原發(fā)性血小板增多癥骨髓病理學(xué)特征觀察

1、原發(fā)性血小板增多癥骨髓病理學(xué)特征觀察原發(fā)性血小板增多癥骨髓病理學(xué)特征觀察ET是臨床論文聯(lián)盟.Ll.上較為少見(jiàn)的一種骨髓增殖性疾病yelprliferativedisease，PD，主要表現(xiàn)為骨髓巨核細(xì)胞增多、血小板持續(xù)增高，并伴有一系列臨床病癥。該病起病較為隱匿，容易誤診。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于ET的骨髓特點(diǎn)特別是關(guān)于其骨髓病理組織學(xué)改變報(bào)道較少。基于此,本文對(duì)北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所85例ET病人的骨髓活檢病理組織學(xué)特征并結(jié)合骨髓細(xì)胞學(xué)及分子生物學(xué)等檢測(cè)結(jié)果進(jìn)展了分析。1資料與方法1.1病例來(lái)源：2022-2022年北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所診治的ET患者85例；男36例，女49例。年齡19-8

2、1歲，中位年齡51歲。1.2骨髓樣品搜集方法：骨髓活檢針B65-01與髂后上棘分別采涂片標(biāo)本和活檢標(biāo)本。骨髓細(xì)胞學(xué)采用瑞氏常規(guī)染色。骨髓切片采用HE、Gri常規(guī)染色。骨髓活組織塊用苦味酸進(jìn)展固定，經(jīng)酒精梯度脫水后，采用Heapun系列包埋劑進(jìn)展包埋制成切片，其中3u切片進(jìn)展HE染色；5u切片進(jìn)展Gri染色。在LIPUS光學(xué)顯微鏡下，對(duì)骨髓活檢進(jìn)展形態(tài)學(xué)觀察，包括造血組織容量、粒、紅系有無(wú)病態(tài)造血、前體細(xì)胞定位紊亂Abnrallatinfiaturepreursr,ALIP、巨核細(xì)胞分布及形態(tài)變化等。造血組織容量采用網(wǎng)形目鏡測(cè)微器記點(diǎn)法計(jì)算，Gri陽(yáng)性密度分級(jí)參考文獻(xiàn)1。1.3網(wǎng)銀纖維積分標(biāo)準(zhǔn)a

3、nharan等改良法+正常:偶見(jiàn)纖細(xì)或粗大之單一纖維絲，或在單一纖維絲散在分布的同時(shí)，可見(jiàn)血管周圍的局限性纖維網(wǎng)絡(luò)，或良性淋巴濾泡四周的局限性纖維網(wǎng)絡(luò)。+：可見(jiàn)貫穿于切片大部分區(qū)域的纖細(xì)纖維網(wǎng)絡(luò)，粗大纖維偶見(jiàn)；或者于血管及良性淋巴濾泡附近的局限性網(wǎng)硬蛋白纖維增多。+：可見(jiàn)彌漫性纖維網(wǎng)絡(luò)，伴以散在分布的粗纖維增多現(xiàn)象。+：可見(jiàn)彌散性以粗纖維為主的網(wǎng)絡(luò)形成，但膠原纖維之染色陽(yáng)性。+：可見(jiàn)彌散性的粗纖維網(wǎng)絡(luò)，伴以染色陽(yáng)性的膠原纖維形成區(qū)。1.4染色體檢測(cè):利用G顯帶的技術(shù)對(duì)患者骨髓標(biāo)本進(jìn)展染色體分析的方法參見(jiàn)文獻(xiàn)。21.4基因檢測(cè):基因檢測(cè)JAT2-V-617F突變的方法參見(jiàn)文獻(xiàn)。3其他觀察指標(biāo)：靜

