人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)酶聯免疫吸附測定

1、人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體（V酶聯免疫吸附測定試劑盒使用說明書本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!預期應用法定量測定人血清、血漿或其它相關生物液體中含量。實驗原理用純化的抗原包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗原、標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物（）顯色。在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關。用酶標儀在波長下測定吸光度（值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1、酶標板：一塊（96孔）2、標準品（凍干品）：2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1長，l蓋好后室溫靜置大約分鐘，同時反復

2、顛倒搓動以助溶解，其濃度為0將其稀釋為后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成,樣品稀釋液直接作為空白孔。如配制標準品：?。ú灰儆冢┑纳鲜鰳藴势芳尤牒袠悠废♂屢旱墓苤校靹蚣纯?，其余濃度以此類推。TOC o 1-5 h z3樣品稀釋液：。4檢測稀釋液：。5檢測稀釋液：。6檢測溶液：瓶（1。臨用前以檢測稀釋液稀釋（如：檢測溶液0檢測稀釋液A），充分混勻，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（10/0孔），實際配制時應多配制、檢測溶液B：/瓶0（1:1）0。0臨用前以檢測稀釋液稀0釋0。稀釋方法同檢測溶液A。、底物溶液：瓶。、濃洗滌液：瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀

3、釋5倍。O）4。0、終止液：1、覆膜：5張2、使用說明書：自備物品、酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）、微量加液器及吸頭，管、蒸餾水或去離子水，濾紙標本的采集及保存1血清：全血標本請于室溫放置小時或過夜后于離心分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-2或0-8保0存，但應避免反復凍融。2血漿：可用或肝素作為抗凝劑，標本采集后分鐘內于離心分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-2或0-8保0存，但應避免反復凍融。3其它生物標本：請離心分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于或保存，但應避免反復凍融。注：以上標本均應密封保存，4保存應小于1周，-2不離應超過1個月，-8不離應超過2個月；標本溶血會影響最后檢測結果

4、，因此溶血標本不宜進行此項檢測。操作步驟實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。1、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100，余孔分別加標準品或待測樣品10，0注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液工作液（臨用前配制

5、），酶標板加上覆膜，37溫育1小時。3、棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-分2鐘，大約40/0每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。4每孔加檢測溶液工作液（臨用前配制），加上覆膜，溫育小時。5、棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。6、每孔加底物溶液90，酶標板加上覆膜37避光顯色（反應時間控制在15-分3鐘0，當標準孔的前3-孔4有明顯的梯度藍色，后3-孔4梯度不明顯時，即可終止）。7、每孔加終止溶液50，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。8立即用酶標儀在波長測量各孔的光密度（值）。注：1、試劑準備：所有試劑在使用前應平衡至室溫，使用后請

6、立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。2、加樣：加樣或加試劑時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）最好控制在10分鐘內。推薦設置復孔進行實驗。3、溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài)；同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。4、洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免

7、影響最后的酶標儀讀數。5試劑配制：及在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液工作液、檢測溶液工作液請依據所需的量配制使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配制標準品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取檢測溶液時，一次不要小于），以避免由于不準確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液工作液、檢測溶液工作液。6、反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。7、底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。洗板方法1手

8、工洗板方法：將推薦的洗滌緩沖液至少注入孔內，浸泡分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體，在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；根據需要，重復此過程數次。2、自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。特異性本試劑盒可同時檢測重組或天然的人，且與其它相關蛋白無交叉反應。計算各標準品及樣本值扣除空白孔值后作圖（七點圖），如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為縱坐標（對數坐標），值為橫坐標（對數坐標），在對數坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如，根據樣品值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與值計算出標準曲線

9、的回歸方程式，將樣品的值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。檢測范圍：，繪制標準曲線請取用以下濃度值：，mmmmo最低檢測限：說明1，在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。2，小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本/標準品，酶結合物或底物時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結果。試劑盒保存：部分試劑保存于C,部分試劑保存于C,具體以標簽上