個平板共同點都要用到固體培養(yǎng)基；都需進行無菌操作；都會在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落；都可用于觀察菌落特征(2)酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟1520 g瓊脂濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)干熱滅菌酒精燈火焰灼

11、燒滅菌平板劃線法恒溫培養(yǎng)箱28請思考以下問題：平板冷凝后，要將平板倒置的原因是什么？提示因為平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，平板倒置后，既可避免培養(yǎng)基表面的水分過快地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。在接種前隨機取若干個滅菌后的未接種的平板，先行培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是 。檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格平板劃線第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，這樣做的目的是什么？提示能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。平板劃線時最后一次劃線為何不能與第一次劃線相連？提示最后一次劃線已經(jīng)將酵母菌稀釋成單個細胞，如果與第一次劃線相連，則

12、增加了酵母菌數(shù)目，得不到純化的效果。(3)土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成 ，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起到 作用。統(tǒng)計菌落數(shù)目一般用 法。脲酶催化涂布平板計數(shù)：統(tǒng)計菌落數(shù)目時，培養(yǎng)基表面生長的1個菌落，來源于樣品稀釋液中 個活菌。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進行計數(shù)。130300公式： 。(平均菌落數(shù)涂布的稀釋液體積)稀釋倍數(shù)延伸應用篩選能高效降解尿素的細菌(目的菌)的培養(yǎng)基成分如下表所示：KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素瓊脂H2O1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0

13、 g定容至1 000 mL延伸應用(1)該培養(yǎng)基是如何實現(xiàn)對分解尿素的細菌的篩選的？提示該培養(yǎng)基中唯一氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能夠分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，會因缺乏氮源而無法生長繁殖，所以用該培養(yǎng)基能夠篩選出分解尿素的細菌。(2)如何證明該選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用？提示同時設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基并進行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目；若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則證明了選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用。延伸應用(3)如何證明所用的選擇培養(yǎng)基沒有受到環(huán)境污染？提示將未接種的上述培養(yǎng)基與接種的上述培養(yǎng)基同時培養(yǎng)，觀察是否有菌落的

14、產(chǎn)生；若未接種的培養(yǎng)基無菌落產(chǎn)生，則證明培養(yǎng)基沒有受到環(huán)境污染。延伸應用(4)若甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的該細菌數(shù)。在對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。甲同學在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230，該同學的統(tǒng)計結(jié)果是否真實可靠？為什么？提示不可靠。為增強實驗的說服力與準確性，應設(shè)置重復實驗，在同一稀釋度下涂布至少3個平板，統(tǒng)計結(jié)果后計算平均值。延伸應用乙同學在該濃度下涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學將21舍去，然后取平均值。該同學對實驗結(jié)果的處理是否合理？為什么？提示不合理。微生物計數(shù)時，如果實驗中出現(xiàn)重復實驗結(jié)

15、果不一致的情況，應分析實驗過程中可能的影響因素，找出差異的原因，需重新實驗，而不能簡單地舍棄?？枷蛞话l(fā)酵工程滅菌的方法設(shè)備與無菌技術(shù)操作器具4.下列有關(guān)使用高壓蒸汽滅菌鍋的操作，錯誤的是A.加水時，水面應與三角擱架平齊B.加蓋時，將排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)C.加熱時，待冷空氣完全排盡后關(guān)上排氣閥D.切斷電源后，打開排氣閥使壓力表降到零后開蓋考向突破 強化關(guān)鍵能力在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，加水時的水面應與三角擱架平齊，A正確；加蓋時，應該將排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，B正確；加熱時，應該等冷空氣完全排盡后再關(guān)上排氣閥，C正確；切斷電源后，應該等壓力表降到零后再打開排氣閥并開蓋，D

16、錯誤。5.(2022南通高三月考)微生物培養(yǎng)時常利用無菌技術(shù)避免雜菌的污染，下列相關(guān)敘述錯誤的是A.配制好的培養(yǎng)基應放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌B.實驗中避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸C.接種前后的接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進行灼燒D.實驗結(jié)束后對實驗室噴灑石碳酸同時配合紫外線照射對培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法，A錯誤；為避免雜菌污染，實驗中應避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸，B正確；為了防止雜菌污染，每次接種前后，接種環(huán)都要進行灼燒滅菌，C正確；紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，密閉空間內(nèi)的空氣常采用紫外線照射消毒，噴灑石碳酸同時配合紫外線照射可提高對密閉空間的消毒效果，D正確。考向二

