海洋生物制藥

1、2021/9/131主講人： 許東暉 梅雪婷中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院中藥與海洋藥物研究室海洋生物制藥2021/9/132當(dāng)代新藥研究的新思路目前，美國、德國、日本等國家利用人類基因組計(jì)劃的最新研究成果，將人類重大疾病相關(guān)基因克隆于體外細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，直接用以快速篩選評價(jià)受試物的藥理作用。由于直接采用人類疾病相關(guān)基因進(jìn)行藥物篩選，可明確活性物質(zhì)的作用位點(diǎn)和機(jī)理，同時(shí)可保持藥物篩選結(jié)果與臨床實(shí)驗(yàn)的相對一致性，大大降低臨床實(shí)驗(yàn)的風(fēng)險(xiǎn)性。因此，由于絕大部分陸生的動(dòng)植物活性成分已獲得篩選，科學(xué)家轉(zhuǎn)向從海洋生物或原始森林中尋找藥用活性成分。美國、歐盟等國家已對紅海、地中海等海域的海洋生物進(jìn)行藥物篩選，現(xiàn)對開始轉(zhuǎn)

2、向南海海域的海洋生物資源活性物質(zhì)的篩選。由于我國對海洋生物資源的保護(hù)政策，外國同行主要從越南、菲律賓等國獲得南海海洋生物樣品，進(jìn)行快速高效的藥物篩選，對具有開發(fā)價(jià)值的活性物質(zhì)及結(jié)構(gòu)進(jìn)行專利保護(hù)。2021/9/133鉀離子通道與心血管疾病生物膜電位是可興奮細(xì)胞膜內(nèi)外側(cè)電位的電位差。電位差是由于細(xì)胞膜對某些離子的選擇性通透而產(chǎn)生的。其靜息膜電位一般為-60-90mV，膜內(nèi)帶負(fù)電荷呈負(fù)極性。1902年伯恩斯坦（Bernstein）提出神經(jīng)細(xì)胞膜對K+離子有選擇性通透的“膜學(xué)說”。1952年霍奇金運(yùn)用電壓鉗法研究槍烏賊巨大神經(jīng)纖維上對神經(jīng)膜在靜息和動(dòng)作電位的離子機(jī)制，表明神經(jīng)膜在靜息時(shí)僅允許K+從膜內(nèi)

3、流出，活動(dòng)時(shí)僅允許Na+流進(jìn)膜內(nèi)，提出并驗(yàn)證了“鈉離子通道學(xué)說”。1955年卡斯特羅對神經(jīng)肌肉接頭突觸傳遞過程的研究發(fā)現(xiàn)：突觸后膜終板電位發(fā)生，是由于神經(jīng)遞質(zhì)乙酸膽堿（ACh）作用于終板膜上受體的結(jié)果，從而確認(rèn)了受體化學(xué)遞質(zhì)調(diào)控的通道。1973年和1974年阿姆斯特郎和凱恩斯分別在神經(jīng)軸突上測量到與離子通道開放相關(guān)的膜內(nèi)電荷運(yùn)動(dòng)，稱為門控電流，確認(rèn)了離子通道的開放與膜中離子運(yùn)動(dòng)的關(guān)聯(lián)性。 2021/9/134電壓鉗（Voltage clamp）技術(shù)：將玻璃微電極插入細(xì)胞內(nèi)，施加一跨膜電壓并把膜電位固定于某一數(shù)值，即可測定該膜電位條件下離子電流隨時(shí)間變化的動(dòng)態(tài)過程。利用藥物或改變細(xì)胞內(nèi)外的溶液成

4、分，使其它離子通道失效，則可測定被研究的某種離子通道的功能性參數(shù)，并能測量和分析通道的門控電流的特性。膜片鉗（Patch clamp）技術(shù)：又稱單通道記錄技術(shù)。用特制玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10100G的密封（Gigaseal），被孤立的小膜片面積為m2量級，內(nèi)中僅少數(shù)離子通道。然后對該膜片實(shí)行電壓鉗位，可測量單個(gè)通道開放產(chǎn)生的pA（10-12A）量級電流。通過觀測單個(gè)通道開放和關(guān)閉的電流變化，可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放機(jī)率、開放壽命分布等功能參量，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可將吸管吸附的膜片從細(xì)胞膜上分離出來，以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式

