參芪利水湯治療大鼠卵巢過度刺激綜合征模型的實驗研究

1、參芪利水湯治療大鼠卵巢過度刺激綜合征模型的實驗研究【摘要】目的觀察自擬方劑參芪利水湯治療大鼠卵巢過度刺激綜合征(HSS)模型的療效，為臨床上進一步治療HSS提供實驗學基矗方法選擇未成年雌性istar大鼠20只，皮下注射孕馬血清促性腺激素(PSG)和人絨毛膜促性腺激素(HG)制成HSS模型，隨機分為實驗組、對照組兩組，實驗組采用參芪利水湯灌胃，對照組為空白對照。1周后用ELISA法檢測兩組血中雌二醇E2和孕酮(P)的含量，測定腹腔EB含量。結果實驗組腹腔含量、血清中E2含量與對照組比擬在統(tǒng)計學上均有顯著性差異P0.05。結論自擬中藥參芪利水湯治療大鼠HSS可明顯降低腹腔血管通透性和血清中E2含量

2、。【關鍵詞】卵巢過度刺激綜合征；中藥；雌二醇；孕酮Abstrat：bjetiveTinvestigatetheeffetfthetraditinalhineseediineShenqilishuiDetinintreatingvarianhyperstiulatinsyndreinrats.ethds20ratseredividedinttgrupsrandly,andtheHSSdelasinduedbysubutaneusinjetinfPSGandHG,differeneethdsasadptedttreatthe.UsingELISAethdtdetetthelevelfE2inbld

3、.ResultsThetraditinalhineseediineShenqilishuiDetinhasprtetiveeffetnHSS.nlusinThisethdshsgdeffetintreatingHSS.Keyrds：HSS;hineseediine;E2;P近年來，隨著生殖內分泌學的迅速開展,促排卵藥物克羅米酚()、人絕經(jīng)期促性腺激素(HG)、絨毛膜促性腺激素(HG)、促黃體生成激素釋放激素(LHRH)等廣泛用于治療不孕癥，卵巢過度刺激綜合征(HSS)已成為婦科臨床醫(yī)生關注并感到非常棘手的問題。西醫(yī)一般處理包括臥床休息，有腹水或胸水者采取半臥位，進軟食或半流質飲食，少食多餐，低

4、鹽飲食，糾正血容量異常，靜脈輸入低分子右旋糖酐，但效果欠佳。臨床上我們利用此中藥方劑獲得了初步成效，為進一步觀察其詳細作用機理，設計本實驗。本研究通過建立大鼠HSS模型，自擬中藥方劑治療并觀察其療效，為臨床進一步治療奠定實驗學基矗1材料與儀器1.1實驗動物與分組選用體質量4550g、鼠齡22日的未成年istar雌鼠清潔級20只，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，制成HSS模型后隨機分為實驗組和對照組兩組，每組各10只。1.2試劑與儀器一抗VEGF和IL-6兔抗IgG多克隆抗體。購于santaruze公司，SP9001試劑盒及DAB顯色劑購于北京中山生物技術。LEiAR2125石蠟切片機萊卡上海分

5、公司，Nikn尼康光鏡顯微照相機日本株式會社尼康，ti6.0數(shù)碼醫(yī)學圖象分析系統(tǒng)廈門麥克奧迪儀器儀表。2方法2.1HSS大鼠模型的建立按改進的Ujika方法1在未成年鼠體內建立HSS模型。每只大鼠從第22日齡起連續(xù)4d皮下注射含有10IU妊娠雌馬血清促性腺激素(pregnanyareserugnadtrpin,PSG,天津實驗動物中心)的生理鹽水0.2l,第5天(最后1次注射PSG后24h)注射含有100IUHG(麗珠制藥廠)的生理鹽水0.2l。48h后卵巢顯著增大,外表紫褐色,有多個卵泡形成，出現(xiàn)腹水說明建立了大鼠HSS模型。2.2中藥方劑及治療黃芪30g，黨參30g，白術24g，茯苓24,

6、當歸15g，川芎15,丹參18,海藻24g，昆布30g,牡蠣20,內金24g，阿膠9,桑寄生30g,菟絲子30。經(jīng)我院煎藥室加工制成藥液，每袋150l。在注射HG前1h始實驗組每天采用中藥灌胃2l，對照組為空白對照。共1周。2.3標本采集和貯存HG注射7d后即33日齡時，肌肉注射氯氨酮0.1g/kg麻醉大鼠，尾靜脈注射1%的EvansBlue(EB,Siga)0.1l。30in后從大鼠眼眶采血1l入抗凝管，待血液凝固后，在離心機中以5000r/in離心10in，汲取上清液置箱貯存?zhèn)錂z。脫頸處死大鼠。正中切開腹腔，觀察有無腹水,然后按照Ujika2和Khanna3的改進方法用5l生理鹽水沖洗腹腔