17、微生物接種和傳代、分離、純化和培養(yǎng)的無菌技術(shù)6.穿刺接種是用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠生長。下列敘述錯誤的是A.與平板劃線法所用的培養(yǎng)基相比，穿刺接種 所需的培養(yǎng)基添加的瓊脂較少B.穿刺接種可用于樣品中活菌數(shù)量統(tǒng)計C.穿刺接種可用于保藏厭氧菌種或研究微生物的運動D.穿刺接種可用于鑒定微生物的呼吸作用類型由于是半固體培養(yǎng)基，因此與平板劃線法所用的培養(yǎng)基相比，穿刺接種的培養(yǎng)基添加的瓊脂較少，A正確；穿刺接種不可用于樣品中活菌數(shù)量統(tǒng)計，因為接種是不定量的，B錯誤；由于是半固體培養(yǎng)基，所以穿刺接種可用于保藏厭氧菌種或研究微生物

18、的運動，C正確；由于穿刺接種后微生物可以分布于培養(yǎng)基的各個部位，因此可用于鑒定微生物的呼吸作用類型，D正確。7.(2022蘇州高三期中)酵母中的蛋白含量高，可用作飼料蛋白，且有些酵母能利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進行繁殖。研究人員擬從土壤中分離該類酵母并大量培養(yǎng)，操作流程如下圖。下列相關(guān)敘述正確的是A.土樣、培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿和接種工具等都必須嚴格滅菌B.只有過程中使用的培養(yǎng)基需以甲醇作為唯一的碳源C.過程擴大培養(yǎng)時需要保證充足的營養(yǎng)并營造無氧環(huán)境D.通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度可獲得甲醇高耐受菌株土樣中含有要分離的酵母，如果對其滅菌會殺死酵母，無法得到該類酵母，因此不能對其滅菌，A錯誤；擴大培養(yǎng)時

19、也需要以甲醇作為唯一的碳源，不是只有過程，B錯誤；酵母是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖，酵母擴大培養(yǎng)時，需保證充足的營養(yǎng)和氧氣等條件，C錯誤；逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得甲醇高耐受菌株，D正確。8.菌落總數(shù)可作為判定食品被污染程度的標志，也可以用于觀察細菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便對送檢樣品進行衛(wèi)生學評估提供證據(jù)。下圖是某樣品培養(yǎng)簡化流程圖，請分析回答下列問題：(1)該營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配制過程中，其基本步驟包括按照培養(yǎng)基配方準確計算、稱量、溶化、調(diào)節(jié)pH、 法滅菌等。高壓蒸汽配制培養(yǎng)基時應按照培養(yǎng)基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，并進行高壓

20、蒸汽滅菌；然后將培養(yǎng)基放入47 水浴鍋保溫，用手觸摸不燙手還便于操作，并能保證培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)，且在凝固之前接種不致將培養(yǎng)物燙死。(2)實驗過程中須將樣品剪碎并使用均質(zhì)器10 000 rmin1處理1 min，其目的是 。樣品稀釋時取1mL原液加入_ 中，稀釋10倍。涂布器一般是在酒精中浸泡，然后酒精火焰上引燃滅菌，不用灼燒滅菌的原因 。盡量使樣品中的微生物細胞分散9 mL無玻璃涂布器灼燒后不易降溫菌水(蒸餾水不對)實驗過程中要將樣品剪碎并使用均質(zhì)器10 000 rmin1處理1 min，盡量使樣品中的微生物細胞分散；將1 mL樣品稀釋10倍，需加入9 mL無菌水，玻璃涂布器灼燒后不易降溫，

21、所以涂布器滅菌時，將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810 s再用。(3)本實驗用菌落計數(shù)的原理是基于 ，運用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實際值偏 ，原因是_ 。通常對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的 等菌落特征對微生物進行初步鑒定(或分類)。一個菌落代表一個活菌小當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落形狀、大小、顏色、隆起程度當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，因此一個菌落可代表一個活菌。但在培養(yǎng)過程中，可能是兩個或多個活菌形成一個菌落，因此運用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實際值偏??；通常對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小