4、脈血檢測(cè)血常規(guī)并進(jìn)展涂片觀察。并取骨髓檢測(cè)染色體及交融基因。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS13.0軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析?？ǚ綑z驗(yàn)用于評(píng)估兩組間檢出率的顯著性。兩組間差異應(yīng)用單因素方差分析。P0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2結(jié)果2.1血常規(guī)檢查:85例患者B中位數(shù)10.61109/L5.5-35.5109/L。Hb中位數(shù)138g/L68-192g/L。Plt中位數(shù)838109/L520-2023109/L。其中5例病人外周血涂片發(fā)現(xiàn)幼稚粒細(xì)胞。B計(jì)數(shù)增高10109/L患者47例。Hb增高者女150g/L，男160g/L18例。貧血Hb女110g/L，男120g/L患者6例。2.2骨髓細(xì)胞學(xué)檢查:8

5、5例患者中骨髓增生活潑54例，增生明顯活潑1例，極度活潑1例。骨髓增生低下21例。5例患者取材時(shí)出現(xiàn)干抽。所有患者粒、紅兩系均未見(jiàn)明顯病態(tài)造血，且原始細(xì)胞分類計(jì)數(shù)均小于5%。全片巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)中位數(shù)為780292只，以產(chǎn)板、顆粒巨核細(xì)胞為主。所有患者血小板均為成大堆分布，并可見(jiàn)大血小板。2.3骨髓塑料活檢組織病理學(xué)檢查:85例患者中，5例患者可見(jiàn)基質(zhì)出血、水腫。造血組織容量造血組織容量(v%)=造血細(xì)胞組織擊中點(diǎn)數(shù)造血細(xì)胞組織擊中點(diǎn)數(shù)+脂肪細(xì)胞100中位數(shù)為60%20%95%。所有患者粒系均增生活潑，14例患者紅系增生偏低下。7例患者可見(jiàn)前體細(xì)胞定位紊亂。所有患者巨核細(xì)胞均有不同程度異常增生10

6、只/高倍鏡視野，其中30例患者巨核細(xì)胞為片狀分布。70例患者可見(jiàn)明顯巨核系病態(tài)造血，其中以宏大、過(guò)度及不規(guī)那么分葉核為主，38例患者可見(jiàn)小巨核細(xì)胞，但未見(jiàn)典型淋巴樣小巨核細(xì)胞，1例可見(jiàn)單圓核及多圓核。Gri染色結(jié)果顯示，81例患者為陽(yáng)性，其中65例為網(wǎng)狀纖維輕度增生+，16例患者骨髓可見(jiàn)明顯纖維化+。2.4染色體及交融基因檢測(cè):85例患者中有76例檢測(cè)了JAK2-V617F基因突變，51例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為67.1%。75例患者檢測(cè)了Br-ablP210交融基因表達(dá)情況，全部為陰性。79例患者進(jìn)展了染色體檢查，所有患者均未發(fā)現(xiàn)Ph染色體，但其中2例可見(jiàn)核型異常。我們進(jìn)一步比照了JAK2-V617F

7、基因突變陽(yáng)性患者和JAK2-V617F基因未突變患者巨核細(xì)胞形態(tài)改變及纖維化程度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，51例JAK2-V617F基因突變陽(yáng)性患者中，有44患者86.3%可見(jiàn)巨核系明顯病態(tài)造血過(guò)度及不規(guī)那么分葉核、小巨核、單園及多園核等，10例患者19.6%可見(jiàn)明顯纖維化+，而25例JAK2-V617F基因未突變患者中，有20患者80%可見(jiàn)巨核系明顯病態(tài)造血，有6例患者24%可見(jiàn)明顯纖維化，兩組患者均無(wú)明顯差異P0.05。3討論3.1巨核系異常。ET是一種主要累及巨核細(xì)胞系的PD，以女性多見(jiàn)，50-60歲為發(fā)病頂峰4。本病臨床表現(xiàn)不一，主要有頭暈、乏力、血栓形成及脾腫大等表現(xiàn)5。本文85例病人中，女性明顯

