鈣熒光指示劑

1、分子式：C51H50C12N2O23分子量：1129.85外觀：紅色粉末另 U名：Fluo 3-AM純度：85%以上（HPLC）儲(chǔ)存條件：-20P運(yùn)輸條件：室溫Fluo 3-AM是一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光探針。Fluo 3若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是 當(dāng)它與鈣離子Ca2+結(jié)合后熒光會(huì)增加60至80倍，是目前最常用的一種鈣離子熒光探針。激光共聚焦熒光 顯微鏡具有氬激光器，所以Fluo 3可被廣泛使用于這種顯微鏡上。這種熒光信號(hào)發(fā)出來(lái)的長(zhǎng)波也便于減小 對(duì)樣品細(xì)胞的光損傷。Fluo 3也可用來(lái)檢測(cè)紫外光照射下可裂解的螯合鈣或其它形式的鈣。Fluo 3-AM是 Fluo 3的一種乙酰

2、甲酯衍生物，通過(guò)培養(yǎng)，能夠輕易進(jìn)入細(xì)胞中。Fluo 3-AM （鈣離子熒光探針）需用無(wú)水DMSO （anhydrous DMSO）配制。Fluo 3-AM是一種可以穿透細(xì) 胞膜的熒光染料。Fluo 3-AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo 3,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo 3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，最大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。50 Mg Fluo 3-AM 的配制DMSO ( Ml102030404450濃度(mmol/l)4.42.21.51.11.00.9操作說(shuō)明(for Human T cells)*試劑：2 mM 的 Flu

3、o 3-AM/DMSOPluronic F127Hanks balanced salt solution (HBSS)HEPES buffer saline (10 mM HEPES, 1 mM Na2HPO4, 137 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mM glucose, 0.1% BSA, pH 7.4)操作：配制2mM的Fluo 3-AM/DMSO溶液即：將1mg Fluo 3-AM溶于442ulDMSO中(推薦現(xiàn)配現(xiàn)用)。Pluronic F127先用DMSO配制成20%(W/V)的溶液，室溫保存。使用時(shí)加入到上述Fluo

4、 3-AM/DMSO 溶液至終濃度0.05%(W/V). Pluronic F127可以防止Fluo 3-AM在HBSS中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。用 HBSS 稀釋 Fluo 3-AM 溶液，制備 4 pM 的 Fluo 3-AM working solution o將 Fluo 3-AM working solution 加入細(xì)胞，在 37 C培養(yǎng) 20 分鐘。加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。用 HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞 3 次，然后用 HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制成 1x105 cells/ml的溶液。37 C下

5、培養(yǎng)10分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。觀察 528 nm （excitation: 490-500 nm）時(shí)的熒光。*標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定最佳條件。以上方法僅供參考。 染色實(shí)例：加載了 Fluo 3的新鮮分離的大鼠肝臟細(xì)胞PE刺激后出現(xiàn)規(guī)則胞漿鈣振蕩。上圖為細(xì)胞明場(chǎng)圖和不同時(shí)間點(diǎn)（min）的比例成像，下圖為影響Fluo 3熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的 變化。成像系統(tǒng)：Photon Technology International Inc,，顯微鏡 Nikon TE2000U， CCD 相機(jī) QuantEM512S,軟件 ERP。（北京師范大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究所崔宗杰教授提

6、供照片）分子式：C51H50F2N2O23分子量：1096.94外觀：橙紅色粉末別名：Fluo 4-AM純度:98%以上（HPLC）儲(chǔ)存條件：-20C運(yùn)輸條件：室溫Fluo 4是一種將Fluo 3結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了電子吸 引力更強(qiáng)的F，它的最大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)處偏離10 nm左右。這個(gè)波長(zhǎng)更接近于氬激光 器的波長(zhǎng)，所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo 4的熒光強(qiáng)度比Fluo 3強(qiáng)1倍。由于 Fluo 4 與鈣離子的親和力和 Fluo 3 近似（Fluo 3：Kd=0.4 p mol / l、Fluo 4： Kd=0.36 p mol/l），所以使用上和Fluo 3

