基因組DNA提取純化的注意事項(xiàng)

1、Word文檔 基因組DNA提取純化的注意事項(xiàng) 大多數(shù)動(dòng)物組織可以用裂解緩沖液和蛋白酶/蛋白酶 K 進(jìn)行高效裂解。在加入裂解液之前需要將組織切成小塊，有條件的話建議使用 TissueLyser 或研缽等提前進(jìn)行均質(zhì)化。骨骼肌，心臟，皮膚等組織含有收縮蛋白，結(jié)締組織和膠原蛋白，所以利用蛋白酶 / 蛋白酶 K 進(jìn)行充分消化是必需的。 FFPE 樣本進(jìn)行 DNA 純化時(shí)需要預(yù)裂解。福爾馬林可由 PBS 洗滌除去，石蠟可由二甲苯和乙醇進(jìn)行去除。在蛋白酶消化后提高孵育的溫度有助于逆轉(zhuǎn)交聯(lián)，以便更好的從 FFPE 組織中釋放 DNA，從而有助于提高 DNA 產(chǎn)量和改善下游檢測(cè)性能。 從 FFPE 中得到的

2、DNA 通常比從新奇或凍存樣本中得到的 DNA 分子量?。籇NA 降解的程度則取決于樣本類(lèi)型，儲(chǔ)存時(shí)間和固定的條件。 從微量樣本中純化 DNA微量樣本中 DNA 的含量很低，通常小于 5 ng DNA, 通常需要使用 carrier RNA 來(lái)提高產(chǎn)量（不會(huì)影響下游分析檢測(cè)）。假如需要使用 carrier RNA，那么在測(cè)量 OD 的時(shí)候會(huì)由于使用 carrier RNA 造成濃度測(cè)量有偏差（由于 RNA 在 260 nm 也有汲?。Ｍ婆e使用 QIAamp DNA Micro Kit 從微量樣本中進(jìn)行 DNA 純化，該試劑盒采納 MinElute 硅膠膜柱，洗脫體積可以低至 20 l，同時(shí)通

3、過(guò)兩步洗滌去除 PCR 抑制劑等污染物，最/大程度從微量樣本中純化 DNA。從血液樣本中純化 DNA血液樣本可以是新奇或凍存全血或干血片，由于血液樣本在采集后會(huì)快速凝固，所以通常在采血時(shí)使用 EDTA，檸檬酸鹽或肝素進(jìn)行抗凝。經(jīng)過(guò)抗凝處理的血液樣本可以直接用于 DNA 純化，需要留意的是使用的 DNA 純化方法需要能夠去除上述抗凝劑，以免干擾下游 PCR 檢測(cè)。全血也可以在 DNA 純化前先進(jìn)行白細(xì)胞富集等再進(jìn)行 DNA 純化。從血液中純化 DNA 的產(chǎn)量很大程度上取決于血液中的白細(xì)胞數(shù)量，而白細(xì)胞數(shù)量則和血液的供體狀況有很大關(guān)聯(lián)（如貧血或感染都會(huì)造成白細(xì)胞數(shù)量變化）。上述狀況必需在進(jìn)行 DNA 純化前就應(yīng)當(dāng)考慮到。此外，有些動(dòng)物有有核血，這意味著這類(lèi)樣本中含有更多的 DNA，在從今類(lèi)血樣中純化 DNA，上樣量需要削減 10 倍左右。從細(xì)胞中純化 DNA哺乳動(dòng)物細(xì)胞可以使用蛋白酶 K 進(jìn)行裂解酵母細(xì)胞需要首先使用溶/菌酶對(duì)細(xì)胞壁進(jìn)行處理，然后使用蛋白酶或蛋白酶 K 進(jìn)行消化很多細(xì)菌細(xì)胞可以使用裂解 buffer 和蛋白酶 / 蛋白酶 K 進(jìn)行裂解，某些細(xì)菌如革蘭氏陽(yáng)性菌需要預(yù)先使用溶菌/酶對(duì)細(xì)胞壁進(jìn)行處理細(xì)菌細(xì)胞需要先從生物體液中沉淀，然后從中純化細(xì)菌 D