免疫熒光試劑盒臨床應用課件

1、免疫熒光試劑盒在生殖道感染病原體檢測中的臨床應用深圳市邁科龍生物技術有限公司免疫熒光技術 免疫熒光標記技術（immunofluorescence technique）是標記免疫技術的一種，是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術基礎上建立起來的一項技術。 經(jīng)過不斷改進發(fā)展，免疫熒光技術已成為微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中準確又快速的一種免疫學實驗方法。1 免疫熒光原理 將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與樣本中的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。 基本反應原理為抗原抗體間的反應2 免疫熒光特點 特異性強、敏感性高、檢測速度快（單個樣本處理時間約4

2、0分鐘，批量樣本報告時間以半天或隔天最佳） 直接免疫熒光法（DFA） 將標記的特異熒光抗體直接加在抗原標本上，經(jīng)一定溫度和時間的染色，在熒光顯微鏡下便可觀察到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結合物所發(fā)出的熒光。直接免疫熒光示意圖免疫熒光技術的應用 免疫熒光技術應用范圍極其廣泛，可以應用于生物學的各個領域。 尤其適用病原微生物的快速鑒定檢測，具有形態(tài)學和免疫學的雙重優(yōu)點。 臨床實驗室改進組織(CLIA)指出直接免疫熒光法最適合用于日常臨床和參考實驗室檢測。邁科龍免疫熒光法生殖道病原體檢測試劑盒免疫熒光試劑盒注冊證號適用范圍沙眼衣原體 C.T.國食藥監(jiān)械（準）字2010第3401154號宮頸感染、尿

3、路感染、產(chǎn)前篩查、不孕不育奈瑟氏淋球菌 N.G.國食藥監(jiān)械（準）字2010第3401157號宮頸感染、尿路感染、產(chǎn)前篩查、不孕不育陰道加德納菌 G.V.國食藥監(jiān)械（準）字2010第3401155號BV、復發(fā)性BV、產(chǎn)前篩查、不孕不育白色念珠菌 C.A.國食藥監(jiān)械（準）字2010第3401153號霉菌性陰道病單純皰疹病毒II型 HSV-II國食藥監(jiān)械（準）字2010第3401156號生殖器皰疹陰道毛滴蟲 T.V.國食藥監(jiān)械（準）字2010第3401158號滴蟲性陰道病造成非淋菌性尿道炎的重要病原體，其感染已超過淋球菌感染而位居性傳播疾病之首可致尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎對懷孕可致早產(chǎn)、流

4、產(chǎn)、胎膜早破、胚胎停育等嚴重妊娠并發(fā)癥產(chǎn)道感染可致嬰兒急性結膜炎母嬰傳播可致新生兒眼炎或肺炎引起不孕不育沙眼衣原體1.臨床意義沙眼衣原體臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點膠體金法52.78差98.86方法簡便、快捷，適于短時內(nèi)大批量標本的測定，特異性低，靈敏度不高，易造成假陰性，陽性檢出率5%，臨床實際檢出率多僅1-2%漏檢率太高，不適用于婦產(chǎn)等低感染人群篩查免疫熒光法92.7297.89操作簡便，檢測時間短，可檢出標本中存在的原體和包涵體。具有專一性好、特異性強、靈敏度高等特點，在衣原體感染早期就可被發(fā)現(xiàn)，對衣原體感染的早期診斷具有特殊意義。沙眼衣原體檢測“金標準”沙眼衣

5、原體陽性圖片治療方案初發(fā)病例多西環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服710天阿奇霉素1g，一次頓服，飯前1小時或飯后2小時服用紅霉素500mg，口服，4次/日，連服7天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，連服7天氧氟沙星300mg，口服，2次/日，連服7天米諾環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服10天3.臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點快速BV試驗758895敏感性高、但其他細菌、滴蟲等都能對檢測產(chǎn)生干擾，導致假陽性。代謝產(chǎn)物，間接指標，重復性差革蘭染色47.3794.77598簡便、快速；背景復雜、易漏檢，需要實驗者具備豐富的實踐經(jīng)驗尋找足夠數(shù)量的線索細胞不具備特異性