8、多于男性，患者中位年齡為51歲，均與文獻(xiàn)報(bào)道一致。本組患者骨髓細(xì)胞學(xué)中原始細(xì)胞分類計(jì)數(shù)正常，紅系、粒系均未見(jiàn)明顯病態(tài)造血。而巨核細(xì)胞那么明顯增多，以顆粒、產(chǎn)板巨核細(xì)胞為主，易見(jiàn)胞體宏大且胞漿豐富。巨核細(xì)胞病態(tài)造血是ET的重要表現(xiàn)，我們?cè)诠撬杌顧z中發(fā)現(xiàn)，大部分病人可發(fā)現(xiàn)明顯巨核系病態(tài)造血，其中以發(fā)現(xiàn)宏大、過(guò)度及不規(guī)那么分葉核細(xì)胞最為常見(jiàn)，部分病人也可觀察到小巨核細(xì)胞，并偶可見(jiàn)到單園及多園核改變。而粒系、紅系那么未見(jiàn)到明顯病態(tài)造血現(xiàn)象，但個(gè)別患者8.2%可見(jiàn)到ALIP。3.2網(wǎng)狀纖維增生:全部病例中絕大部分病人95.3%病人均出現(xiàn)不同網(wǎng)狀纖維增生，可能是由于過(guò)度增生的巨核細(xì)胞或血小板釋放生長(zhǎng)因子(

9、plateletderivedgrthfatrPDGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transfringgrthfatrTGF-)和表皮生長(zhǎng)因子(epideralgrthfatrEGF)等纖維母細(xì)胞刺激因子導(dǎo)致纖維組織增生6。但大多數(shù)病人為網(wǎng)狀纖維輕度增生，而19.8%的患者骨髓那么出現(xiàn)明顯纖維化，這提示在伴明顯纖維化ET的診斷過(guò)程中，需與原發(fā)性骨髓纖維化priaryyelfibrsisPF相鑒別，但I(xiàn)F患者骨髓活檢中易出現(xiàn)明顯膠原變性且巨核細(xì)胞增多且體積小為主7，而本實(shí)驗(yàn)組中，所有ET患者均未發(fā)現(xiàn)明顯膠原變性，并且雖有部分患者可觀察到小巨核細(xì)胞，但主要以宏大、過(guò)度及不規(guī)那么分葉核為主。這也提示骨髓液抽取

10、過(guò)程中，可能由于纖維化而出現(xiàn)干抽，因此在ET診斷過(guò)程中須結(jié)合骨髓細(xì)胞學(xué)和活檢同時(shí)檢查，以到達(dá)互補(bǔ)的作用。此外，骨髓巨核系病態(tài)造血比巨核細(xì)胞數(shù)量增多更具有診斷意義。3.3基因及染色體改變:本組病人中有67.1%的病人有JAK2-V617F基因的突變，JAK2-V617F基因的突變是PD較為特異的分子標(biāo)志之一，在ET診斷中也具有重要意義8，11，12。美國(guó)2022年血液學(xué)年會(huì)推薦假設(shè)JAK2-V617F陽(yáng)性，外周血PLT計(jì)數(shù)持續(xù)大于450109/L，并且骨髓巨核細(xì)胞系增生明顯活潑者，即可診斷ET9,13。BR-AblP210交融基因是L特異性分子標(biāo)志之一。因此，JAK2-V617基因突變結(jié)合BR-ABL基因結(jié)合檢測(cè)不僅可區(qū)分原發(fā)性和繼發(fā)性血小板增多癥，而且還可除外L引起的血小板增多。為進(jìn)一步討論JAK2-V617F基因突變與ET骨髓病理改變之間有無(wú)相關(guān)論文聯(lián)盟.Ll.性，我們還比照了JAK2-V617F基因突變陽(yáng)性患者和JAK2-V617F基因未突變患者可見(jiàn)明顯巨核系病態(tài)造血及骨髓纖維化的患者例數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組患者之間巨核系明顯病態(tài)造血及骨髓纖維化的患者例數(shù)的差異均無(wú)顯著性。結(jié)果提示，JAK2-V617F基因突變可能與ET患者骨髓巨核系形態(tài)及纖