22、、顏色、隆起程度等菌落特征對微生物進行初步鑒定。(4)用菌落計數(shù)的具體培養(yǎng)結(jié)果如下表。選取菌落數(shù)30300的培養(yǎng)皿作為菌落總數(shù)的測定標準。當只有一個稀釋梯度的平均菌落數(shù)符合此范圍，以該培養(yǎng)皿菌落數(shù)稀釋倍數(shù)報告。當有兩個梯度菌落值在30300之間，報告結(jié)果由二者菌落數(shù)比值決定，若比值不大于2，則取平均數(shù)；若比值大于2，則報告稀釋度較低(稀釋次數(shù)越多，稀釋度越高)的培養(yǎng)皿菌落數(shù)。請?zhí)顚懤?、3中“？”處的菌落總數(shù)分別為 、 。37 75027 100例次不同稀釋度平均菌落數(shù)兩稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)CFU/mL(g)10110210311 3651642016 40022 760295461.6

23、？32 890271602.2？結(jié)合題干可知，報告菌落總數(shù)時，應選取菌落數(shù)30300的培養(yǎng)皿作為菌落總數(shù)的測定標準。當有兩個梯度菌落值在30300之間時，報告結(jié)果由二者菌落數(shù)比值決定，若比值不大于2，則取平均數(shù)；若比值大于2，則報告稀釋度較低的培養(yǎng)皿菌落數(shù)。因此例次2應選擇102和103的菌落數(shù)求平均，該培養(yǎng)皿菌落數(shù)為(29.546)237.75，故例次2的菌落總數(shù)為該培養(yǎng)皿菌落數(shù)稀釋倍數(shù)，既37.751 00037 750，例次3應選取102的菌落數(shù)報告，則3菌落總數(shù)為27110027 100。重溫高考 真題演練1.(2021山東，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收

24、利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯誤的是A.甲菌屬于解脂菌B.實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比D.該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力1234512345根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍色”，說明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色，因此甲菌屬于解脂菌，A項正確；乙菌菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍色，說明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌也可以在培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)

25、基不是以脂肪為唯一碳源，B項錯誤；可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比，更加直觀，C項正確；可以利用該平板來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標可以是菌落周圍深藍色圈的大小，D項正確。2.(2021山東，20)含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運動能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說法錯誤的是A.乙菌的運動能力比甲菌強B.為不影響菌的運動需選用液體培養(yǎng)基C.該實驗不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量D.

26、穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染1234512345從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說明了乙菌的運動能力比甲菌強，A正確；為不影響菌的運動需選用半固體培養(yǎng)基，B錯誤；該實驗可以根據(jù)黑色沉淀的多少初步比較細菌產(chǎn)生硫化氫的能力，但不能測定產(chǎn)生硫化氫的量，C正確；微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。3.(2020江蘇，19)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是A.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整B.圖中、區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應從 區(qū)挑取單菌落C.該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達到菌種純化的目的D.菌落周圍的纖維素被降解后，

27、可被剛果紅染成紅色12345123溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時輕輕晃動，以保持均一性，A項錯誤；由題圖可見，隨著劃線次數(shù)增多，細菌密度減小，區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應從區(qū)挑取單菌落，B項正確；菌落是由單個微生物細胞或多個同種細胞繁殖到一定程度后形成的，能得到單菌落即可以達到菌種純化的目的，C項錯誤；剛果紅與纖維素形成紅色復合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D項錯誤。454.(2020江蘇，31)產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：(1)常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是 (填編號)。123編號物

28、品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧45(2)稱取1.0 g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99 mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)_ 后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0.1 mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌 個。編號物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧梯度稀釋4.6105(或460 000)12345利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要將制備的菌懸液進行梯度稀釋，以獲得細胞密度不同的菌懸液，一般來說，菌落數(shù)在30300個的平板最適于計數(shù)。0.1 mL菌懸液中含有46個酵母菌落，則1

29、 mL菌懸液中含有460個酵母菌落；1.0 g土壤樣品首先稀釋100倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1 000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌4601 0004.6105(個)。12345(3)為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進行 育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑 的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。編號物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧誘變脂肪較大12345采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪

