大鼠多巴胺（DA）ELISA檢測試劑盒使用說明書

1、Word文檔 大鼠多巴胺（DA）ELISA檢測試劑盒使用說明書 本試劑盒只能用于科學討論，不得用于醫(yī)學診斷 大鼠（Rat）多巴胺（DA）ELISA檢測試劑盒 使用說明書 檢測原理 試劑盒采納雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被多巴胺（DA）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的多巴胺（DA）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。 樣品收集、處理及保存方法 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒

2、素的試管，操作過程中避開任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞快速當心地分別。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。 3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。 5. 保存：假如樣本收集后不準時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20，避開反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品勻稱地充分解凍。 自備物品 1.酶標儀（450nm） 2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37恒溫箱 操作留意事項

3、1.試劑盒保存在2-8，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。 2.試驗中不用的板條應馬上放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。 3.濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對比或者空白；根據(jù)說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。 4.嚴格根據(jù)說明書中標明的時間、加液量及挨次進行溫育操作。 5.全部液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成 名稱 96孔配置 48孔配置 備注 微孔酶標板 12孔8條 12孔4條 無 標準品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 無 樣本稀釋液 6mL 3mL 無 檢測抗體-HRP 10m

4、L 5mL 無 20洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋 底物A 6mL 3mL 無 底物B 6mL 3mL 無 終止液 6mL 3mL 無 封板膜 2張 2張 無 說明書 1份 1份 無 自封袋 1個 1個 無 注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、7.5、15、30、60、120 pg/mL 試劑的預備 20洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。 2.自動洗板機：每孔注入洗液350L，浸泡1min，洗板5次。 操作步驟 1

5、.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4。 2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50L； 3.樣本孔先加待測樣本10L，再加樣本稀釋液40L；空白孔不加。 4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100L，用封板膜封住反應孔，37水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。 6.每孔加入底物A、B各50L，37避光孵育15min。 7.每孔加入終止液50L，15min內(nèi)，在450nm波特長測定各

6、孔的OD值。 結(jié)果推斷 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。 試劑盒性能 1.精確性：標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。 2.靈敏度：最DI檢測濃度小于1.0 pg/mL。 3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。 4.重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 5.貯藏：2-8，避光防潮保存。 6.有效期：6個月 從2021年開頭我們致力于在生命科學領(lǐng)域、生物醫(yī)學試驗外包及論文潤色服務，幫助客戶各類試驗服務及論文潤色，是客戶您值得信任的科研合作伙伴! 假如您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題討論，歡迎您與我們聯(lián)系。 試驗代做服務： ELISA試劑盒免費代檢測 CCK8檢測 HE染色 蛋白相互作用分析 Western Blot 免疫組化IHC染色 熒光定量PCR 動物模型服務 流式細胞檢測 免疫熒光染色 激光共聚焦 DNA甲基化試驗 石蠟/冰凍切片 透射電鏡服務 掃描電鏡試驗 蛋白雙向(2-D) 動物試驗