免疫熒光試劑盒臨床應(yīng)用課件

1、免疫熒光試劑盒在生殖道感染病原體檢測(cè)中的臨床應(yīng)用深圳市邁科龍生物技術(shù)有限公司免疫熒光技術(shù) 免疫熒光標(biāo)記技術(shù)（immunofluorescence technique）是標(biāo)記免疫技術(shù)的一種，是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。 經(jīng)過不斷改進(jìn)發(fā)展，免疫熒光技術(shù)已成為微生物學(xué)、免疫學(xué)、病理學(xué)及免疫組織化學(xué)中準(zhǔn)確又快速的一種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)方法。1 免疫熒光原理 將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與樣本中的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。 基本反應(yīng)原理為抗原抗體間的反應(yīng)2 免疫熒光特點(diǎn) 特異性強(qiáng)、敏感性高、檢測(cè)速度快（單個(gè)樣本處理時(shí)間約4

2、0分鐘，批量樣本報(bào)告時(shí)間以半天或隔天最佳） 直接免疫熒光法（DFA） 將標(biāo)記的特異熒光抗體直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定溫度和時(shí)間的染色，在熒光顯微鏡下便可觀察到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結(jié)合物所發(fā)出的熒光。直接免疫熒光示意圖免疫熒光技術(shù)的應(yīng)用 免疫熒光技術(shù)應(yīng)用范圍極其廣泛，可以應(yīng)用于生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。 尤其適用病原微生物的快速鑒定檢測(cè)，具有形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)的雙重優(yōu)點(diǎn)。 臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)組織(CLIA)指出直接免疫熒光法最適合用于日常臨床和參考實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。邁科龍免疫熒光法生殖道病原體檢測(cè)試劑盒免疫熒光試劑盒注冊(cè)證號(hào)適用范圍沙眼衣原體 C.T.國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第3401154號(hào)宮頸感染、尿

3、路感染、產(chǎn)前篩查、不孕不育奈瑟氏淋球菌 N.G.國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第3401157號(hào)宮頸感染、尿路感染、產(chǎn)前篩查、不孕不育陰道加德納菌 G.V.國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第3401155號(hào)BV、復(fù)發(fā)性BV、產(chǎn)前篩查、不孕不育白色念珠菌 C.A.國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第3401153號(hào)霉菌性陰道病單純皰疹病毒II型 HSV-II國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第3401156號(hào)生殖器皰疹陰道毛滴蟲 T.V.國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第3401158號(hào)滴蟲性陰道病造成非淋菌性尿道炎的重要病原體，其感染已超過淋球菌感染而位居性傳播疾病之首可致尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎對(duì)懷孕可致早產(chǎn)、流

4、產(chǎn)、胎膜早破、胚胎停育等嚴(yán)重妊娠并發(fā)癥產(chǎn)道感染可致嬰兒急性結(jié)膜炎母嬰傳播可致新生兒眼炎或肺炎引起不孕不育沙眼衣原體1.臨床意義沙眼衣原體臨床檢驗(yàn)方法臨床檢驗(yàn)方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點(diǎn)膠體金法52.78差98.86方法簡(jiǎn)便、快捷，適于短時(shí)內(nèi)大批量標(biāo)本的測(cè)定，特異性低，靈敏度不高，易造成假陰性，陽性檢出率5%，臨床實(shí)際檢出率多僅1-2%漏檢率太高，不適用于婦產(chǎn)等低感染人群篩查免疫熒光法92.7297.89操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，可檢出標(biāo)本中存在的原體和包涵體。具有專一性好、特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn)，在衣原體感染早期就可被發(fā)現(xiàn)，對(duì)衣原體感染的早期診斷具有特殊意義。沙眼衣原體檢測(cè)“金標(biāo)準(zhǔn)”沙眼衣

5、原體陽性圖片治療方案初發(fā)病例多西環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服710天阿奇霉素1g，一次頓服，飯前1小時(shí)或飯后2小時(shí)服用紅霉素500mg，口服，4次/日，連服7天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，連服7天氧氟沙星300mg，口服，2次/日，連服7天米諾環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服10天3.臨床檢驗(yàn)方法臨床檢驗(yàn)方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點(diǎn)快速BV試驗(yàn)758895敏感性高、但其他細(xì)菌、滴蟲等都能對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生干擾，導(dǎo)致假陽性。代謝產(chǎn)物，間接指標(biāo)，重復(fù)性差革蘭染色47.3794.77598簡(jiǎn)便、快速；背景復(fù)雜、易漏檢，需要實(shí)驗(yàn)者具備豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)尋找足夠數(shù)量的線索細(xì)胞不具備特異性