6、陰道加德納菌免疫熒光法94.5397.51操作簡便，檢測時間短，可直接檢測出主要致病菌，標本需要量少、特異性強、結果判斷直觀、靈敏度高等優(yōu)點直接檢測病原微生物，檢測意義清晰陰道加德納菌陽性圖片治療方案非孕期推薦方案甲硝唑500 mg，口服，2次/d，共7d0.75%甲硝唑膏(5g) ，陰道上藥，2次/d，共5d2%克林霉素膏(5g)，陰道上藥，1次/晚，共7d替代方案克林霉素300mg，口服，2次/d, 共7d克林霉素栓300g, 陰道上藥，1次/晚，共3d妊娠期甲硝唑500mg，口服，2次/d，共7d甲硝唑250mg，口服，3次/d，共7d氯潔霉素300mg，口服，2次/d，共7d哺乳期選擇

7、局部用藥，盡量避免全身用藥2.2.2 女性淋病合并癥淋菌性盆腔炎: 包括淋球菌性子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、腹膜炎等，好發(fā)于育齡婦女。多數(shù)病人有白帶增多，且為膿性或血性。雙下腹痛，伴有畏寒、發(fā)熱、頭痛、厭食、惡心、嘔吐等淋菌性前庭大腺炎：出現(xiàn)前庭大腺紅腫、疼痛，腺體開口處有膿性分泌物，大陰唇下1/2腫脹明顯，還可伴有全身癥狀和腹股溝淋巴結腫大。3. 臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點革蘭染色法男性：95%；女性：75%/操作簡便，對男性急性樣本準確率較高。對于慢性樣本及女性樣本，由于雜菌較多，背景復雜，易漏檢。不適用女性患者，尤其是慢性女性患者 培養(yǎng)法859510

8、0受標本的采集、運輸、保存以及病人的病情等因素影響較大，測定所需時間較長，不利于快速診斷與及時治療，并且易受抗生素影響，出現(xiàn)假陰性。陽性檢出率偏低，報告時間長免疫熒光法93.2898.17操作簡便，檢測時間短，不受標本的運輸、保存及菌體活力影響，靈敏度高、特異性強，適用于臨床各期患者。快速、準確、操作簡單衛(wèi)生部淋病診斷標準（WS268-2007）指出，免疫熒光法可用于奈瑟氏淋球菌培養(yǎng)樣本鑒定。奈瑟氏淋球菌陽性圖片治療方案推薦方案頭孢曲松125mg，單次肌注頭孢克肟400mg，單次頓服環(huán)丙沙星500mg，單次頓服氧氟沙星400mg， 單次頓服左氧氟沙星250mg，單次頓服白色念珠菌陰道正常菌群之

9、一，在各種致病因素影響之下，念珠菌優(yōu)勢繁殖引起外陰陰道念珠菌病(VVC)VVC是僅次于細菌性陰道病的陰道感染性疾病，75%的育齡婦女一生至少有一次發(fā)病白色念珠菌是陰道感染念珠菌的主要病原體，占80%-90%孕期感染未治療或治療不徹底可能因產(chǎn)時陰道操作引起產(chǎn)道感染，導致子宮復舊不良或傷口感染等妊娠合并念珠菌性陰道病患者的胎兒多數(shù)在通過產(chǎn)道后感染，新生兒心、肺、腦組織等均存在念珠菌病灶1.臨床意義 包括女性陰道炎及龜頭包皮炎。陰道炎：陰道分泌物粘稠、色黃或奶酪樣斑片，在陰道壁上可見灰白色假膜樣斑片，有瘙癢或灼熱感。龜頭包皮炎：較少見，可見包皮及龜頭潮紅、干燥光滑，包皮內(nèi)側及冠狀溝可見覆有假膜的斑片

10、。2.臨床表現(xiàn)：白色念珠菌臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點濕片法75檢出率偏低，其檢出率為30%-50%，背景復雜、易漏檢革蘭染色8895背景復雜、易漏檢免疫熒光法94.197.23操作簡便，檢測時間短，靈敏度高、特異性強，不易受樣本中雜菌的影響。白色念珠菌陽性圖片單純皰疹病毒II型生殖器潰瘍最常見的原因之一，引起生殖器皰疹侵犯生殖器皮膚、粘膜引起紅斑、水痘、糜爛及潰瘍性損害生殖器感染與宮頸癌有關增高對人類免疫缺陷病毒（HIV）的易感性生殖器潰瘍促進HIV異性間傳播生殖器感染具有反復發(fā)作性早期診斷和治療對促進患者皮損愈合，降低其傳染性及危害性有重要意義1.臨床意義原發(fā)性生