7、也基本相同，可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀等儀 器檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。Fluo 4-AM是Fluo 4的一種乙酰甲酯衍生物，通過(guò)培養(yǎng)，能夠輕易進(jìn)入細(xì)胞中。AM進(jìn)入細(xì) 胞后會(huì)被胞內(nèi)酯酶所水解，產(chǎn)生的Fluo 4隨后會(huì)和鈣離子（Ca2+）結(jié)合并發(fā)出熒光。鈣離子探 針、胞內(nèi)熒光探針的種類繁多，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求，實(shí)驗(yàn)者的選擇性有很多。Fluo 4-AM （鈣離子熒光探針）需用無(wú)水DMSO （anhydrous DMSO）配制。Fluo 4-AM是一種 可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo 4-AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo 4, 從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。用二甲基亞颯（DMS

8、O） Fluo 4-AM配制為15 mM的原液,-20C避光密封保存。使用 前根據(jù)您實(shí)驗(yàn)的需要稀釋成合適的濃度。試劑名稱分子量規(guī)格濃度配制量Fluo 4-AM1096.941 mg1 mM912 gl50 gg1 mM45.6 gl例如:需要配制1 mM的原液，用45.6 p l的無(wú)水DMSO溶解50 p g的Fluo 4-AM就可以。注意事項(xiàng)：保存方法：1）保存產(chǎn)品時(shí)需要密封和保持干燥-20C保存。2）如果將產(chǎn)品配置好后，也需要密封干燥-20C保存。溶解液DMSO：使用新鮮、未開(kāi)封過(guò)的無(wú)水DMSO（開(kāi)封過(guò)的無(wú)水DMSO如果吸水，將會(huì)影響Fluo 4-AM的穩(wěn)定性）。溶解后，盡可能在短時(shí)間內(nèi)用

9、完。長(zhǎng)期保存水氣容易滲入試劑中。激發(fā)波長(zhǎng)：495 nm發(fā)射波長(zhǎng)：518 nm別 名:Fura 2-AM分子式：C44H47N3O24分子量：1001.85外觀：黃色或橙黃色粉末純度：98%以上（HPLC）儲(chǔ)存條件：-20C運(yùn)輸條件：室溫分 子式：C29H22K5N3O14分子量：831.99外觀：黃色或橙黃色粉末別名： Fura2純度:98%以上（HPLC）儲(chǔ)存條件：室溫運(yùn)輸條件：室溫Fura 2是最常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一,Fura 2-AM（鈣離子熒光探針）需用 無(wú)水 DMSO（anhydrous DMSO）溶解。Fura 2對(duì)Quin 2的熒光特性做了改進(jìn)。1 p M F

10、ura 2結(jié)合后的信號(hào)強(qiáng)度相當(dāng)于30 p M的 Quin 2結(jié)合后的信號(hào)強(qiáng)度。這樣就保證在實(shí)驗(yàn)中可以使用比Quin 2的濃度低得多的Fura 2 指示劑。Fura 2是一種使用最廣泛的比率測(cè)量的鈣熒光指示劑。目前適用于Fura 2實(shí)驗(yàn)的設(shè) 備有很多，它特別適合于用數(shù)字成像顯微鏡來(lái)檢測(cè)。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的 影響。細(xì)胞形狀的改變有時(shí)候會(huì)影響340 nm和380 nm的熒光比率，比如，平滑肌收縮會(huì) 同時(shí)引起這些波長(zhǎng)的熒光信號(hào)強(qiáng)度的減小。另外，對(duì)于血管來(lái)說(shuō)，340 nm的信號(hào)強(qiáng)度的增 加會(huì)因?yàn)檠苁湛s而趨向于變小，而380 nm信號(hào)強(qiáng)度的減小會(huì)因?yàn)檠苁湛s而變大。Fura 2-AM

