遠(yuǎn)慕技術(shù)：全血DNA、RNA提取方法

1、Word文檔 遠(yuǎn)慕技術(shù)：全血DNA、RNA提取方法 從全血中提取DNA和RNA應(yīng)當(dāng)說是最基本的工作了，提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的試驗(yàn)和分析，可供選擇的方法特別多，亂花漸欲迷人眼，如何選擇最/適合的方法，成了許多人試驗(yàn)開頭前最難以選擇的事情。我們從兩個(gè)方面，層層剝繭，分析最/佳的試驗(yàn)方法。 1、全血的采集保存和DNA的提取 I. 用含抗凝劑的采血管進(jìn)行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不會(huì)影響下游的反應(yīng)，假如沒有采血管，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提前預(yù)備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，顛倒混勻即可。保存于-20

2、至-80，一般2-3年內(nèi)均可以提取，保存時(shí)間越短，提取的質(zhì)量越高，最好在2個(gè)月內(nèi)提取。II. DNA提取方法的選擇：全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種（比如Qiagen、Promega、Bioteke；摒棄酚氯/仿手提的方法，時(shí)間長毒性大），原理及步驟基本相同。雖然各公司推出了N多型號(hào)，讓人不知如何去選擇，但從原理和操作步驟看，基本就是離心柱和溶液型兩種。一般來說，離心柱的提取純度高一些，但是處理量?。?.1-1ml）、得率略低；溶液型的提取量大（1-10ml）得率也高于離心柱。醫(yī)院的血液標(biāo)本一般在2ml以上，一般選擇溶液型的方法提取.在說到國產(chǎn)和進(jìn)口差別的時(shí)候，許多人以為進(jìn)口肯定比國產(chǎn)的

3、好，我們覺得沒有最/好，只有更好！在不斷的進(jìn)行試驗(yàn)優(yōu)化之后，全血基因組DNA提取試劑盒開創(chuàng)了第三代技術(shù)，不需要蛋白酶K消化，進(jìn)口的都是要借助蛋白酶K的??！削減了蛋白酶K現(xiàn)配現(xiàn)用的麻煩和消化的時(shí)間，而且提取量和穩(wěn)定性更好。III. 非抗凝血（凝固血）能否提??？答案是確定的，而且一點(diǎn)都不麻煩，提取效果和抗凝血沒有差別！在你找遍了進(jìn)口的全部品牌都找不到后，回過頭來您才發(fā)覺原來他就在身邊，遠(yuǎn)慕生物的凝固血基因組DNA提取試劑盒已經(jīng)有許多忠實(shí)的用戶。2、全血RNA如何提取I. 全血RNA提取過程哪些是RNA降解的因素？全血中RNA酶是特別豐富的，RNA在沒有愛護(hù)的狀態(tài)下很簡單降解！哪些是狀態(tài)RNA不受愛

4、護(hù)呢，比如紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞的過程，紅細(xì)胞裂解液是低濃度的平衡鹽溶液，沒有抑制RNase的成份，這時(shí)候RNA不受愛護(hù)；DNA酶消化的時(shí)候RNA也不受愛護(hù)，這個(gè)時(shí)候也沒有抑制RNase的成份。II. 什么樣的提取方法更好？我們在選擇方法的時(shí)候要傾向于對RNA全程有愛護(hù)的方法！一般的方法都是先用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，然后從白細(xì)胞提取核酸，還要經(jīng)過DNA酶的消化去除DNA，這種并不是最/好的方法，過程中有許多RNA降解的因素。所以直接裂解法是最/好的方法，將采集的血液快速加入3倍體積的裂解液RLSRP4001血液(液體樣本)總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)的裂解液，快速顛倒混勻。裂解液RLS

5、含有劇烈的蛋白變性劑，能快速變性蛋白，是RNase變性，不能對RNA降解。裂解后的混合液還可以用來運(yùn)輸，以避開RNA降解，這個(gè)方法成為遠(yuǎn)慕生物制作表達(dá)譜芯片RNA運(yùn)輸和提取的推舉方法。環(huán)境微生物DNA提取方法的突破農(nóng)藥、除草劑、各種污染物、人工合成物等異生物質(zhì)，對環(huán)境和土壤微生物的多樣性、種群變化產(chǎn)生明顯影響；轉(zhuǎn)基因作物是否發(fā)生土壤基因轉(zhuǎn)移的檢測，轉(zhuǎn)基因作物的平安性評價(jià)等方面的討論，都需要精確的提取高質(zhì)量的DNA進(jìn)行檢測！土壤中可培育的微生物可能不及全部微生物總數(shù)的0.3%，常規(guī)提取DNA的方法很難提取到DNA，很難把土壤中的腐殖酸去除潔凈，而微量的腐殖酸就可能導(dǎo)致PCR失敗。目前國/際上商用的試劑盒雖然能提取到土壤中微生物的DNA，但由于破裂方法采納玻璃珠或者鋼珠破裂，導(dǎo)致基因組斷裂嚴(yán)峻，影響DNA質(zhì)量；其次，由于必需購買破裂專用的破裂機(jī)或振蕩器，增加其使用成本；第三，其試劑盒為了保證DNA純度，采納了包括玻璃奶、離心吸附柱串聯(lián)的純化方式，導(dǎo)致了DNA大量的損失，得率很低，很難真正反映出土壤中微生物的多樣性。遠(yuǎn)慕生物推出的土壤基因組DNA快速提取試劑盒采納創(chuàng)新技術(shù)，摒棄了機(jī)械破裂細(xì)胞的方法，采納