5、進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。 2021/9/135膜電位變化的異常導(dǎo)致心律改變，發(fā)生心動(dòng)過速、心律過緩或不齊，統(tǒng)稱為心律失常（Arrythmia）。心律失?？煞譃榭焖傩秃途徛蛢深?。心律失常均指快速型心律失常，包括心房撲動(dòng)、心房纖維性顫動(dòng)、陣發(fā)性室上性的心動(dòng)過速、室上心動(dòng)過速和過早搏動(dòng)等。 室性心律失常的主要危險(xiǎn)是室顫，下列因素參與它的形成：(1)心律失常；(2)心肌缺血；(3)心功能不全；(4)神經(jīng)因子及電介質(zhì)不平衡。當(dāng)心肌缺血時(shí)，它在心肌微循環(huán)內(nèi)形成梗塞，加重缺血損害及誘發(fā)心律失常。室顫在本質(zhì)上是由于心肌離子通道的病變，使各個(gè)心肌纖維的電活動(dòng)由同步現(xiàn)象轉(zhuǎn)化為去同步現(xiàn)象，這一過程可能與胞內(nèi)信息傳遞系統(tǒng)的改

6、變相關(guān)。 2021/9/136抗心律失常藥根據(jù)對心肌電生理的影響和作用機(jī)制，可分類4類：I類藥物能阻斷心肌細(xì)胞膜快的通道，抑制4相Na2+內(nèi)流，降低自律性，不同程度地減慢0相除極和減慢傳導(dǎo)。 II 類藥物能阻斷心臟的受體，對抗兒茶酚胺類對心臟的作用，降低竇房結(jié)、房室結(jié)和傳導(dǎo)組織的自律性，減慢傳導(dǎo)，延長APD和ERP。III 類藥物主要阻滯心肌鉀通道，延長心房肌、心室肌及傳導(dǎo)組織的APD和ERP，對自律性無明顯影響。IV 類藥物主要阻滯心肌慢鈣通道，抑制胞外Ca2+內(nèi)流，能減慢房室結(jié)的傳導(dǎo)，消除房室結(jié)的折返。2021/9/137延長 (APD及ERP)的藥物，可控制心律失常，這些藥物均可阻斷鉀通

7、道。鉀通道的種類很多，大致可分為二大類：(1) 電壓依賴性鉀通道瞬時(shí)外向鉀電流（Ito）：在去極化電流如INa使膜電壓改變后，即刻引起Ito出現(xiàn)AP的I相。Ito有2個(gè)組分。Ito1，持續(xù)時(shí)間較短，對4-AP（4-aminopyrine，4-氨基吡啶）敏感。Ito2持續(xù)時(shí)間較長，為鈣所激活。Ito的增強(qiáng)，復(fù)極過程加速。相反Ito被抑制，則復(fù)極過程延遲。Ito1的相關(guān)基因已被克隆出Kv1.2，Kv1.4，Kv2.1，Kv4.2。在病變心臟中，這一鉀電流家族的mRNA表達(dá)有所改變。2021/9/138快速延遲性整流外向鉀電流（IKr）：為快速激活及失活組分，此部分電流對復(fù)極的效應(yīng)，隨心率快慢而異。

