醫(yī)學(xué)微生物學(xué)：第24章 呼吸道病毒

1、第24章 呼吸道病毒呼吸道病毒（Viruses associated with respiratory infections） 以呼吸道為侵入門戶 在呼吸道粘膜上皮細胞增殖 引起呼吸道局部感染或呼吸道以外組織 器官病變.90%以上的急性呼吸道感染由該類病毒引起。呼吸道病毒分類正黏病毒科 流感病毒副黏病毒科 副流感病毒、呼吸道合胞病毒、 麻疹病毒、腮腺炎病毒其他病毒科 腺病毒、風疹病毒、鼻病毒、 冠狀病毒、呼腸病毒病毒科病毒種類所致呼吸道感染性疾病正粘病毒甲、乙、丙型流感病毒 流行性感冒副粘病毒副流感病毒15型 普通感冒、支氣管炎等呼吸道合胞病毒 嬰兒支氣管炎、支氣管肺炎麻疹病毒 麻疹腮腺炎病毒

2、 流行性腮腺炎披膜病毒風疹病毒 小兒風疹、胎兒畸形或先天性 風疹綜合征小RNA病毒鼻病毒 普通感冒、急性上呼吸道感染冠狀病毒普通冠狀病毒SARS冠狀病毒 普通感冒、急性上呼吸道感染 SARS （嚴重急性呼吸道感染綜合征）腺病毒腺病毒 小兒肺炎主要的呼吸道病毒及其所致呼吸道感染性疾病 對人或某些動物細胞表面的粘蛋白有親和性， 有包膜，具有分節(jié)段RNA基因組的一類病毒。只有流行性感冒病毒（influenza virus）一個 種，包括人流感病毒和動物流感病毒。第一節(jié) 正黏病毒科（orthomyxoviridae） 流行性感冒病毒，簡稱流感病毒，有甲、乙、丙三型，其中甲型流感病毒最為重要，極易變異，

3、是反復(fù)流行最為頻繁和引起流感全球流行的重要病原體。一、流行性感冒病毒球形或者橢圓形，80120nm，有包膜，單鏈RNA病毒包膜上有放射狀突起糖蛋白，主要是血凝素和神經(jīng)氨酸酶分子不耐熱耐酸，56C30分鐘被滅活 ，pH3可存活。（一）生物學(xué)特性 結(jié)構(gòu)（有包膜的單鏈分片段的RNA病毒） 生物學(xué)性狀核心分節(jié)段的（-）SS RNA核蛋白（NP） RNA多聚酶基質(zhì)蛋白 (M蛋白)包膜刺突血凝素HA 神經(jīng)氨酸酶NA 流感病毒的結(jié)構(gòu)核衣殼病毒分片段的RNA，結(jié)合有核蛋白（NP）以及與復(fù)制和轉(zhuǎn)錄有關(guān)的三種依賴RNA的RNA多聚酶蛋白。呈螺旋對稱。包膜 基質(zhì)蛋白（M蛋白）包膜的內(nèi)層覆蓋在核衣殼外面，抗原性穩(wěn)定，

4、具有型特異性。 外膜來自宿主細胞的脂質(zhì)雙層膜。 刺突（HA、NA）生物學(xué)性狀12435678PB2PB1RNPRNAM2M1NA神經(jīng)氨酸酶HA血凝素甲型流感病毒結(jié)構(gòu)示意圖分節(jié)段的（-） SSRNA核糖核蛋白（RNP）PA RNA多聚酶刺 突 血凝素（HA） 柱狀糖蛋白，為三聚體； 與病毒吸附和穿入宿主細胞有關(guān)。能與人、雞等紅細胞表面受體結(jié)合引起血凝； HA具有免疫原性，型特異性，其相應(yīng)抗體能抑制血凝現(xiàn)象和中和病毒，是主要的保護性抗體； 易發(fā)生抗原性變異，引起流感的流行。 生物學(xué)性狀刺 突 神經(jīng)氨酸酶（NA） 四個亞單位組成的四聚體，聚合成蘑菇狀； 能水解細胞膜上的多糖受體末端的N-乙酰神經(jīng)氨酸