11、是Fura 2的一種乙酰甲酯衍生物，通過(guò)培養(yǎng)，能夠輕易地負(fù)載到細(xì)胞中。Fura 2可以和鈣離子（Ca2+）結(jié)合，結(jié)合鈣離子后在330-350nm激發(fā)光下可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光， 而在380nm激發(fā)光下則會(huì)導(dǎo)致熒光減弱。這樣就可以使用340nm和380nm這兩個(gè)熒光的比 值來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探 針的滲漏，細(xì)胞厚度差異等一些誤差因素。Fura 2和鈣離子結(jié)合后，最大激發(fā)波長(zhǎng)為335nm（最 大激發(fā)波長(zhǎng)隨離子濃度的的不同而有所不同），最大發(fā)射波長(zhǎng)為505nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使 用的激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為510nm。如果做雙波長(zhǎng)檢測(cè)，則推

12、薦使用的激發(fā)波長(zhǎng) 為 340nm 和 380nm。Fura 2-AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fura 2-AM的熒光比較弱，最大激發(fā)波長(zhǎng)為 369 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為478 nm，并且其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度改變而改變。Fura 2-AM進(jìn) 入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura 2,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。CbUNH分子式：C32H26K5N3O12分子量：840.05外觀：淺黃色粉末別名:Indo 1純度:95%以上（HPLC）儲(chǔ)存條件：-20C運(yùn)輸條件：室溫Indo 1是一種經(jīng)過(guò)改進(jìn)的適用于比率法的鈣指示劑、鈣熒光探針。兩個(gè)用于Indo 1比率法檢 測(cè)的發(fā)射波長(zhǎng)分別為410 nm

13、和480 nm。Indo 1適合使用流式細(xì)胞儀通過(guò)比率法檢測(cè)，這樣 可以測(cè)得雙波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。有報(bào)道稱Indo 1在進(jìn)入細(xì)胞后的定位能力要強(qiáng)于Fura 2。Indo 1-AM是Indo 1的乙酰甲酯衍生物，它通過(guò)培養(yǎng)能夠進(jìn)入活細(xì)胞。分子式:C26H23K4N3O10分子量：693.87外觀：淺黃色粉末別名: Quin 2純度:95%以上（HPLC）儲(chǔ)存條件:-20C運(yùn)輸條件：室溫Quin 2能夠和鈣（logKCaY=7.1）形成穩(wěn)定的熒光螯合物，但和鎂卻不行（logMgY=2.7）。 這種螯合物在525 nm的發(fā)射波長(zhǎng)處有著很高的量子產(chǎn)量（0.14）, Quin 2的激發(fā)波長(zhǎng)為339 nm,發(fā)

14、射波長(zhǎng)為492 nm。Quin 2-AM是Quin 2的乙酰甲酯衍生物，能夠輕易地穿過(guò)細(xì)胞膜。 進(jìn)入細(xì)胞后，酯結(jié)構(gòu)立刻被水解，形成Quin 2。分 子 式:C40H43C1N4O11分子量:791.24外觀：暗紫色固體別名:Rhod 2純度:60%以上（HPLC）儲(chǔ)存條件: -20 C運(yùn)輸條件: 室溫在所有的鈣離子指示劑中，Rhod 2熒光信號(hào)的波長(zhǎng)最長(zhǎng)。它具有和羅丹明類似的激發(fā)和發(fā) 射波長(zhǎng)，分別為557 nm和581 nm。這樣的激發(fā)波長(zhǎng)使得我們很容易就能找到氬和氟光源的 激光。盡管有人認(rèn)為Rhod 2的熒光信號(hào)僅僅將鈣復(fù)合物的熒光增加了數(shù)倍，但是Dojindo 的Rhod 2由于具有很高的純度，能有效地將鈣熒光信號(hào)增加80-100倍左