實(shí)驗(yàn)一普通生物顯微鏡的使用市公開課獲獎(jiǎng)?wù)n件

1、試驗(yàn)一、普通生物顯微鏡使用(一)動(dòng)、植物細(xì)胞、真菌觀測(cè)及生物繪圖法第1頁第1頁一、實(shí)驗(yàn)?zāi)浚?.理解普通光學(xué)顯微鏡和體視顯微鏡基本構(gòu) 造及功用，并正確掌握使用和維護(hù)辦法。 2. 觀測(cè)一些真核細(xì)胞結(jié)構(gòu)，學(xué)習(xí)基本生物繪 圖辦法。3. 學(xué)習(xí)暫時(shí)裝片制作辦法。第2頁第2頁二、試驗(yàn)原理：（一）、顯微鏡概述： 顯微鏡是觀測(cè)細(xì)胞主要工具。依據(jù)光源不同，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。第3頁第3頁（二）、顯微鏡創(chuàng)造：1. 最早由荷蘭眼鏡商在16前后制造，它 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)樸，放大倍數(shù)只有1030倍，能夠 觀測(cè)一些小昆蟲，如跳蚤等，因而有些人稱它 為“

2、跳蚤鏡”。這種顯微鏡是用光線照明，屬于光學(xué)顯微鏡。第4頁第4頁2. 英國物理學(xué)家羅伯特虎克（Robert Hooke， 1635 1703）研制出能夠放大140倍光學(xué)顯微 鏡，并用它來觀測(cè)軟木薄片，發(fā)覺了細(xì)胞。第5頁第5頁3. 1673年有個(gè)名叫列文.虎克（Antoni van Leeuwenhoek）荷蘭人用自己制造顯微鏡觀測(cè)到了被他稱為“小動(dòng)物”微生物世界。他也被稱為微生物開山祖。第6頁第6頁4. 1938年，德國工程師魯斯卡（ Ernest Ruska, 1906-1988) 制造出世界第一臺(tái)透射電子顯微鏡 （TEM）。1952年，英國工程師Charles Oatley 制造出第一臺(tái)掃描

3、電子顯微鏡（SEM）第7頁第7頁（三）、顯微鏡分辨率: 分辨率：也稱為分辨力，它是指能把兩個(gè)物點(diǎn)分 辨清楚最小距離。 分辨率數(shù)值越高，分辨距離越大，則分辨率越低。反之亦然。因此，分辨率是以分辨距離來表示。 其計(jì)算公式為: D=0.61入/NA NA=n sina/2 式中D為分辨率，A為光波波長，NA為物鏡數(shù)值孔徑(鏡口率)。 第8頁第8頁 在物鏡上，有鏡口率(N.A.)標(biāo)志，它反應(yīng)當(dāng)鏡頭 分辨力大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高。各物鏡鏡口率下列表： 物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm) 10 0.25 5.40 40 0.65 0.39 100 1.30 0.11顯微鏡總放大倍數(shù)=目鏡

4、放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù) 公式為: M = K1 K2 第9頁第9頁焦點(diǎn)深度: 顯微鏡調(diào)焦到看清標(biāo)本某一點(diǎn)時(shí)，不 僅是這一物點(diǎn)，并且它上下兩側(cè)也 能看清楚厚度叫做焦點(diǎn)深度。 要看到標(biāo)本全厚度，必須調(diào)整螺旋 仔細(xì)地從上到下進(jìn)行觀測(cè)。第10頁第10頁三、材料和儀器：儀器：普通光學(xué)顯微鏡、體視鏡（附顯微用具： 擦鏡紙、香柏油、二甲苯、載玻片、蓋玻片）材料與器材：新鮮酵母液、滴管、鑷子、培養(yǎng) 皿、標(biāo)本盒（內(nèi)有各種裝片）第11頁第11頁四、試驗(yàn)環(huán)節(jié)：（一）普通顯微鏡使用及維護(hù)：I .光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)普通生物顯微鏡由2部分構(gòu)成：光學(xué)部分：包括物鏡、目鏡、光源、聚光器，是顯 微鏡主體。：機(jī)械部分：包括鏡筒、鏡臂、