6、陰道加德納菌免疫熒光法94.5397.51操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，可直接檢測(cè)出主要致病菌，標(biāo)本需要量少、特異性強(qiáng)、結(jié)果判斷直觀、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)直接檢測(cè)病原微生物，檢測(cè)意義清晰陰道加德納菌陽性圖片治療方案非孕期推薦方案甲硝唑500 mg，口服，2次/d，共7d0.75%甲硝唑膏(5g) ，陰道上藥，2次/d，共5d2%克林霉素膏(5g)，陰道上藥，1次/晚，共7d替代方案克林霉素300mg，口服，2次/d, 共7d克林霉素栓300g, 陰道上藥，1次/晚，共3d妊娠期甲硝唑500mg，口服，2次/d，共7d甲硝唑250mg，口服，3次/d，共7d氯潔霉素300mg，口服，2次/d，共7d哺乳期選擇

7、局部用藥，盡量避免全身用藥2.2.2 女性淋病合并癥淋菌性盆腔炎: 包括淋球菌性子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、腹膜炎等，好發(fā)于育齡婦女。多數(shù)病人有白帶增多，且為膿性或血性。雙下腹痛，伴有畏寒、發(fā)熱、頭痛、厭食、惡心、嘔吐等淋菌性前庭大腺炎：出現(xiàn)前庭大腺紅腫、疼痛，腺體開口處有膿性分泌物，大陰唇下1/2腫脹明顯，還可伴有全身癥狀和腹股溝淋巴結(jié)腫大。3. 臨床檢驗(yàn)方法臨床檢驗(yàn)方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點(diǎn)革蘭染色法男性：95%；女性：75%/操作簡(jiǎn)便，對(duì)男性急性樣本準(zhǔn)確率較高。對(duì)于慢性樣本及女性樣本，由于雜菌較多，背景復(fù)雜，易漏檢。不適用女性患者，尤其是慢性女性患者 培養(yǎng)法859510

8、0受標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、保存以及病人的病情等因素影響較大，測(cè)定所需時(shí)間較長(zhǎng)，不利于快速診斷與及時(shí)治療，并且易受抗生素影響，出現(xiàn)假陰性。陽性檢出率偏低，報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)免疫熒光法93.2898.17操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，不受標(biāo)本的運(yùn)輸、保存及菌體活力影響，靈敏度高、特異性強(qiáng)，適用于臨床各期患者。快速、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單衛(wèi)生部淋病診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS268-2007）指出，免疫熒光法可用于奈瑟氏淋球菌培養(yǎng)樣本鑒定。奈瑟氏淋球菌陽性圖片治療方案推薦方案頭孢曲松125mg，單次肌注頭孢克肟400mg，單次頓服環(huán)丙沙星500mg，單次頓服氧氟沙星400mg， 單次頓服左氧氟沙星250mg，單次頓服白色念珠菌陰道正常菌群之

9、一，在各種致病因素影響之下，念珠菌優(yōu)勢(shì)繁殖引起外陰陰道念珠菌病(VVC)VVC是僅次于細(xì)菌性陰道病的陰道感染性疾病，75%的育齡婦女一生至少有一次發(fā)病白色念珠菌是陰道感染念珠菌的主要病原體，占80%-90%孕期感染未治療或治療不徹底可能因產(chǎn)時(shí)陰道操作引起產(chǎn)道感染，導(dǎo)致子宮復(fù)舊不良或傷口感染等妊娠合并念珠菌性陰道病患者的胎兒多數(shù)在通過產(chǎn)道后感染，新生兒心、肺、腦組織等均存在念珠菌病灶1.臨床意義 包括女性陰道炎及龜頭包皮炎。陰道炎：陰道分泌物粘稠、色黃或奶酪樣斑片，在陰道壁上可見灰白色假膜樣斑片，有瘙癢或灼熱感。龜頭包皮炎：較少見，可見包皮及龜頭潮紅、干燥光滑，包皮內(nèi)側(cè)及冠狀溝可見覆有假膜的斑片

10、。2.臨床表現(xiàn)：白色念珠菌臨床檢驗(yàn)方法臨床檢驗(yàn)方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點(diǎn)濕片法75檢出率偏低，其檢出率為30%-50%，背景復(fù)雜、易漏檢革蘭染色8895背景復(fù)雜、易漏檢免疫熒光法94.197.23操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，靈敏度高、特異性強(qiáng)，不易受樣本中雜菌的影響。白色念珠菌陽性圖片單純皰疹病毒II型生殖器潰瘍最常見的原因之一，引起生殖器皰疹侵犯生殖器皮膚、粘膜引起紅斑、水痘、糜爛及潰瘍性損害生殖器感染與宮頸癌有關(guān)增高對(duì)人類免疫缺陷病毒（HIV）的易感性生殖器潰瘍促進(jìn)HIV異性間傳播生殖器感染具有反復(fù)發(fā)作性早期診斷和治療對(duì)促進(jìn)患者皮損愈合，降低其傳染性及危害性有重要意義1.臨床意義原發(fā)性生

