上課好單克隆抗體課件

1、上課好單克隆抗體上課好單克隆抗體植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞細(xì)胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株溫故知新:植物體細(xì)胞雜交過(guò)程植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念： 動(dòng)物細(xì)胞融合（cell fusion）也成細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。 融合和形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱(chēng)為雜交細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念： 動(dòng)物細(xì)胞融合（ce3.融合過(guò)程：誘導(dǎo)融合的方法？3.融合過(guò)程：誘導(dǎo)融合的方法？誘導(dǎo)方法：物理方

2、法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇（PEG)誘導(dǎo)方法：物理方法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇 為什么滅活的 病毒能作誘導(dǎo)劑？3.融合過(guò)程： 為什么滅活的 病毒能作誘導(dǎo)劑？3.融合過(guò)程：滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。 滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。P52生物技術(shù)資料卡滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白4.意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、

3、動(dòng)植物之間）成為可能。5.應(yīng)用：最重要的用途是制備單克隆抗體4.意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理使用的酶誘導(dǎo)方法主要用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶 物理方法（離心、振蕩、電激） 化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)思考？1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2. 抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點(diǎn)？ 主要分布在哪里？3

4、. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體思考？1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？(三)單克隆抗體上課好單克隆抗體思考？1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2. 抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點(diǎn)？ 主要分布在哪里？3. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體思考？1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？(三)單克隆抗體抗原決定簇：抗原表面具有的某些特定的化學(xué)基團(tuán)，能決定抗原特異性，是免疫細(xì)胞識(shí)別抗原的重要依據(jù)。各種抗原的決定簇?cái)?shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種?？乖瓫Q定簇：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效

5、應(yīng)B細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)多種抗體抗原 抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點(diǎn)：多種效 血清抗體（也稱(chēng)多克隆抗體） 由血清中提取的抗體是由不同淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達(dá)百萬(wàn)種以上，稱(chēng)為多克隆抗體。特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏?？乖患兛贵w不純 抗原 動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B 抗體血清抗體（也稱(chēng)多克隆抗體）抗原不純抗體不純 抗原 每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體。 如果利用單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖（克?。纬杉?xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體單克隆抗體。問(wèn)題： 怎樣獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體呢？ 每一個(gè)B淋巴細(xì)

6、胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗在體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖形成細(xì)胞群?jiǎn)?？什么樣的?xì)胞能夠在體外無(wú)限增殖呢？ 腫瘤細(xì)胞！在體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖形成細(xì)胞群?jiǎn)?？單克隆抗體的制備單克隆抗體:單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué) 性質(zhì)單一特異性強(qiáng)的抗體利用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)方案：?jiǎn)慰寺】贵w的制備單克隆抗體:單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué) 性質(zhì)單如何誘導(dǎo)融合？ 加入聚乙二醇（PEG）如何得到B淋巴細(xì)胞？3.制備單克隆抗體的過(guò)程如何誘導(dǎo)融合？ 細(xì)胞兩兩融合后，有哪些

7、類(lèi)型？B-B B-瘤(雜交瘤細(xì)胞) 瘤-瘤 如何篩選出雜交瘤細(xì)胞？ 首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類(lèi)型？B-B 如何篩選出雜交細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒(méi)有S途徑，可是能不斷分裂增殖。 你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？ 小資料：細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷 在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細(xì)胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的

8、雜種細(xì)胞因?yàn)榭梢岳昧馨图?xì)胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。 在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細(xì)胞！上課好單克隆抗體陽(yáng)性孔方法抗原-抗體雜交法 在單克隆抗體制備過(guò)程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。陽(yáng)性孔方法抗原-抗體雜交法 在單克隆抗體制備過(guò)程中如何得到大量的單克隆抗體？ 體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體 化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)如何得到大量的單克隆抗體？ 骨髓瘤細(xì)胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞（選擇培養(yǎng)基）（抗體檢測(cè)）細(xì)胞融合雜交細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備1、（只考慮兩兩融合）融合細(xì)胞幾種類(lèi)型？2

9、、本過(guò)程中進(jìn)行了兩次篩選，目的分別是什 么？第1次篩選要淘汰哪些細(xì)胞？3、雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？4、本過(guò)程利用的哪些技術(shù)？思考以下問(wèn)題：思考以下問(wèn)題：2、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高2、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高單克隆抗體篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過(guò)程：特點(diǎn)：既能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體又能大量繁殖特點(diǎn)：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備注射抗原免疫單克隆抗體篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)篩選骨髓瘤誘導(dǎo)細(xì)胞3、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效