5、鏡座、鏡臺(tái)(載物臺(tái)）、 調(diào)整旋鈕、物鏡轉(zhuǎn)換器等，用于固定材 料和觀測(cè)以便。第12頁第12頁II .顯微鏡使用1. 觀測(cè)前準(zhǔn)備工作 .顯微鏡在使用之前應(yīng)檢查一下它各個(gè)部件是否 完整和正常，并對(duì)載物臺(tái)、目鏡、物鏡以及聚光 器上端透鏡進(jìn)行必要清潔工作。然后進(jìn)行調(diào)整。 .觀測(cè)時(shí)要雙眼同時(shí)睜開，一邊觀測(cè)一邊進(jìn)行統(tǒng)計(jì) 或描繪。 .觀測(cè)時(shí)所用材料、藥物和各種器具要預(yù)先備好第13頁第13頁2. 使用辦法： （1）低倍鏡使用：觀測(cè)任何標(biāo)本，均需從低倍鏡 開始。 檢查：檢查顯微鏡是否完好。 準(zhǔn)備：將顯微鏡放于前策略偏左，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕 將載物臺(tái)下降，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器使低倍鏡正對(duì)通 光孔。 對(duì)光： 放標(biāo)本片： 調(diào)整焦距

6、 計(jì)算放大倍數(shù)：第14頁第14頁錯(cuò)誤原因：如按上述操作，仍然看不到圖象， 也許有下列原因：A. 轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)整太快，超出焦點(diǎn)，需重新調(diào)整。B. 物鏡未對(duì)準(zhǔn)通光孔。C. 標(biāo)本沒放在視野內(nèi)，需移動(dòng)標(biāo)本片尋找觀測(cè) 對(duì)象。D. 光線太強(qiáng)或太弱。尤其觀測(cè)透明或未染色標(biāo) 本時(shí)，應(yīng)將光線調(diào)稍暗些，有利觀測(cè)。第15頁第15頁（2）高倍鏡使用： 依照上述操作環(huán)節(jié)，先用低倍鏡找到清楚物象， 將需要觀測(cè)部分移到視野中央， 眼睛從側(cè)面注視物鏡，移動(dòng)轉(zhuǎn)換器，換高倍鏡， 看目鏡，微調(diào)細(xì)調(diào)旋鈕，至看到清楚物象。 第16頁第16頁錯(cuò)誤原因：如按上述操作，仍然看不到圖象， 也許有下列原因：A. 觀測(cè)標(biāo)本不在視野內(nèi)。應(yīng)在低倍鏡下找到

7、后，移到視野中央，再換高倍鏡觀測(cè)。B. 標(biāo)本放反了。C. 焦距未調(diào)好。第17頁第17頁（3）油鏡使用： 先用低倍鏡觀測(cè)標(biāo)本情況。 換高倍鏡，把需觀測(cè)部分移至視野中央。 將聚光器升至最高位置，光圈開至最大。 在蓋玻片所要觀測(cè)位置滴一小滴香柏油， 放于載物臺(tái)。 把油鏡移至工作位置。 第18頁第18頁 慢慢調(diào)整粗細(xì)調(diào)整旋鈕，使載物臺(tái)緩慢上升，同 時(shí)細(xì)心從側(cè)面觀測(cè)物鏡前端與標(biāo)本之間距離。 先使物鏡前端與油滴接觸，再慢慢上升載物臺(tái)， 至物鏡前端靠近而沒有碰觸到蓋玻片為止。（小 心損傷油鏡或裝片） 眼睛從目鏡觀測(cè)，緩慢調(diào)整細(xì)調(diào)旋鈕至看清標(biāo)本（注意只能下降載物臺(tái)）第19頁第19頁 觀測(cè)完畢，下降載物臺(tái)，使油

