基因工程甜蛋白

1、.：.；基因工程甜蛋白人工設(shè)計(jì)并合成了monellin甜蛋白基因，并在大腸桿菌中表達(dá)，經(jīng)測(cè)定其甜度是一樣分量蔗糖的1100倍，且甜味純粹。經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)，分別純化得到的Asn66monellin甜蛋白，其甜度是一樣分量蔗糖的4500倍。為提高甜蛋白的表達(dá)效率，研討了培育基、菌齡等8種要素對(duì)甜蛋白表達(dá)的影響，確定了發(fā)酵條件的優(yōu)化方案，使甜蛋白的產(chǎn)量由原來(lái)的70g/ml提高到了240g/ml，表達(dá)效率占菌體可溶性蛋白由25%提高到40%。該工程2000年經(jīng)過(guò)了專家鑒定，為甜蛋白monellin的規(guī)模開發(fā)和運(yùn)用提供了優(yōu)良的基因工程菌株和發(fā)酵工藝數(shù)據(jù)。其關(guān)鍵技術(shù)“編碼甜蛋白的合成DNA序列及消費(fèi)該蛋白質(zhì)的

2、方法和“編碼高甜度莫奈靈的基因及其產(chǎn)物蛋白的利用于2001年1月獲國(guó)家發(fā)明專利2項(xiàng)專利號(hào)分別為ZL95117885.7和ZL98102420.3。有關(guān)技術(shù)已轉(zhuǎn)讓給山西省大同市同風(fēng)肉制品廠，甜蛋白進(jìn)入中試。轉(zhuǎn)基因抗青枯病馬鈴薯設(shè)計(jì)合成了新抗菌肽基因，構(gòu)建了一批單價(jià)及雙價(jià)抗菌肽基因的植物表達(dá)載體，并導(dǎo)入馬鈴薯，獲得218個(gè)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯株系，其中185個(gè)株系中有抗菌肽基因的表達(dá)。在溫室及田間人工病圃對(duì)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯進(jìn)展青枯病抗性鑒定，獲得中抗程度的株系8個(gè)，抗性比起始種類提高12級(jí)。在四川省對(duì)34個(gè)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯株系進(jìn)展農(nóng)藝性狀挑選，有些株系已接近起始種類米拉。完成了轉(zhuǎn)基因馬鈴薯田間釋放的平安性評(píng)價(jià)任務(wù)

3、，農(nóng)業(yè)部曾經(jīng)同意轉(zhuǎn)基因抗青枯病馬鈴薯在四川省進(jìn)展環(huán)境釋放，抗病株系累計(jì)試種約120畝。 “馬鈴薯抗菌肽基因工程技術(shù)體系的建立及抗青枯病新株系的獲得工程成果在繼1996年獲農(nóng)業(yè)部科技提高一等獎(jiǎng)后，1997年又獲國(guó)家技術(shù)發(fā)明三等獎(jiǎng)?！翱咕募捌湎M(fèi)方法和運(yùn)用乳糖酶基因的克隆、高效表達(dá)及其在乳品工業(yè)上的運(yùn)用挑選到一株產(chǎn)乳糖酶的亮白曲霉(Aspergillus cnadidus),將其乳糖酶基因克隆并經(jīng)過(guò)測(cè)序，得到該基因的基因組DNA和cDNA序列。在畢赤酵母中高效表達(dá)乳糖酶基因，在5L發(fā)酵罐程度乳糖酶的表達(dá)量可達(dá)6g/L,酶活為3600U/mL。將該乳糖酶純化，與商業(yè)化運(yùn)用的來(lái)源于A.oryzae的