8、在心率快時(shí)IKr較弱，而心率慢時(shí)IKr較強(qiáng)，對復(fù)極過程的影響更長。在先天性LQTS的患者中，有些由于染色體中的HERG基因的變異而失活。該通道的l4個(gè)亞單位，因遺傳變異而使通道蛋白失活，使IKr 減少25100。IKr下降，使復(fù)極過程延遲，QT間期異常延長，易于誘發(fā)嚴(yán)重心律失常，乃至心臟猝死。緩慢延遲整流外向鉀電流（IKs）：為，其激活與失活均緩慢。當(dāng)心肌被去極化后，開始緩慢地激活，隨后逐漸增強(qiáng)，到3相的中點(diǎn)達(dá)最大值，而后又漸次減少而失活。當(dāng)心率快時(shí)，此部分電流占IK的絕大部分。受體激活時(shí)IKS亦被增強(qiáng)，由于緩慢失活而向4相延伸。IKS是復(fù)極過程使膜電流回到復(fù)極狀態(tài)的主要電流。 2021/9/

9、139延遲性整流外向鉀電流（Ik）：發(fā)生在Ito稍后，在整個(gè)復(fù)極過程中。電流的方向?yàn)閮?nèi)向或外向，而整流后總的效應(yīng)是外向的。Ik流向胞外，使K+外流，心肌細(xì)胞快速回復(fù)到靜息時(shí)的膜電位。按照由去極化膜電壓的激活速率及失活速率，分為3種：IKr，IKs，IKur。超速延遲性整流鉀電流（IKur）：為超速激活組分。心肌在去極化后迅速激活外向鉀離子流，時(shí)間跨越1，2，3相。它的減弱亦必將使復(fù)極延遲。具有不同于經(jīng)典延遲整流K+電流的快慢成分（IKr和IKs）的特性。IKur主要通過Kv1.5通道，而Kv1.5通道cDNA在人心房的表達(dá)比任何其他人體組織都高得多，人心室沒有IKur存在2021/9/1310

10、CAST的啟示與I類抗心律失常藥 1988年進(jìn)行了規(guī)模較大的抗心律失常藥的臨床試驗(yàn)，稱為CAST（Cardiac Arrhythmia Suppression Trial）。對梗塞后患者，用英卡胺與安慰劑，及氟卡胺與安慰劑相比較。兩組中各給藥組患者心律失常的發(fā)生率幾乎降到零，而死亡率卻為安慰劑組的2倍。受試藥均屬IC類，為鈉通道阻斷劑，雖有很強(qiáng)的抗心律失常作用，但缺乏抗室顫作用。阻斷劑對于心肌梗塞后頻發(fā)復(fù)雜室性早博的治療效果可能差于I類抗心律失常藥物，但阻斷劑與安慰劑相比，可明顯降低病人的再梗塞、猝死和總死亡率。III類藥物索他洛爾（Sotalol）對梗塞后病人的室性心律失常療效優(yōu)于常用的I類

11、抗心律失常藥物，并可降低猝死與總死亡率。以上事實(shí)表明抗心律失常藥物根據(jù)其作用可分為兩類：即一類為“抗室性早博藥物”，可減少早博，卻增加猝死與死亡的危險(xiǎn)；而另一類為“抗室顫藥物”不但可減少室性早博，也可降低猝死與總死亡率。 2021/9/1311I類抗心律失常藥物屬“抗早博”藥物，II類（阻斷劑）和III類（胺碘酮與索他洛爾）為“抗室顫藥物”。胺碘酮（Amiodarone）除有III類作用以外，也有阻斷作用，而索他洛爾就是經(jīng)典的阻斷劑。 I類和III類抗心律失常藥物雖利于房顫轉(zhuǎn)復(fù)后竇性心律的維持，但伴有致命性促心律失常的危險(xiǎn)。IB或III類藥物的作用機(jī)制為早期后除極化，而IA或IC類則為阻斷鈉通

12、道、延遲傳導(dǎo)，有利于折返的形成。因此，醫(yī)藥學(xué)界致力于尋找新的阻斷特殊離子更特異地作用于心房而對心室影響較小的抗心律失常藥物，以期發(fā)揮抗房顫作用，并且又無I、III類藥物的促心律失常作用。鉀離子（K+）電流影響動(dòng)作電位的復(fù)極過程，大多數(shù)延長動(dòng)作電位和不應(yīng)期的藥物是通過阻斷K+電流起作用的。最近發(fā)現(xiàn)人心房內(nèi)存在的新的K+電流IKur；僅存在于人心房。特異性阻斷IKur的藥物可望明顯延長心房不應(yīng)期成為真正的特異性抗房性心律失常、不致室性心律大常的新型藥物。國外醫(yī)藥公司以IKur電流作為靶電流，以人的心肌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行藥物篩選。2021/9/1312課題立項(xiàng)的背景 鉀電流異常是心律失常發(fā)生的主要