8、鏡離開光軸，及時(shí)做好油鏡清潔工作（先用潔凈擦鏡紙擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴濕擦鏡紙擦拭兩次，最后用干擦鏡紙擦拭一次）。 玻片上油可用“拉紙法”擦去：把一小張擦鏡紙蓋在載玻片油滴上，其上滴一兩滴二甲苯，趁濕把紙往外拉，連續(xù)幾次，即可擦凈（注意不要使用過多二甲苯，并及時(shí)擦潔凈上面香柏油，以免使裝片受損）。第20頁第20頁注意：假如不出現(xiàn)物象或者目的不抱負(fù)要重找，A. 在加油區(qū)之外重找時(shí)應(yīng)按：低倍高倍 油鏡程序。 B. 在加油區(qū)內(nèi)重找應(yīng)按：低倍油鏡程序， 不得經(jīng)高倍鏡，以免油沾污鏡頭。 第21頁第21頁3. 顯微鏡使用后復(fù)原：（1）下降聚光器約1cm，（2）使物鏡離開光軸，使通光孔正隊(duì)兩個(gè)物鏡中

9、 間，提升載物臺(tái)至本來位置，（3）把載物臺(tái)上標(biāo)本移動(dòng)器移至適當(dāng)位置，（4）關(guān)閉電源。第22頁第22頁4、顯微鏡使用注意事項(xiàng)（1）持鏡時(shí)必須是右手握臂、左手托座姿勢(shì)，不 可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。（2）輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在試驗(yàn)臺(tái)邊 緣，以免碰翻落地。（3）保持顯微鏡清潔，光學(xué)和照明部分只能用擦 鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機(jī)械部分 用布擦拭。（4）水滴、酒精或其它藥物切勿接觸鏡頭和載物臺(tái) 假如沾污應(yīng)馬上擦凈。第23頁第23頁（5）放置玻片標(biāo)本時(shí)要對(duì)準(zhǔn)通光孔中央，且不能 反放玻片，預(yù)防壓壞玻片或碰壞物鏡。（6）要養(yǎng)成兩眼同時(shí)睜開習(xí)慣，以左眼觀測(cè)視 野右眼用以繪圖。（7）

10、不要隨意取下目鏡，以預(yù)防塵土落入物鏡， 也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。（8）使用完畢后，必須復(fù)原才干放回鏡箱內(nèi)。第24頁第24頁（二）、體視鏡使用 體視顯微鏡又稱實(shí)體顯微鏡，它在觀測(cè)物體時(shí)能產(chǎn)生正立三維空間影像。立體感強(qiáng)，成像清楚和寬敞，又含有長工作距離，并可依據(jù)觀測(cè)物特點(diǎn)選取不同反射和透射光照明，是合用范圍非常廣泛常規(guī)顯微鏡。第25頁第25頁（三）、標(biāo)本觀測(cè)“5 ”字片：低倍人血涂片：低倍 高倍 油鏡兔精蟲涂片：低倍 高倍單層扁平上皮：低倍 高倍動(dòng)、植物細(xì)胞有絲分裂切片：低倍 高倍日本血吸蟲雌雄合抱裝片：肉眼 低倍第26頁第26頁（四）、酵母暫時(shí)裝片制作1. 滴一滴鮮酵母液于潔凈載玻片上

11、，2. 輕輕蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)氣憤泡，3. 低倍、高倍鏡下觀測(cè)。注意：觀測(cè)時(shí)注意光線不要太強(qiáng)，以免影響觀測(cè) 效果。第27頁第27頁（五）生物學(xué)繪圖辦法：1. 用2H鉛筆繪輪廓，用HB鉛筆描深，線條要光滑，2. 圖及文字部分全部用鉛筆，文字用漢字楷書，3. 繪圖紙上端寫清試驗(yàn)名稱，中部畫圖，下部寫清所繪圖名稱、放大倍數(shù)，4. 標(biāo)明圖中各部分名稱，用直線引線并標(biāo)在圖右側(cè)，名稱較多時(shí)，可先標(biāo)在右側(cè)，再標(biāo)在左側(cè)，5. 可用光滑黑點(diǎn)表示明暗不同，不可大面積涂黑。第28頁第28頁五、作業(yè)：1. 繪圖：繪出你用油鏡所觀測(cè)到人紅細(xì)胞視野圖。2. 思考題： （1）總結(jié)使用顯微鏡應(yīng)尤其注意幾種問題。 （2）從低倍物鏡轉(zhuǎn)高倍物鏡時(shí)應(yīng)注意哪幾點(diǎn)？ （3）接物鏡上各銘文有何意義？ （4）用油鏡觀測(cè)和嗣后操作環(huán)節(jié)。為何要 用香柏油作介質(zhì)？尚有哪些