4、乳糖酶進(jìn)展了酶學(xué)性質(zhì)的比較。結(jié)果闡明，該乳糖酶在比活、金屬離子穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、Km等方面均優(yōu)于A.oryzae的乳糖酶，是一個(gè)更具有消費(fèi)運(yùn)用前景的新基因。乳糖酶水解實(shí)驗(yàn)闡明在不同的溫度區(qū)間，該酶均能有效地水解牛奶中的乳糖。該成果已經(jīng)過(guò)專家鑒定。“乳糖酶基因的克隆、高效表達(dá)及其在乳品工業(yè)上的運(yùn)用草甘膦極端污染環(huán)境微生物資源利用從極端污染環(huán)境中分別了草甘膦高度耐受和高程度降解菌株30余株，克隆了新型草甘膦抗性EPSPS編碼基因3個(gè)，具有如下特性：1草甘膦抗性表現(xiàn)突出，比已見報(bào)道的EPSPS基因都高；2構(gòu)造新穎，在核酸程度上與知的EPSP合成酶基因沒有任何同源性，新基因中沒有出現(xiàn)受專利維護(hù)的任何E

5、PSPS抗草甘膦氨基酸保守序列；3功能明確，可以對(duì)大腸桿菌EPSPS編碼基因突變株進(jìn)展功能互補(bǔ)，具有完好的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶活性。新型EPSP合成酶基因的高抗草甘膦特性在方式植物煙草中得到驗(yàn)證，轉(zhuǎn)基因煙草在高于田間任務(wù)濃度3倍的5%草甘膦銨鹽水劑下能正常生長(zhǎng)。新型高抗草甘膦基因的獲得突破了跨國(guó)公司的技術(shù)壟斷，突破了我國(guó)抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)業(yè)化的技術(shù)瓶頸。目前，采用上述新型高抗草苷膦基因進(jìn)展轉(zhuǎn)基因棉花和油菜的任務(wù)也在進(jìn)展之中。轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米的研制飼料中玉米的用量高達(dá)50%以上，我國(guó)玉米產(chǎn)量的60%用于飼料加工。第一代植酸酶產(chǎn)品以微生物發(fā)酵為根底用作飼料添加劑。該項(xiàng)研討任務(wù)進(jìn)一步

6、利用種子生物反響器消費(fèi)第二代植酸酶產(chǎn)品直接用于飼料加工。將具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的植酸酶基因轉(zhuǎn)化玉米，經(jīng)過(guò)六代選育，得到了表達(dá)植酸酶活性到達(dá)100040，000單位/公斤種子的轉(zhuǎn)基因玉米純合系，并穩(wěn)定遺傳。轉(zhuǎn)基因玉米動(dòng)物飼喂的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證明轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米可以替代微生物發(fā)酵消費(fèi)的植酸酶添加劑，滿足飼料加工規(guī)范的要求。轉(zhuǎn)基因玉米進(jìn)入環(huán)境釋放平安評(píng)價(jià)階段并懇求了國(guó)家發(fā)明專利專利號(hào)：ZL 03476.X，為“營(yíng)養(yǎng)型、環(huán)保型、節(jié)約型、公用型的轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米種類的培育和運(yùn)用奠定了根底。有機(jī)磷農(nóng)藥消解酶酶制劑的研制構(gòu)建了高效穩(wěn)定表達(dá)有機(jī)磷消解酶的重組畢赤酵母；在小試程度上確立利用基因工程酵母菌消費(fèi)有機(jī)磷農(nóng)藥消

7、解酶的穩(wěn)定的發(fā)酵工藝并對(duì)得到的重組畢赤酵母進(jìn)展了遺傳及表達(dá)穩(wěn)定性研討；挑選到一株產(chǎn)有機(jī)磷消解酶的新菌株，經(jīng)國(guó)家微生物菌種保藏中心鑒定為假產(chǎn)堿假單胞菌。對(duì)其分泌的有機(jī)磷消解酶蛋白進(jìn)展了分別純化，并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)展了研討。檢測(cè)闡明OPHC2是一種新的有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶。此基因已被GenBank收錄。已經(jīng)過(guò)中間實(shí)驗(yàn)平安性評(píng)價(jià)。技術(shù)列表乳糖酶基因的克隆、高效表達(dá)及其在乳品工業(yè)上的運(yùn)用編碼向日葵生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶的DNA序列和氨基酸序列及其運(yùn)用同時(shí)具有兩種不同殺蟲機(jī)理的殺蟲交融基因及其運(yùn)用一個(gè)玉米bZIP類轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與運(yùn)用對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有廣譜降解才干的菌株及其挑選方法光誘導(dǎo)表達(dá)GACAB啟動(dòng)子及不