13、原因之一。當(dāng)今抗心律失常藥物的研究均以鉀電流作為靶電流。目前III類抗心律失常藥物： 胺碘酮(Amiodarone)，對延遲整流K+電流的快慢成分( Ikr和 IKs)具有很好的阻滯作用，其療效較好但毒性較強(qiáng)，可導(dǎo)致肺纖維化、角膜碘沉著及肝腎損害。長期服用易引起甲狀腺功能障礙，引發(fā)產(chǎn)生新的心律失常。 多非利特(Ddfetilide)、伊布利特(Ibutilide), 是快速轉(zhuǎn)復(fù)房顫和房撲, 能選擇性阻滯Ikr。但都有共同的副作用，即致心律失常作用，它們有逆頻率依賴性效應(yīng)，心律高時(shí)藥效降低，心律低時(shí)易導(dǎo)致 尖端扭轉(zhuǎn)性室性心動(dòng)過速( Tdp) 。2021/9/1313 現(xiàn)醫(yī)藥公司致力于尋找特異性作

14、用于心房，而對心室影響較小的新型抗心律失常藥物，以期發(fā)揮抗房顫作用，并且無 、類藥物的促心律失常作用。 Kv1.5基因是編碼超速延遲性整流鉀電流Ikur離子通道，Ikur在人心房細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)，具有組織特異性，而在心室中不存在。Ikur鉀電流的過度表達(dá)會(huì)造成房顫、房撲等心律失常，可使腦中風(fēng)發(fā)生率增加5-7倍。Kv1.4、Kv4.2基因是編碼瞬間外向鉀電流Ito 離子通道。在心房中較豐富。 特異性阻斷Ikur 的藥物可望明顯延長心房不應(yīng)期，成為真正的特異性抗房性心律失常、不致室性心律失常的新型藥物。醫(yī)藥公司在開發(fā)新型抗心律失常藥物時(shí)，均以Ikur 作為靶電流并用人新鮮心房細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料。 2021

15、/9/1314 局限: 人心肌細(xì)胞膜同時(shí)存在著多種電流成分，在評價(jià)抗心律失常藥物對Ikur 或Ito 作用時(shí)往往需要改變細(xì)胞膜靜息電位水平，使用藥物阻斷其他電流成分，這種方法往往會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由于必須采用人新鮮的原代人心肌細(xì)胞，而繼代培養(yǎng)的人心肌細(xì)胞，其細(xì)胞膜電流成分的各種特性會(huì)發(fā)生改變。人新鮮心肌細(xì)胞較難獲得，而且往往是病人的病理細(xì)胞，細(xì)胞差異較大，不能隨時(shí)供應(yīng)，該實(shí)驗(yàn)開展局限于擁有臨床心臟手術(shù)醫(yī)院的科研單位進(jìn)行。2021/9/1315 新型抗心律失常海洋I類新藥A1998的研究技術(shù)路線：利用探針提取心肌細(xì)胞Kv1.5、 Kv1.4、Kv4.2基因mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA 連接至載體(pG

16、M-T等) 轉(zhuǎn)入大腸桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)、提取質(zhì)粒、轉(zhuǎn)錄成mRNA 轉(zhuǎn)入生物反應(yīng)系統(tǒng)(Oocyte)中 利用基因鉗技術(shù)對海洋活性物質(zhì)微量篩選、構(gòu)效關(guān)系研究、結(jié)構(gòu)修飾、專利保護(hù) 藥理學(xué)、毒理學(xué)、工業(yè)化生產(chǎn)等臨床前研究申報(bào)并進(jìn)入臨床研究2021/9/1316 2. 心律失常相關(guān)基因Kv1.5、 Kv4.2 、 Kv1.4 cRNA電泳圖譜2021/9/1317圖2 新化合物 A1998對Ikur鉀電流及 Ito鉀電流的作用Fig.2 The function of new compound A1998 on expression of Ikur and Ito K+ current2021/9/13182

