DB1301-T122-2008牛乳和奶粉中氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

1、DB1301石家莊市地方標(biāo)準(zhǔn)DB1301/T1222008牛乳和奶粉中氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)規(guī)程2008-05-10 實(shí)施2008-05-10 2008-05-10 實(shí)施石家莊市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB1301/T122DB1301/T122200811前 言.本標(biāo)準(zhǔn)由石家莊市畜牧水產(chǎn)局提出。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人，左曉磊、焦銀彩、張蕾、孫莉、張彩云DB1301/T122DB1301/T122200844牛乳和奶粉中氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛乳和奶粉中氣霉素殘留檢測(cè)的測(cè)定原理、儀器設(shè)備、試劑和溶液、抽樣、樣品制備、 檢測(cè)步驟和結(jié)果計(jì)算。

2、本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛乳和奶粉中氯霉素殘留的檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的 修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究 是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GBZT 6682-1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)則和試驗(yàn)方法中華人民共和國(guó)官方取樣程序3測(cè)定原理氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)的基礎(chǔ)是間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，微孔條上包被偶聯(lián)抗原，樣本中殘留物氯霉 素和微孔條上包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗氣霉素抗體，加入酶標(biāo)二抗，用酶基質(zhì)顯色，樣本吸光度值與其所 .含殘留物

3、氯霉素的含量呈反比。4儀器設(shè)備4.1儀器設(shè)備4.1.1微孔板酶標(biāo)儀：配備450nm濾光片。4.1.2洗板機(jī)。4.1.3微量可調(diào)移液器及配套吸頭：?jiǎn)蔚?0皿、50匹、100心八道50300心4.1.4振蕩器4.1.5 離心機(jī)：N3000g4.1.6氮吹儀。7搖床。4.1.8冰箱。4.1.9分析夭平：感量0.0也。4.1.10渦旋儀。.4. 2氯琴素檢測(cè)試劑盒4.2.1酶標(biāo)板（微孔板條及板條架）04.2.2氣霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。4.2.3抗體濃縮液。4.2.4濃縮復(fù)溶液。4.2.5濃縮洗滌液。6酶標(biāo)二抗。4.2.7底物/發(fā)色劑。4.2.8反應(yīng)終止液。5試劑和溶液5.1水為去高子水，符合GB/T668

4、21992規(guī)定的二級(jí)水。5.2試劑5.2.1亞硝基鐵氤化鈉溶液(0.36M) : 10.7gNazFe (CN) 5 NQ 2IW溶于100ml去離子水；5.2.2硫酸鋅溶液(1M) : 28.8gZnS0 7筋溶于IpOml去離子水；5.2.3乙酸乙酯。5.3溶液5.3.1稀釋復(fù)溶液：用去離子水(5.1)稀釋廠商提供的濃縮復(fù)溶液(4.2.4) o5.3.2酶標(biāo)抗體：用稀釋復(fù)溶液(5.3.1)稀釋廠商提供的抗體濃縮液(4.2.3) o5.3.3稀釋洗滌液：用去離子水(5.1)稀釋廠商提供的濃縮洗滌液(4.2.5)。5.4注意事項(xiàng)以上所有試劑，除特別注明，均有試劑盒廠商提供。不同品牌的試劑盒其提

5、供材料可能略有差別。6抽樣依據(jù)中華人民共和國(guó)官方取樣程序取適量牛乳或奶粉樣品，備用。7樣品制備7.1牛乳樣品處理方法一7.1.1取牛乳樣品l(TC3000g以上離心1 Omin,吸陰上層脂肪；7.1.2取5mL除脂乳樣至離心管牝 加入150皿亞箱基鐵気化鈉溶液(5.2.1),出現(xiàn)沉淀，振蕩后加入150pL硫酸鋅溶液(5.2.2)混合；15P3000g以上離心lOmin,移取上層液；7.1.4用稀釋復(fù)溶液(531)等體積稀釋上層液；7.1.5取50匹用于分析。稀釋倍數(shù)，2倍。7.2牛乳樣品處理方法二7.2.1取牛乳樣品WC3000g以上離心lOmim吸除上層脂肪；7,2.2加入250匹亞硝基鐵気