7、。將沖洗液搜集到試管中,稀釋至10l,加0.1l/L氫氧化鈉0.05l過濾,并以3000r/in的速度在室溫下離心10in。然后用分光光度計(國產(chǎn)721型)在波長590n測定D值。2.4觀察指標2.4.1腹腔毛細血管通透性根據(jù)標準濃度及其D值繪制標準曲線,計算各組腹腔沖洗液EB的含量。2.4.2血中E2和P的含量的測定利用放射免疫方法，采用天津九鼎醫(yī)學生物試劑盒，方法及操作程序均按有關說明進展。2.5卵巢過度刺激綜合征診斷標準根據(jù)Glan4標準,卵巢體積增大、腹腔毛細血管的通透性增加和腹水均出現(xiàn)方可診斷為卵巢過度刺激綜合征。2.6統(tǒng)計學處理統(tǒng)計方法所有計量資料采用s表示,均數(shù)差異的顯著性采用S

8、PSS統(tǒng)計軟件進展方差分析,P0.05表示在統(tǒng)計學上有顯著性差異。3結果3.1HSS大鼠各組治療后腹水EB含量實驗組大鼠腹腔EB含量顯著低于對照組，在統(tǒng)計學上有顯著性差異P0.05。結果見表1。表1HSS大鼠治療后各組腹水EB含量略3.2治療后大鼠外周血中E2、P的改變實驗組大鼠外周血中E2含量顯著低于對照組，在統(tǒng)計學上有顯著性差異P0.05。大鼠實驗組和對照組外周血中P含量在統(tǒng)計學上無顯著性差異P0.05。結果見表2。表2HSS大鼠治療后各組外周血E2、P的含量略轉貼于論文聯(lián)盟.ll.4討論由于近三十年來生殖內分泌研究進展甚速，助孕技術在臨床上被廣泛應用，藥物誘發(fā)排卵、超排卵引起HSS發(fā)生率

9、亦明顯上升，如何有效地控制疾病的開展、同時進步患者受孕率成為我們面臨的新課題。HSS是臨床上誘發(fā)超排卵過程中較常見的醫(yī)源性并發(fā)癥，在承受促排卵藥物的患者中約20%發(fā)生此病，其原因與多個卵泡發(fā)育、血清雌二醇過高有關，也與HG應用有關5。主要是由于卵巢對促性腺激素Gn的刺激過度反響，產(chǎn)生多發(fā)性卵泡及黃體囊腫伴間質水腫致使卵巢增大，因卵泡分泌過量雌激素，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)被激活，造成毛細血管上皮細胞損害，通透性增加，血管內液外滲引起腹水和胸水。血管內液喪失導致低血容量，血液濃縮，粘稠度增高，極易形成血栓，又可引起腎灌注量缺乏，出現(xiàn)少尿或電解質紊亂及酸中毒，嚴重時甚至可導致呼吸循環(huán)衰竭而死亡

10、。其發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是毛細血管通透性增加，與卵巢過度分泌和產(chǎn)生血管活性物質有關，如前列腺素、VEGF和IL-6等。研究證實顯示圍繞注射HG前后給予0.3g吲哚美辛可以在一定程度上降低HSS鼠卵巢的重量、使腹腔灌洗液中亞甲藍的程度下降、卵巢和腹膜的血管通透性減低，提示對治療HSS有一定療效6。吲哚美辛做為前列腺素合成抑制劑可防止水分滲出，減少胸腹水及低血容量的發(fā)生，故能改善病癥，但妊娠后必須終止，以防損害胎兒7。因此，如何尋找平安有效的治療方法是我們迫在眉睫需要解決的問題。祖國醫(yī)學雖無HSS一病名，但按審證求因，宏觀、微觀辨證相結合的原那么認為卵巢對Gn的過激反響,致使機體腎陰耗損、虛火上炎，同時

11、造成氣血瘀滯，沖任失和所致8。本研究通過在未成年istar大鼠體內建立HSS模型,利用自擬中藥方劑進展治療。方中黨參、黃芪、白術、茯苓健脾利水；當歸、丹參、海藻、昆布、牡蠣、內金軟堅消結；川芎、阿膠、桑寄生、菟絲子補腎活血。研究結果顯示，自擬參芪利水湯可以明顯降低腹腔血管通透性，從而減少腹水的形成；降低血中E2含量，較對照組在統(tǒng)計學上有顯著性差異，但外周血中P含量在統(tǒng)計學上無顯著性差異。本方劑治療大鼠HSS獲得了一定的療效。但其詳細作用機理目前尚未明了，有待于進一步研究，以期為臨床上進一步治療HSS開拓新的途徑?！緟⒖嘉墨I】1付永倫，林其德，鐘漢威.卵巢過度刺激綜合征大鼠模型建立J.上海實驗動

12、物科學，2002，221：16.2UjikaT,atsuuraK,KaannT,etal.RlefprgesterneinapillarypereabilityinhyperstiulatedratsJ.HuReprd,1997,12:1629.3Khanna,haturvediU,Shara,etal.Induedapillarypereabilityediatedbyadenguevirus-induedlyphkineJ.Iunlgy,1990,69:449.4GlanA,RnelR,SfferY,etal.varianhyperstiulatinsyndre:anupdaterevieJ.bstetGynelSurvey,1989,44:430.5樂杰.婦產(chǎn)科學，第6版.北京，人民衛(wèi)生出版社，2022：385.6FerraraN,HenzelJ.Pituitaryflliularellssereteanvelheparinbin