17、021/9/13192021/9/1320表 A1998對烏頭堿所致大鼠心律失常的預(yù)防作用xs, n=10, *P0.05, *P0.01, *P0.001 vs control室性早搏(ventricular premature beat, VP), 室性心動(dòng)過速(ventricular tachycardia, VT) ，心室纖顫(ventricular fibrillation, VF)，心臟停搏(cardiac arrest, CA)誘導(dǎo)心律失常所需烏頭堿量(gkg-1） 劑 量 /mgkg-1CA VFVT VP176.038.0*141.228.2108.825.493.519.0

18、*Amio 3206.531.7*163.430.5*122.437.8*148.233.0A1998 4.5186.531.7*152.839.3*118.935.3*121.428.0A1998 1.5164.527.1132.724.4110.016.1*89.630.1A1998 0.5148.233.0121.428.089.630.166.515.2CMC 2021/9/1321ConConA1998Amio圖 A1998對BaCl2所致大鼠心律失常的治療作用Con：BaCl2 4mg/kg iv A1998：A1998 1.5mg/kg iv Amio：胺碘酮 3mg/kg iv

19、 2021/9/1322xs, n=10, *P0.001 vs controlGroup Dose /mgkg-1竇性心律維持時(shí)間/min 竇性心律恢復(fù)時(shí)間 /min 43.84.1* 16.34.1*胺碘酮 3 59.41.3* 0.61.3*A1998 4.5 57.32.5* 2.72.5*A1998 1.5 54.45.8* 5.6 5.8 *A1998 0.523.58.1 36.58.1CMC 表 A1998對BaCl2誘發(fā)大鼠心律失常的治療作用2021/9/1323 該模型只需在每次藥物篩選前一周，將置于冰箱保存的Kv1.5mRNA、Kv4.2mRNA稀釋至0.1gl分別注人蟾

20、蜍卵母細(xì)胞中，5天至15天內(nèi)可在蟾蜍卵母細(xì)胞膜表面相應(yīng)獲得單一、純凈的Ikur鉀電流或Ito鉀電流表達(dá)，提供篩選III類抗心律失常藥物之用。經(jīng)激素處理的蟾蜍一年四季可提供足量的蟾蜍卵母細(xì)胞，而且飼養(yǎng)方便，因此對III類抗心律失常藥物篩選是一種簡便的藥理模型。2021/9/1324 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，海洋新化合物 A1998 50，100，150nmolL-1給樣品濃度能夠分別有效抑制蟾蜍卵母細(xì)胞上Kv1.5鉀離子通道Ikur鉀電流和Kv4.2鉀離子通道Ito鉀電流的表達(dá)，隨著膜電位控制電壓的增加，A1998對Ikur鉀電流和Ito鉀電流的抑制作用增強(qiáng)。陽性對照藥(4-AP)是公認(rèn)的Ikur鉀電流

21、和Ito鉀電流阻斷劑、在該實(shí)驗(yàn)中l(wèi)mmolL給藥濃度能夠較好地阻斷Ikur鉀電流。新化合物A1998能夠很好地阻斷Ikur鉀電流和Ito鉀電流，提示其具有延長動(dòng)作電位的時(shí)程和有效不應(yīng)期，具有抗III類心律失常的藥理作用。2021/9/1325 新舊模型的比較： 舊模型 新模型實(shí)驗(yàn)材料 人心房細(xì)胞 蟾蜍卵母細(xì)胞專一性 低，多種電流 高，單一電流推廣性 難 易樣品量 少 少篩選速度 較快 快臨床相關(guān)性 緊密 緊密2021/9/1326A1998藥理作用：一、A1998顯示出對Ikur鉀離子通道阻滯作用，并在多種動(dòng)物（小 鼠、大鼠、豚鼠、家兔、犬）模型上進(jìn)行多種原因（哇巴因、 烏頭堿、氯化鋇、氯仿、