6、化鈉溶液(5.2.1)和250皿硫酸鋅溶液(5.2.2)徹底混合，4 12C3000g 以上離心 10min；7.2.3轉(zhuǎn)移出2.2mL上層液(相當(dāng)于2ml乳樣)至一個(gè)新高心管中，加入4mL乙酸乙酯(523) 振蕩10min；室溫(2025P) 3000g 以上離心 10min；7.2.5轉(zhuǎn)移出2mL乙酸乙酯上層液體(相當(dāng)于ImL乳樣)，60X?氮?dú)饬飨峦耆稍铮?.2.6用0.5mL稀釋復(fù)溶液(5.3.1)溶解干燥的殘留物；7.2.7取50吐用于分析。稀釋倍數(shù)：0.5倍。7.3奶粉樣品的處理7.3.1稱(chēng)取2.000.05g奶粉至離心管中，加入10mL去離子水，振蕩溶解；7.3.2加ImL亞硝

7、基鐵氤化鈉溶液(5.2.1)和ImL硫酸鋅溶液(5.2.2)徹底混合，412C3000g 以上高心10min；7.3.3轉(zhuǎn)移出3.6mL上層液(相當(dāng)于0.6g奶粉)至一個(gè)新離心管中，加入6mL乙酸乙酯(5.2.3) 振蕩lOmin；室溫(2025X? ) 3000g 以上離心 lOmin；7. 3.5轉(zhuǎn)移出4mL乙酸乙酯上層液體(相當(dāng)于0.4g奶粉)，60C氮?dú)饬飨峦耆稍铮?.3.6用04mL稀釋后的復(fù)溶液溶辭干燥的殘留物；7.3.7取50匹用于分析。稀釋倍數(shù)：1倍。DB1301/T122DB1301/T1222008117.4注童事項(xiàng)不同品牌的試劑盒其制樣步驟可能略有差別，具體制樣步驟可根

8、據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)略作調(diào)整。8檢測(cè)步驟8.1測(cè)定8.1.1使用前，將所有試劑回復(fù)至室溫（2（TC25X?） 8.1.2取出實(shí)驗(yàn)需要數(shù)量的微孔板條，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均需做平行實(shí)驗(yàn)，并記錄。8.1.3標(biāo)準(zhǔn)孔加入50皿氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.2.2）,樣品孔加入50匹處理好的樣品。8.1.4加入50匹酶標(biāo)抗體（5.3.2）至每個(gè)微孔中，振蕩混勻。8.1.5用封口膜封好，室溫（20C25P）暗處孵育lh,避光放置。8.1.6洗板，用洗板機(jī)洗板或手工洗板。甩出孔中液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi) 沒(méi)有殘余液體；加稀釋洗滌液250ul （5.3.3）于微孔中，再次甩出微孔內(nèi)液體，并在吸水紙上拍打, 重復(fù)操

9、作四次。8.1.7每個(gè)微孔中加入酶標(biāo)二抗（4.2.6） 100pL,振蠢混勻；8.1.8用封口膜封好，室溫（20P25C）暗處孵育30min,避光放置。8.1.9洗板，操作同8.1.6。8.1.10每個(gè)微孔中加入100皿底物/發(fā)色劑（4.2.7）,振蕩混勻，室溫（20C25C）暗處孵育 30min8.1.11每個(gè)微孔中加入50皿反應(yīng)終止液（4.2.8）,振蕩混勻。8.1.12酶標(biāo)儀450nm處測(cè)定吸光度值，lOmin內(nèi)完成讀數(shù)。8.2注意事項(xiàng)不同品牌的試劑盒其檢測(cè)步驟可能略有差別，具體檢測(cè)步驟可根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)略作調(diào)整。9結(jié)果計(jì)算以空白（濃度為0的標(biāo)準(zhǔn)溶液）吸光度值為100%計(jì)算，并且以百分比的形式折算出各