30、為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進行初步篩選，直徑大的說明產(chǎn)酶能力強，利用的脂肪(碳源)多，直徑小的說明產(chǎn)酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。12345_。(4)在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應選擇菌株 進行后續(xù)相關(guān)研究，理由是B該菌株增殖速度快，單細胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強，凈化效果好12345通過分析題圖可知，相同時間內(nèi)，菌株B細胞密度大，說明該菌株增殖速度快，單細胞蛋白產(chǎn)量高；相同時間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，說明該菌株降解脂肪的能力強，凈化效果好。123455.(2020

31、全國，37)某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機物)難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機鹽、水和S，乙的組分為無機鹽、水、S和Y。12345回答下列問題：(1)實驗時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用 的方法進行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是 。甲、乙培養(yǎng)基均屬于 培養(yǎng)基。高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌)瓊脂選擇12345微生物培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的滅菌通常采用高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌)的方法。乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入的是可使液體培養(yǎng)基凝固的瓊脂。甲、乙兩種培養(yǎng)基都是為了分離出

32、可降解S的細菌，因此是選擇培養(yǎng)基。12345(2)實驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2107個/mL，若要在每個平板上涂布100 L稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應將搖瓶M中的菌液稀釋 倍。104設(shè)稀釋倍數(shù)為A，1 mL1 000 L，可得(2107/A)0.1200，解得A104。12345(3)在步驟的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其原因可能是_ (答出1點即可)。S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長1234512345在篩選降解S物質(zhì)的細菌的過程中，如果培養(yǎng)基中的S濃度過高，會導致細菌培養(yǎng)基的滲透壓增大，細菌失

33、水而代謝活性降低，對S的降解量反而下降(或者S改變了培養(yǎng)基的pH，導致細菌代謝活性降低)。(4)若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)，請寫出主要實驗步驟：_。取淤泥加入無菌水中，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù)測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)的主要步驟是淤泥取樣，即取少量的淤泥加入無菌水中；用涂布平板法涂布到乙培養(yǎng)基上；微生物培養(yǎng)與觀察計數(shù)。12345(5)上述實驗中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即 。水、碳源、氮源和無機鹽培養(yǎng)基中含有細菌生長所需要的4類基本營養(yǎng)物質(zhì)，即水、碳源、氮源、無機鹽。12345一、易錯辨析1.消毒的原則是既殺死材料

34、表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害()2.倒平板就是等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置()3.倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上()4.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落()5.分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低()五分鐘查落實二、填空默寫1.培養(yǎng)基的化學成分包括 等。2.選擇培養(yǎng)基是_ 。3.平板冷凝后，要將平板倒置的原因是_。水、無機鹽、碳源、氮源一種能將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的特殊培養(yǎng)基平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以減少培養(yǎng)基中的水分

35、過快地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染4.在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進行劃線的原因是_ 。5.在第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因是_。6.同一稀釋度下，應至少對 個平板進行重復計數(shù)，然后求出平均值。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種 劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落37.絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以 作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌。8.當 ，統(tǒng)計的菌落數(shù)往

36、往比活菌的實際數(shù)目少。尿素兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落課時精練一、單項選擇題1.下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述，不正確的是A.純化微生物和植物組織培養(yǎng)時常用的是固體培養(yǎng)基B.在固體培養(yǎng)基中加入無菌水稀釋，可直接用于擴大化培養(yǎng)細菌C.根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的特征可初步判斷和鑒別細菌的類型D.用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基滅菌時，初期需排氣12次，否則壓力達 到溫度達不到123456789101113121234567891011純化微生物需要獲得單個菌落，用固體培養(yǎng)基，而植物組織培養(yǎng)一般用固體培養(yǎng)基，因為植物需要固定，A正確；大量培養(yǎng)微生物要用液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基用于分離純化微生物，B錯誤；

37、不同細菌的菌落形態(tài)，顏色，大小等菌落特征不同，因此根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的特征可初步判斷和鑒別細菌的類型，C正確；用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基滅菌時，初期需排氣12次，排出滅菌鍋內(nèi)的冷空氣，否則壓力達到溫度達不到，D正確。13122.下圖表示土壤中微生物為植物提供氮的過程，圖中、分別代表相關(guān)物質(zhì)，下列有關(guān)說法，正確的是A.是N2、是NH3，X代表的細菌異化作用類型是需氧型B.是NH3、是 ，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費者C.是NH3、是 ，X代表的細菌以有機物作為碳源D.在實驗室培養(yǎng)固氮菌可用二氧化碳為碳源的無氮培養(yǎng)基123456789101113121234567891011是N2、是 ，X代表的細菌異