5、，使病毒從細胞上解離，去感染更多的細胞； NA刺激機體產(chǎn)生的抗體可以抑制病毒的釋放，但不能中和病毒的感染； 易發(fā)生抗原性變異。生物學(xué)性狀流感病毒復(fù)制過程示意圖生物學(xué)性狀流感病毒的分型與抗原變異 分型 根據(jù)RNP和M蛋白抗原性分：甲、乙、丙三型； 甲型根據(jù)HA和NA抗原性不同，再區(qū)分為若干亞型（H1H15、N1N9）； 乙型、丙型至今未發(fā)現(xiàn)亞型。生物學(xué)性狀抗原變異抗原漂移（antigenic drift） 因HA或NA的點突變造成，變異幅度小，屬量變，引起局部中、小型流行。 抗原轉(zhuǎn)換（antigenic shift） 因HA或NA的大幅度變異造成，屬質(zhì)變，導(dǎo)致新亞型的出現(xiàn)，引起世界性的暴發(fā)流行。

6、生物學(xué)性狀 可在雞胚和培養(yǎng)細胞中增殖，但不引起明顯的病變；可用紅細胞凝集試驗、紅細胞吸附試驗檢測病毒的存在。 初次分離接種雞胚羊膜腔，傳代適應(yīng)后可 接種雞胚尿囊腔。 組織培養(yǎng)可用原代猴腎細胞、犬腎傳代細胞。 動物接種以雪貂最敏感。 生物學(xué)性狀培養(yǎng)特性在MDCK細胞產(chǎn)生的CPE（100，明視野）絨毛尿囊膜 尿囊卵黃囊羊膜腔雞胚接種 致病性傳染源-病人或病毒攜帶者致病機理-病毒不入血病毒-呼吸道-毒素樣物質(zhì)進入血液致病性與免疫性全身中毒癥狀局部粘膜上皮炎癥微生物學(xué)檢查病毒分離 取患者咽漱液或鼻咽拭，接種雞胚或培養(yǎng)細胞。血清學(xué)診斷 血凝抑制試驗、中和試驗、補體結(jié)合試驗、酶免疫測定。抗原檢測 直接從病

7、人呼吸道分泌物、脫落細胞中檢測抗原。分型鑒定 核酸雜交、PCR、序列分析。Influenzavirus A培養(yǎng)物DFA染色陽性）抗原檢測二、甲型H1N1流感病毒對人致病的副黏病毒主要有 麻疹病毒 腮腺炎病毒 副流感病毒 呼吸道合胞病毒等第二節(jié) 副黏病毒科（paramyxovirus） 麻疹病毒（measles virus）麻疹病毒是麻疹的病原體是兒童時期最為常見的急性傳染病該病四季都可發(fā)生，但冬春季發(fā)病率最高與亞急性硬化性全腦炎（SSPE）相關(guān)生物學(xué)性狀 球形，有包膜，單負股RNA，不分節(jié)段的病毒； 包膜刺突為H蛋白和F蛋白； 只有一個血清型，抗原性穩(wěn)定； 能在人胚腎等細胞中增殖，融合細胞成多

8、核巨細胞，核內(nèi)、胞漿內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性包涵體； 抵抗力弱。致病性與免疫性 人是麻疹病毒的自然宿主； 急性期患者為傳染源，通過飛沫或鼻腔分泌物傳播； 免疫力牢固，抗H抗體和抗F抗體可抵御再感染，母親抗體可保護新生兒； 恢復(fù)期主要為細胞免疫。臨床表現(xiàn)潛伏期約1012天；體溫略高、咳嗽、流涕、好打噴嚏及淚眼，癥狀持續(xù)35天；體溫突然升高（達到4040.5），口頰粘膜出現(xiàn)柯氏斑，隨后出現(xiàn)紅色班丘疹，從耳部開始，23天后遍及全身；4天后消退，脫屑。微生物學(xué)檢查法 呼吸道合胞病毒（respiratory syscytial virus，RSV）嬰幼兒病毒性嚴重呼吸道感染常見的主要病原體。在嬰幼兒中引起急性哮喘性

