皺皮木瓜總黃酮對胃腸平滑肌的松弛作用及其機制分析

1、皺皮木瓜總黃酮對胃腸平滑肌的松弛作用及其機制分析【摘要】目的討論皺皮木瓜總黃酮(FL)對胃腸平滑肌的松弛作用及其相關機制。方法采用家兔離體空腸、回腸和胃底平滑肌生物測定法,觀察FL對空腸自主性收縮和Ah誘導收縮的影響,以及回腸和胃底對不同沖動劑Ah和al2的反響。結果FL對空腸自主性收縮和Ah誘導收縮反響均呈抑制作用;劑量依賴性抑制a2+誘導回腸收縮P0.01及Ah所致胃底肌條的收縮，非競爭性拮抗Ah和al2累積量效曲線,壓低最大反響。結論FL松弛胃腸平滑肌與阻斷VD減少外鈣內流和內鈣釋放作用有關,但與膽堿受體阻斷無關。【關鍵詞】皺皮木瓜總黃酮胃腸平滑肌機制分析Abstrat:bjetiveT

2、eluidatetherelaxanteffetsandrelatedehanissfttalflavnefrhaeneleslagenariaKidz(FL)nrelaxantgastrintestinalsthusles.ethdsTherelaxanteffetsandrelatedehanisfFLerestudiednthentratinfislatedrabbitjejunu,ileuandgastrifundusagnizedbyAhandal2.ResultsFLinhibitedthentratinfislatedjejunalautniandjejunuagnizedbyA

3、h.Intheislatedrabbitgastrifundusrileu,FLerefundtinhibitthentratininduedbyAhandal2indse-dependentanner,andnn-petitivelyantagnizetheAhral2uulativedse-respnseurvesithaleraxialrespnse,hileAtr(atrpine)petitivelyinhibitedthegastrifundusntratininduedbyAh.nlusinTheehanissfrelaxantgastrintestinalsthuslefFLis

4、relatedtitsblkingeffetnthevltagedependenta2+hannelVD,butisntrelatedtusarinireeptrblking.Keyrds:FL;Gastrintestinalsthusle;ehanisanalysis皺皮木瓜為薔薇科植物貼梗海棠haeneleslagenaria(Lisel)Kidz的果實，主產于我國安徽，湖北和四川等地,其中的主要成分包括有機酸、黃酮類和皂苷等。針對皺皮木瓜的臨床應用根底，我室曾對其乙醇提取物進展過整體動物研究。實驗說明：皺皮木瓜乙醇粗提物具有松弛胃腸平滑肌和鎮(zhèn)痛作用1，2，為了討論其中的有效部位和深化的藥

5、效機制，本實驗利用皺皮木瓜總黃酮對胃腸平滑肌的松弛機制進展了分析和討論。1材料和方法1.1材料安康家兔，雌雄兼用，體重2.03.0kg,由三峽大學實驗動物中心提供。皺皮木瓜取自湖北長陽資丘，由三峽大學天然藥物重點實驗室汪鋆植教授鑒定。皺皮木瓜總黃酮FL由三峽大學化生學院提供，制備過程參照文獻3以ADS-17大孔樹脂純化即得FL，臨用時用雙蒸水配制相應濃度備用。氯化乙酰膽堿Aetylhlinehlride，Ah,上海試劑三廠產品。維拉帕米Verapail,Ver購自天津藥業(yè)集團公司。硫酸阿托品注射液Atrpine,Atr購自武漢遠大藥業(yè)集團公司。ADS-17大孔樹脂，南開大學化工廠。其他試劑均為

6、市售分析純。實驗用StandardTyrde液(l/L)：Nal136.9,Kl2.68,al21.80,gl21.05,NaH2P40.42，Gluse5.55。無鈣Tyrde液中不加鈣而另加0.1l/LEDTA，使之成為含EDTA的無鈣液。無鈣高鉀Tyrde液除無鈣外，Kl改為40l/L，替代等l/L的Nal。PerLab離體器官灌流儀澳大利亞。1.2方法取禁食24h家兔,擊頭致昏后,迅速剪取與十二指腸相連的空腸約2.0和距回盲部約3的回腸1.52.0,用Tyrde液反復沖洗腸腔內容物備用;同時取胃底全層肌標本約22,Tyrde液沖洗干凈后,按Vane氏法制備胃底肌條。受試標本分別置于含1

7、0l的Tyrde液(370.5)的浴槽中,pH7.27.4,標本一端連于張力換能器,另一端固定,標本張力負荷1g,實驗過程中持續(xù)通入95%2+5%2混合氣體,標本張力變化通過張力換能器記錄于PerLab離體器官灌流儀。實驗所用藥物濃度均按浴液終濃度計算。統(tǒng)計學處理：數據以s表示,應用SPSS10.0軟件,組間比擬用t檢驗；作圖采用SigaPlt2001軟件。2結果2.1FL對家兔空腸自主性收縮和Ah誘導收縮的影響空腸在Tyrde液平衡30in后，產生規(guī)律而衡定的自主性收縮，參加0.01l/LAh后收縮頻率與正常無異，但張力增加約30%，然后分別參加0.2%,0.4%和0.8%FL，記錄在不同實