11、殖器皰疹外生殖器或肛門周圍有群簇或散在的小水皰，24天后破潰形成糜爛或潰瘍，自覺疼痛腹股溝淋巴結常腫大，有壓痛常伴有發(fā)熱、頭痛、乏力等全身癥狀 復發(fā)性生殖器皰疹起疹前局部有燒灼感，針刺感或感覺異常外生殖器或肛門周圍群簇小水皰，很快破潰形成糜爛或淺潰瘍，自覺癥狀較輕。 2.臨床表現(xiàn)3. 臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點PCR法9410095.7檢測HSV DNA，實驗條件要求高，多在?？漆t(yī)院應用，難以普及推廣免疫熒光法95.297.59操作簡便，檢測時間短，不受皮疹部位及其病毒量影響，靈敏度高、特異性強開展方便單純皰疹病毒II型陽性圖片治療方案生殖器皰疹首次發(fā)作推薦方案無環(huán)

12、鳥苷400mg，3次/d，口服，710d無環(huán)鳥苷200mg，5次/d，口服， 710d泛昔洛韋250mg，3次/d，口服，710d伐昔洛韋1g，2次/d，口服，710d 如果未完全治愈, 治療療程可超過10 d 間歇治療：即發(fā)作時給予抗病毒藥物，推薦在出現(xiàn)前驅癥狀或皮損出現(xiàn)24h內(nèi)開始用藥，可選擇的方案包括：口服阿昔洛韋200mg每日5 次，共5 天阿昔洛韋400mg 每日3 次，共5 天伐昔洛韋500mg每日2 次，共5 天伐昔洛韋300mg每日2 次，共7 天泛昔洛韋250mg每日3 次共5 天 對于初發(fā)性生殖器皰疹，劑量不變，療程延長至10 天 長期抑制治療：對于發(fā)作頻繁的患者，可推薦長

13、期抑制療法，可選擇的方案包括：阿昔洛韋400mg，口服2次/d泛昔洛韋250mg，口服2次/d伐昔洛韋500mg， 口服1次/d伐昔洛韋1.0g，口服1次/d特殊人群的治療：新生兒皰疹：早期靜脈給子抗病毒治療，如阿昔洛韋（每次5mg/kg）每8小時l次，癥狀控制后，可考慮口服治療維持。妊娠皰疹：初發(fā)者，口服阿昔洛韋400mg每天3次，有嚴重并發(fā)癥者應靜脈滴注阿昔洛韋。頻繁復發(fā)或新近感染的孕婦，可在妊娠最后4周給予連續(xù)口服阿昔洛韋。合并HIV感染者：與普通人群感染治療策略相同，對發(fā)作次數(shù)頻繁者更主張長期抑制療法，但應關注耐藥性。試劑盒選擇 國家規(guī)定臨床檢驗室必須使用有注冊證的產(chǎn)品，并定期進行試劑

14、盒有效性檢測試劑盒評價根據(jù)該試劑臨床試驗報告，了解其質量水平；詢問試劑的組成，如原料來源等判斷試劑的優(yōu)劣；參考室間質評的評價結果，了解試劑的質控成績；根據(jù)權威部門發(fā)布的評價結果，了解試劑的質量優(yōu)劣。 標本的采集和保存臨床醫(yī)生應遵循樣本采集原則，采集足夠的樣本量以反應其真實的樣本信息。采樣過程中應避免血液污染樣本，以免與血清中的抗體結合而導致假陰性結果。取樣后如不能及時涂片，樣本需放入28冰箱保存。1 涂片 將樣本輕緩涂抹在載玻片上，晾干； 避免反復涂抹拭子2 固定使用固定劑固定5到10分鐘，自然晾干；常用固定劑：甲醇、丙酮或無水乙醇 操作流程3 加樣用微量移液器吸取一定量試劑均勻滴加在玻片涂樣處，避免產(chǎn)生氣泡；每次加樣應更換吸嘴，做到一份樣本一吸頭，避免發(fā)生交叉污染。4 孵育置于37水浴鍋孵育，孵育時間20到30分鐘。避免試劑在玻