11、殖器皰疹外生殖器或肛門周圍有群簇或散在的小水皰，24天后破潰形成糜爛或潰瘍，自覺疼痛腹股溝淋巴結(jié)常腫大，有壓痛常伴有發(fā)熱、頭痛、乏力等全身癥狀 復(fù)發(fā)性生殖器皰疹起疹前局部有燒灼感，針刺感或感覺異常外生殖器或肛門周圍群簇小水皰，很快破潰形成糜爛或淺潰瘍，自覺癥狀較輕。 2.臨床表現(xiàn)3. 臨床檢驗(yàn)方法臨床檢驗(yàn)方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點(diǎn)PCR法9410095.7檢測(cè)HSV DNA，實(shí)驗(yàn)條件要求高，多在專科醫(yī)院應(yīng)用，難以普及推廣免疫熒光法95.297.59操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，不受皮疹部位及其病毒量影響，靈敏度高、特異性強(qiáng)開展方便單純皰疹病毒II型陽性圖片治療方案生殖器皰疹首次發(fā)作推薦方案無環(huán)

12、鳥苷400mg，3次/d，口服，710d無環(huán)鳥苷200mg，5次/d，口服， 710d泛昔洛韋250mg，3次/d，口服，710d伐昔洛韋1g，2次/d，口服，710d 如果未完全治愈, 治療療程可超過10 d 間歇治療：即發(fā)作時(shí)給予抗病毒藥物，推薦在出現(xiàn)前驅(qū)癥狀或皮損出現(xiàn)24h內(nèi)開始用藥，可選擇的方案包括：口服阿昔洛韋200mg每日5 次，共5 天阿昔洛韋400mg 每日3 次，共5 天伐昔洛韋500mg每日2 次，共5 天伐昔洛韋300mg每日2 次，共7 天泛昔洛韋250mg每日3 次共5 天 對(duì)于初發(fā)性生殖器皰疹，劑量不變，療程延長(zhǎng)至10 天 長(zhǎng)期抑制治療：對(duì)于發(fā)作頻繁的患者，可推薦長(zhǎng)

13、期抑制療法，可選擇的方案包括：阿昔洛韋400mg，口服2次/d泛昔洛韋250mg，口服2次/d伐昔洛韋500mg， 口服1次/d伐昔洛韋1.0g，口服1次/d特殊人群的治療：新生兒皰疹：早期靜脈給子抗病毒治療，如阿昔洛韋（每次5mg/kg）每8小時(shí)l次，癥狀控制后，可考慮口服治療維持。妊娠皰疹：初發(fā)者，口服阿昔洛韋400mg每天3次，有嚴(yán)重并發(fā)癥者應(yīng)靜脈滴注阿昔洛韋。頻繁復(fù)發(fā)或新近感染的孕婦，可在妊娠最后4周給予連續(xù)口服阿昔洛韋。合并HIV感染者：與普通人群感染治療策略相同，對(duì)發(fā)作次數(shù)頻繁者更主張長(zhǎng)期抑制療法，但應(yīng)關(guān)注耐藥性。試劑盒選擇 國家規(guī)定臨床檢驗(yàn)室必須使用有注冊(cè)證的產(chǎn)品，并定期進(jìn)行試劑

14、盒有效性檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)根據(jù)該試劑臨床試驗(yàn)報(bào)告，了解其質(zhì)量水平；詢問試劑的組成，如原料來源等判斷試劑的優(yōu)劣；參考室間質(zhì)評(píng)的評(píng)價(jià)結(jié)果，了解試劑的質(zhì)控成績(jī)；根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的評(píng)價(jià)結(jié)果，了解試劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。 標(biāo)本的采集和保存臨床醫(yī)生應(yīng)遵循樣本采集原則，采集足夠的樣本量以反應(yīng)其真實(shí)的樣本信息。采樣過程中應(yīng)避免血液污染樣本，以免與血清中的抗體結(jié)合而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。取樣后如不能及時(shí)涂片，樣本需放入28冰箱保存。1 涂片 將樣本輕緩?fù)磕ㄔ谳d玻片上，晾干； 避免反復(fù)涂抹拭子2 固定使用固定劑固定5到10分鐘，自然晾干；常用固定劑：甲醇、丙酮或無水乙醇 操作流程3 加樣用微量移液器吸取一定量試劑均勻滴加在玻片涂樣處，避免產(chǎn)生氣泡；每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到一份樣本一吸頭，避免發(fā)生交叉污染。4 孵育置于37水浴鍋孵育，孵育時(shí)間20到30分鐘。避免試劑在玻