8、驗條件下空腸收縮頻率和張力的變化，觀察10in。結果見表1。2.2FL對al2誘導回腸平滑肌收縮的影響實驗方法和條件同2.1項，標本溫育后換無鈣Tyde液，可見回腸自主性收縮逐漸減弱，當收縮頻率和張力明顯受抑制后，參加al22.0l/L,可見回腸收縮作用迅速恢復，記錄收縮幅度和張力的變化，用無鈣Tyde液沖洗標本3次，分別參加0.2%，0.4%和0.8%的FL，5in后同法參加al22.0l/L，比擬給藥前后標本對al2收縮作用的影響。結果見表2。表1FL對家兔空腸自主性收縮和Ah誘導收縮的影響略aP0.05vs給藥前;bP0.01vs給藥前，n=6由表1可見，FL無論是對空腸自主性收縮，還是

9、Ah誘導收縮均劑量依賴性抑制其功能，對收縮頻率與收縮張力相比，張力抑制更明顯。表2FL對al2誘導家兔回腸平滑肌收縮的影響略aP0.05，vsntrlgrup;bP0.01；n=6由表2可見，當參加不同濃度的FL，再次復鈣時，回腸的收縮張力明顯減弱,且具有劑量依賴性P0.01,0.8%FL較對照組下降了75%。2.3FL和Atr對Ah致家兔胃底肌條收縮的影響標本在Tyrde中平衡1h后，參加不同濃度的Ah可見胃底肌條產生迅速而短暫的收縮，得Ah累積濃度的量效曲線，用Tyrde液沖洗標本，待肌張力恢復至基線，分別參加0.2%，0.4%，0.8%的FL和0.001l/LAtr,10in后重測Ah量

10、效曲線，結果0.4%，0.8%FL使Ah量效曲線非平行右移，濃度依賴性壓低Ah量效曲線，而Atr使Ah量效曲線呈典型的競爭性拮抗,最大反響不壓低。見圖1。圖1FL和Atr對Ah致家兔胃底平滑肌收縮的影響略2.4FL和Ver對al2致家兔回腸收縮的影響回腸標本在無鈣Tyrde液中平衡30in，換無鈣高鉀液穩(wěn)定30in，建立al2累積濃度依次為0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10l/L量效曲線,其他操作方法同“2.3項。結果FL和Ver均能濃度依賴性使al2量效曲線非平行右移，壓低最大反響，Ver的pD2值為7.210.31。3討論皺皮木瓜為傳統(tǒng)中藥，應用歷史悠久，具有多方面的藥理作用，但

11、其中的化學成分復雜，藥理作用機制不清。根據以往的研究根底,我們將其中的黃酮作為重點研究對象。植物中的黃酮類化合物具有廣泛的藥理作用，而植物來源不同又有差異，如銀杏黃酮、葛根黃酮、水杉黃酮抗心律失常，預防和逆轉心肌肥厚；黃芪和黃芩總黃酮具有保肝及免疫調節(jié)作用；甘草黃酮等具有抑制胃腸平滑肌功能等49。皺皮木瓜的胃腸解痙作用早已被中醫(yī)臨床所證實，然而其藥理作用機制和有效成分并不清楚。胃腸平滑肌的運動受多種因素的調控，包括神經因素，體液因素和部分激素等,其中神經因素和體液因素是主要因素,然而無論是神經因素,還是體液因素引起胃腸平滑肌收縮,最終均需要依賴胞內a2+介導，細胞內的a2+濃度的調節(jié)由細胞膜鈣

12、通道、細胞器鈣攝取和釋放、鈣泵及Na+-a2交換系統(tǒng)參與。靜息狀態(tài)下,a2+不能自由通過功能正常的細胞膜。當細胞膜興奮時,膜特異的鈣通道開放,細胞內a2+濃度升高,同時觸發(fā)細胞內細胞器鈣庫釋放a2+,胞漿內a2+升高到達一定程度(150l/L)時,a2+與肌鈣蛋白或肌調蛋白結合,從而產生細胞收縮活動等。對于主要是依外鈣而實現收縮(相對于骨骼肌)的胃腸平滑肌,一旦影響了外鈣濃度或內流,即會明顯影響其收縮活動。實驗中發(fā)現：FL對復鈣后的回腸標本呈濃度依賴性抑制；在無鈣高鉀Tyrde液中標本引起的收縮為高鉀去極化，K+促使電壓依賴性鈣通道VD開放，胞內細胞器鈣庫釋放a2+所致，經典的鈣拮抗劑Ver可

13、阻斷這一通道，從而抑制心血管和胃腸功能等，FL對a2+和高鉀致腸平滑肌收縮均呈抑制作用，由此說明FL具有與Ver相似的作用,特異性阻斷VD，減少外鈣內流和內鈣釋放而松弛平滑跡在與阿托品的對照性實驗中，可見FL并非通過阻斷膽堿受體而松弛胃腸平滑跡本實驗研究為皺皮木瓜用于胃腸解痙提供了理論基?！緟⒖嘉墨I】1楊興海，柳蔚，錢京萍資木瓜乙醇提取物對胃腸道平滑肌的實驗研究J.四川中醫(yī)，2022，223：19.2柳蔚，楊興海，錢京萍資木瓜乙醇提取物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究J.四川中醫(yī)，2022，228：7.3廖亮.銀杏黃酮提取方法的研究J.食品科學，1994,8：33.4耿秀芳,李桂芝,康白,等銀杏葉總黃酮對縮血管物質活性的影響J.濰坊醫(yī)學院學報，2000，22(3)：192.5劉賽,蘇冬梅,王春波,等葛根總黃酮對離體家兔主動脈平滑肌的作用J.青島醫(yī)學院學報，1998，34(3):191.6劉維莞,楊曉茹,屠治本,等水杉總黃酮抗實驗性心肌肥厚及