38、化作用方式可能是需氧型，A錯誤；是N2、是NH3，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費者，B錯誤；是NH3、是 ，X表示土壤中的分解者，X代表的細菌以土壤中的有機物為碳源，C正確；固氮菌屬于異養(yǎng)微生物，在實驗室培養(yǎng)固氮菌不能用二氧化碳為碳源的無氮培養(yǎng)基，D錯誤。13123.(2022南京高三期中)下列有關(guān)以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物所需營養(yǎng)物質(zhì)的描述中，錯誤的是A.銨鹽和硝酸鹽等無機氮為該微生物提供必要的氮素B.碳源物質(zhì)是該微生物的能源物質(zhì)C.水、無機鹽也是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)D.瓊脂是該微生物的營養(yǎng)要素之一123456789101113121234567891011銨鹽和硝酸鹽等無機氮為該微生

39、物提供必要的氮素，A正確；以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物，CO2不是該微生物的能源物質(zhì)，B正確；水、無機鹽也是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)，C正確；瓊脂是凝固劑，不是該微生物的營養(yǎng)要素之一，D錯誤。13124.下列關(guān)于無菌操作技術(shù)的說法，正確的是A.消毒僅能殺死物體表面的芽孢和孢子B.液態(tài)的牛奶可用巴氏消毒法消毒C.培養(yǎng)皿、膠頭吸管可用干熱滅菌法滅菌D.高壓蒸汽滅菌時間達到后立即排氣降溫123456789101113121234567891011消毒不能殺死物體表面的芽孢和孢子，A錯誤；牛奶用巴氏消毒法消毒，B正確；干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具，膠頭吸管可用高壓蒸汽滅菌，C錯誤；高壓蒸汽滅

40、菌時間達到后待壓力降至零時，再打開排氣閥排氣，D錯誤。13125.下圖表示培養(yǎng)和純化X細菌的部分操作步驟。下列有關(guān)敘述正確的是A.步驟操作時，倒好平板后應立即將其倒 置，防止冷凝水落在培養(yǎng)基上造成污染B.步驟接種環(huán)和試管口應先在火焰上灼燒，接種環(huán)冷卻后再放入試管中 蘸取菌液C.步驟沿多個方向劃線，使接種物逐漸稀釋，培養(yǎng)后可根據(jù)出現(xiàn)的單個 菌落計數(shù)D.步驟將培養(yǎng)皿放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一段時間后所得到的都是X細 菌菌落12345678910111312倒好平板后需待培養(yǎng)基凝固后再倒置，A錯誤；接種環(huán)和試管口的灼燒都屬于無菌操作，接種環(huán)冷卻后才能蘸取菌液，B正確；計數(shù)一般使用稀釋涂布平板法，平板劃

41、線法不適合，C錯誤；步驟培養(yǎng)后得到的菌落可能還有雜菌，需要進一步純化，D錯誤。123456789101113126.(2022江蘇模擬預測)稀釋涂布平板是分離菌種常用的方法，下列相關(guān)敘述不恰當?shù)氖茿.固體培養(yǎng)基滅菌后，應冷卻至50 左右時倒平板B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長C.稀釋涂布平板分離到的單菌落需進一步劃線純化D.稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計數(shù)123456789101113121234567891011固體培養(yǎng)基滅菌后，應冷卻至50 左右時倒平板，固體培養(yǎng)基中含有瓊脂，40 左右會凝固，因此溫度過低會導致培養(yǎng)基凝固，無法倒平板，A正確；倒

42、好的未接種的培養(yǎng)基不能馬上使用，需要在恒溫箱中保存12 d，如果沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，這時才可以使用，B錯誤；稀釋涂布平板分離到的單菌落仍需進一步劃線純化，以利于菌種保藏，C正確；結(jié)合分析可知，稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計數(shù)，D正確。13127.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，正確的是A.純化培養(yǎng)時，對培養(yǎng)皿皿蓋做標記，培養(yǎng)皿應倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi) 的搖床上培養(yǎng)B.涂布接種時，需將涂布器蘸酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用C.培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，高壓滅菌加熱結(jié)束后，打開放氣閥使壓力 表指針回到零后，開啟鍋蓋D.可用平板劃線操作對微生物進行分離和計數(shù)