9、支氣管炎或肺炎,成人中可引起上呼吸道感染。通過手、污染物品和呼吸道傳播，易在冬季流行；是醫(yī)源性感染的重要病原體。 有包膜，單負股RNA病毒； 包膜刺突為F蛋白和G蛋白； 在傳代細胞中增殖，形成多核巨細胞，胞漿內(nèi)嗜酸 性包涵體。生物學(xué)性狀 致病機制侵入呼吸道后在上皮細胞內(nèi)增殖，病毒不入血；病理免疫造成細胞損傷；支氣管壞死物與粘液、纖維蛋白粘連在一起，易導(dǎo)致氣道阻塞?？刹l(fā)嚴重的細支氣管炎和肺炎。微生物學(xué)檢查分離時可取患者含漱液、咽拭子；在人胚腎和猴腎細胞內(nèi)培養(yǎng)增殖觀察CPE；血清學(xué)診斷：DFA、免疫層析快速法等分子生物學(xué)：RT-PCR檢測RNA。其他呼吸道病毒 第 三 節(jié) 冠狀病毒及SARS-冠

10、狀病毒SARS-associated coronavirus （ SARS相關(guān)冠狀病毒） 在2003年3月，發(fā)現(xiàn)一種新的冠狀病毒（SARS-CoV）可引起嚴重急性呼吸道綜合癥（SARS）的爆發(fā)。基因的組成和其它冠狀病毒相似。系統(tǒng)發(fā)生學(xué)分析及序列比較發(fā)現(xiàn)SARS-CoV 與之前確定的冠狀病毒無近源關(guān)系。認為是一種新的冠狀病毒冠狀病毒傳播：空氣飛沫，密切接觸抵抗力：較強，中效以上消毒劑潛伏期：平均6.4天臨床表現(xiàn)：發(fā)熱、乏力、頭痛、肌肉關(guān)節(jié)酸痛 呼吸困難、 低血氧飽和度實驗室檢查：淋巴細胞數(shù)量下降，輕度轉(zhuǎn)氨酶上升臨床進程：感染一周后有所好轉(zhuǎn)，但隨后加重， 肺泡損壞嚴重，呼吸衰竭致病標本采集鼻咽拭子

11、/吸液標本 放入病毒保存/運輸液內(nèi)，28保存，長期保存需置于-70冰箱。漱口液、糞便標本雙份血清標本 急性期血清在發(fā)病盡可能早時間采集，通常發(fā)病后1w以內(nèi)?；謴?fù)期血清標本在發(fā)病后34w采集。 SARS實驗室診斷標準(WHO)PCR(RT-PCR) 至少2個解剖部位標本、1個部位至少連續(xù)2d標本，或1份標本至少2次自原始標本提取RNA后擴增陽性。培養(yǎng) Vero-E6血清學(xué) 平行檢測急性期和恢復(fù)期血清標本，發(fā)現(xiàn)血清SARS冠狀病毒(CoV)抗體陽轉(zhuǎn)和/或抗體滴度4倍或以上升高。SARS-CoV-PUMC01感染Vero-E6細胞的CPE特點(呈葡萄串樣并有細胞脫落) (III期), 100SARS

12、-CoV-PUMC01感染的Vero細胞與SARS患者血清間接免疫熒光IgM抗體反應(yīng), 200SARS血清學(xué)診斷技術(shù)說明(1)方法：WHO推薦酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和免疫熒光試驗（IFA）。另外有中和試驗(NT)和免疫印跡(WB)等。 NT為金標準，但操作繁瑣且需要活病毒。雙份血清標本：最可靠。急性期是指發(fā)病后盡可能早時間采集，但不超過發(fā)病后第7d?；謴?fù)期血清標本是發(fā)病后34周。檢測抗體的種類：SARS-CoV-IgG、IgM、IgA或總抗體，但SARS-CoV-IgG更為可靠。平行檢測：保證抗體滴度具有可比性。如ELISA法檢測時將雙份血清標本置于同一塊酶免疫反應(yīng)板內(nèi)。IFA法檢測時將雙份血清標本置于同一張玻片檢測。SARS血清學(xué)診斷技術(shù)說明(2)非特異反應(yīng)即交叉反應(yīng)，WHO的SARS實驗室檢測專家委員會特別強調(diào)的問題。目前WHO還無法推薦一種在特異性和敏感性均滿意的血清學(xué)試劑盒。SARS-CoV過去沒