8、同區(qū)段的表達(dá)功能編碼海島棉防衛(wèi)反響基因的核苷酸序列、含有該序利用衣藻葉綠體基因工程消費(fèi)新型口蹄疫苗的方法利用植物葉綠體消費(fèi)口服動(dòng)物口蹄疫苗的方法運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌工程菌及其運(yùn)用運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌乙醇發(fā)酵基因的克隆及運(yùn)用高抗草甘膦的EPSP合成酶及其編碼序列膽固醇氧化酶基因及其運(yùn)用棉花Nodulin-like基因及其啟動(dòng)子棉花ADP-ribosylationfactor1(arf1)基因及其啟動(dòng)子用畢赤酵母分泌表達(dá)高甜度莫奈靈適用于高密度發(fā)酵的畢赤酵母新菌株提高輪狀病毒VP7或VP4蛋白在植物中表達(dá)含量的方法及產(chǎn)品一種新的有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶及其編碼基因一種調(diào)控赤霉素生成的轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與運(yùn)用一種利用

9、轉(zhuǎn)基因植物消費(fèi)植酸酶的方法玉米BZIPLANT轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與運(yùn)用一種新型高效昆蟲桿狀病毒生物反響器可變鹽單胞菌高抗草甘膦的EPSP合酶及其編碼序列苯胺雙加氧酶基因及其運(yùn)用調(diào)控蛋白TSRF1在植物抗病中的運(yùn)用運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌果聚糖蔗糖酶基因突變的工程菌及其構(gòu)建和用途種高效固氮工程菌及其構(gòu)建和用途固氮負(fù)調(diào)理基因突變的泌銨工程菌的構(gòu)建及運(yùn)用一種擴(kuò)增水稻T-DNA插入位點(diǎn)側(cè)翼序列的方法高甜度莫奈靈DNA序列及高效表達(dá)所述DNA序列的方法編碼甜蛋白的合成DNA序列及消費(fèi)該蛋白質(zhì)的方法編碼殺蟲蛋白質(zhì)交融基因和表達(dá)載體及其運(yùn)用植酸酶及其基因的克隆和表達(dá)抗菌肽及其消費(fèi)方法和運(yùn)用合成編碼雪花蓮凝集素的抗同

10、翅目害蟲基因及其運(yùn)用兩種編碼殺蟲蛋白質(zhì)基因和雙價(jià)交融表達(dá)載體及其運(yùn)用賈士榮:葡萄糖氧化酶基因在培育抗病轉(zhuǎn)基因植物中的運(yùn)用賈士榮:胞內(nèi)或胞外協(xié)同表達(dá)兩種抗真菌病基因培育抗病作物林敏：固氮斯氏假單胞菌及其菌膜的培育方法林敏：遺傳工程固氮糞產(chǎn)堿菌與固氮宏大芽孢桿菌共培育發(fā)酵工藝 HYPERLINK 轉(zhuǎn)基因抗青枯病馬鈴薯 HYPERLINK 轉(zhuǎn)基因抗蟲馬鈴薯 HYPERLINK 基因工程甜蛋白 HYPERLINK 乳糖酶基因的克隆、高效表達(dá)及其在乳品工 HYPERLINK 草甘膦極端污染環(huán)境微生物資源利用 HYPERLINK 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米的研制 HYPERLINK 轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 HYPERLINK BTCry1Ac/Ab膠體 HYPERLINK 有機(jī)磷農(nóng)藥消解酶酶制劑的研制 HYPERLINK 轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻 HYPERLINK 基因工程甜蛋白Monellin HY