43、123456789101113121234567891011純化培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿應倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)，不需要放在搖床上培養(yǎng)，以免雜菌污染，A錯誤；涂布接種時，需將涂布器蘸酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用，以免高溫將部分微生物殺死，B正確；高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，C錯誤；稀釋涂布平板法和平板劃線法都能對微生物進行分離純化，但只有稀釋涂布平板法可用于計數(shù)，D錯誤。13128.在做分離“分解尿素的細菌”實驗時，甲同學從對應106培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。下列有關(guān)敘述不正確的是A.甲

44、同學出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同B.可以將甲同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)作為空白對 照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染C.讓其他同學用與甲同學一樣的土壤進行實驗，如果結(jié)果與甲同學一樣， 則可證明甲同學無誤D.B選項的實驗思路遵循了實驗的對照原則，而C選項的沒有123456789101113121234567891011甲同學出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同，也可能是操作中污染造成的，A正確；甲同學的實驗結(jié)果可能是培養(yǎng)基污染造成的，可以將甲同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染，B正確；如果是甲同學實驗操作過程中污染造成的，讓其他同學用與甲同

45、學一樣的土壤進行實驗，如果結(jié)果與甲同學一樣，則可證明甲同學無誤，C正確；B、C選項的實驗思路都遵循了實驗的對照原則，D錯誤。1312二、多項選擇題9.(2022南京市中華中學模擬)下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，正確的是A.接種前要了解固體培養(yǎng)基是否被污染無需接種無菌水來培育檢測B.接種時連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌體逐步稀釋獲得單個菌落C.以尿素為唯一氮源且含剛果紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌D.利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物123456789101113121234567891011檢測培養(yǎng)基是否被污染，應將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培

46、養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，A正確；平板劃線法的原理是通過連續(xù)劃線將聚集的菌體逐步稀釋以獲得單個菌落，B正確；以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可選擇尿素分解菌，用含酚紅指示劑的培養(yǎng)基可鑒別尿素分解菌，C錯誤；利用尿素固體培養(yǎng)基可保留利用尿素的微生物，同時抑制或阻止其他微生物生長，而非殺死，D錯誤。131210.營養(yǎng)缺陷型菌株是野生型菌株經(jīng)過人工誘變或自發(fā)突變失去合成某種成長因子的能力，只能在補充了相應的生長因子的基本培養(yǎng)基中才能正常生長的變異菌株。某研究小組對酵母菌用紫外線照射后將其接種到甲培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，一段時間后將甲培養(yǎng)皿的菌落影印接種(不改變菌落位置)到乙、丙兩培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，進一步培養(yǎng)得到如圖所

47、示結(jié)果。下列分析正確的是A.接種到甲培養(yǎng)皿采用的是稀釋涂布平板法B.甲、丙兩培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基C.甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少D.甲、乙、丙三個培養(yǎng)皿都可能存在營養(yǎng)缺陷型123456789101113121234567891011甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布，接種方法應為稀釋涂布平板法，A正確；甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多，包括野生型酵母菌菌株和某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿沒有生長的菌株是某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙生長了同樣的菌株，則甲和丙是加入了同種生長因子的培養(yǎng)基，B錯誤；13121234567891011由于基因突變具有不定向性，接種到

48、甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他營養(yǎng)缺陷型，且有些菌落不一定由一個酵母菌形成，所以，甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C正確；乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，形成的菌落只可能是野生型菌落，D錯誤。131211.(2022揚州高三期末)某生物興趣小組完成了“分離土壤中分解尿素的細菌并進行計數(shù)”的實驗，具體操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是A.在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其 倒入錐形瓶中B.梯度稀釋時可用移液管或微量移液 器進行操作C.振蕩的目的是為了增加尿素分解菌的濃度D.由圖示菌落計數(shù)結(jié)果可知10克土樣中的菌株數(shù)約為1.6107個123456789101113121234567891011酒精燈火焰附近存在一個無菌區(qū)，在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其倒入錐形瓶中，可以防止稱取的土壤在倒入錐形瓶過程中，土樣被污染，A正確；只用移液管，分度太低，而只用微量移液器，容量又太小，所以梯度稀釋時可用移液管或微量移液器進行操作，B正確；13121234567891011振蕩培養(yǎng)的目的是提高培養(yǎng)液的溶解氧的含量，使