利咽解毒顆粒微生物限度檢查方法驗(yàn)證

1、利咽解毒顆粒微生物限度檢查方法驗(yàn)證利咽解毒顆粒微生物限度檢查方法驗(yàn)證利咽解毒顆粒功能主治：具有清肺利咽，解毒退熱的作用；用于外感風(fēng)熱所致的咽痛、咽干，喉核紅腫、兩腮腫痛，發(fā)熱惡寒；急性扁桃體炎，急性咽炎，腮腺炎見上述證候者。?中國藥典?2022年版一部附錄XIII規(guī)定當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)展細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適宜于該藥品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測(cè)定。因此，我們按中國藥典2022年版一部規(guī)定的常規(guī)法對(duì)利咽解毒顆粒進(jìn)展了細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)回收率的試驗(yàn)。1材料1.1樣品利咽解毒顆粒消費(fèi)廠家：神威藥業(yè)集團(tuán)，批號(hào)10090732、10090931、100

2、90932。規(guī)格：每袋裝6g無蔗糖，相當(dāng)于飲片19g。1.2儀器設(shè)備脈動(dòng)真空滅菌柜，型號(hào)XG1.U本文由論文聯(lián)盟.LL.搜集整理山東新華醫(yī)療器械股份；生化培養(yǎng)箱，型號(hào)LRH-150B廣東省醫(yī)療器械廠；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號(hào)GHP-9160上海一恒科技；電熱鼓風(fēng)枯燥箱，型號(hào)101-2A上海滬南科學(xué)儀器聯(lián)營廠；生物平安柜，型號(hào)BH-1300IIA/B3蘇州安泰空氣技術(shù)。1.3培養(yǎng)基及試劑改良馬丁培養(yǎng)基批號(hào)090908、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)090325、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)100105、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)1003082、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基批號(hào)091215、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基批號(hào)1003082、膽鹽乳

3、糖培養(yǎng)基批號(hào)1003022、4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基批號(hào)091120、聚山梨酯80、司盤80、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉等。1.4驗(yàn)證用菌種：金黃色葡萄球菌B26003；大腸埃希菌B44102；枯草芽孢桿菌B63501；黑曲霉菌F98003；白色念珠菌F98001均購自中國藥品生物制品檢定所。2菌液制備方法分別取經(jīng)33培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)物1l，參加至9l0.9%無菌Nal溶液中，10倍稀釋至10-5約為50100fu/l的菌懸液，備用。取經(jīng)25培養(yǎng)48h的白色念珠菌改良馬丁液體培養(yǎng)物1l，參加至9l0.9%無菌Nal溶液中

4、，10倍稀釋至10-6約為50100fu/l的菌懸液，備用。取經(jīng)25接種黑曲霉的新穎培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2328培養(yǎng)57天，參加35l含0.05%l/l聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后用塞有脫脂棉的彎型針頭注射器吸出孢子懸液，再將脫脂棉去掉，將孢子懸液移至無菌試管內(nèi)，用含0.05%l/l聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1l含孢子數(shù)50100fu的孢子懸液，備用。3供試液制備取樣品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100l，振搖溶解制成1：10供試液。4回收率實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果4.1驗(yàn)證試驗(yàn)進(jìn)展3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的

5、回收率。在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率應(yīng)均不低于70%。假設(shè)試驗(yàn)組的菌回收率試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率均不低于70%，照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)；假設(shè)任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率低于70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法等方法或結(jié)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)展方法驗(yàn)證。4.2供試品對(duì)照組：取1：10的供試液，每個(gè)平皿中加1l，共加4個(gè)平皿，2個(gè)參加營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，2個(gè)參加玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每個(gè)平皿參加培養(yǎng)基

6、約20l，搖勻，放冷凝固。細(xì)菌置33培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，霉菌酵母菌置25培養(yǎng)120小時(shí)計(jì)數(shù)。4.3試驗(yàn)組：取1：10的供試液1l和上述2.菌液制備中制備好的5種菌液1l，分別加至平皿中，參加營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基約20l，搖勻，放冷凝固。細(xì)菌置33培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，霉菌酵母菌置25培養(yǎng)120小時(shí)計(jì)數(shù)。4.4菌液組：取與試驗(yàn)組一樣的5種菌液1l，分別加至平皿中，參加營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基約20l，搖勻，放冷凝固。細(xì)菌置33培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，霉菌酵母菌置25培養(yǎng)箱培養(yǎng)120小時(shí)計(jì)數(shù)。結(jié)果見下表：4.5稀釋劑對(duì)照組：取稀釋劑1l和上述制備好的陽性對(duì)照菌液1l，加至平皿中，參加營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基約20l，搖勻，放冷凝固。細(xì)菌置33培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，霉菌酵母菌置25培養(yǎng)箱培養(yǎng)120小時(shí)計(jì)數(shù)。5討論根據(jù)從上述結(jié)果可以看出：1稀釋劑對(duì)照組回收率試驗(yàn)均大于70%，說明稀釋劑對(duì)測(cè)定無干擾2采用平皿法檢驗(yàn)供試品，人工污染5株代表菌株，該供