22、電刺激、冠狀動(dòng)脈結(jié)扎-再灌注）誘 發(fā)的心律失常實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：A1998具有很好的抗心律失常 效果，起效范圍大，無致心律失常作用。二、A1998同時(shí)表現(xiàn)出了抗心肌缺血作用，心肌損傷的機(jī)制目前 認(rèn) 為主要是自由基的產(chǎn)生、細(xì)胞膜質(zhì)過氧化及細(xì)胞內(nèi)鈣離子 超載 。而在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，A1998的抗氧化、清除自由基、保護(hù) 抗氧化酶的作用在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)，正常和缺血心肌中都有很 好的反應(yīng)。三、A1998具有鈣拮抗作用，特別是對因心肌缺血誘發(fā)心律失常 具有保護(hù)作用。2021/9/1327 本項(xiàng)目委托原北京同仁醫(yī)院院長、內(nèi)科專家趙相印教授組織一個(gè)心血管專家小組來評定 Al998的臨床價(jià)值作出評價(jià)。與會(huì)專家還有宣武

23、醫(yī)院副院長、心血管病專家王稼瑞教授，天壇醫(yī)院心血管科主任張劍峰教授和同仁醫(yī)院高干病房主任、心血管病專家常志文教授。 于2001年4月l1日在北京同仁醫(yī)院召開了專家會(huì)議，專家一致認(rèn)為當(dāng)前臨床用得最普遍的鉀通道阻斷劑 III類藥物是胺碘酮；該藥雖然有效，但副作用太大，醫(yī)生使用時(shí)十分慎重。副作用的發(fā)生率達(dá)2030%，而國內(nèi)又無研制的更好的藥物。中大的 III類抗心律失常藥 A1998有胺碘酮的相同(或相似)效果，而無毒副作用，其前景是很好的，它可以代替胺碘酮而占領(lǐng)市場。專家們致認(rèn)為該藥的臨床前景是很好的，應(yīng)當(dāng)投入研究。2021/9/1328第二節(jié) 新藥先導(dǎo)化學(xué)物的設(shè)計(jì)制備 一、反義(antisens

24、e)藥物 研究發(fā)現(xiàn)，許多疾病是由于基因發(fā)生變異造成的。利用人工合成天然存在的互補(bǔ)寡核苷酸小分子片段（反義DNA或反義RNA），與目的基因（單鏈、雙鏈DNA）或mRNA的特定序列相結(jié)合，從而有效地抑制或阻斷基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，抑制引起疾病的蛋白質(zhì)（細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分、受體、酶、活性生物大分子物質(zhì)等）的過度合成。這種從遺傳信息的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)譯等根本環(huán)節(jié)上干預(yù)病理過程，可以說是“治本”的藥物，將可能在惡性腫瘤、病毒性疾病如艾滋病及遺傳性疾病的治療中首先突破。2021/9/1329二、利用生理生化的研究成果，選擇治療環(huán)節(jié)和靶點(diǎn)如： （1）治療高血壓和充血性心力衰竭的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（an- giote

25、nsin convertion enzyme inhibitors，A-CEI）巰甲丙脯酸、苯酯丙脯酸、賴諾普利等； （2）5-羥色胺受體拮抗劑翁丹西隆(On-dansetron)、格蘭西隆(Granisetron)等抗放化療嘔吐藥物； （3）1或受體阻滯劑等抗高血壓藥； （4）組織胺H1受體阻斷劑雷尼替丁、法莫替丁等治療消化性潰瘍藥；（5）質(zhì)子泵抑制劑（氫鉀粒子腺三磷酶抑制劑）奧美拉唑(Omeprazole)、蘭索拉唑(Lansopra zole)等治療胃、十二指腸潰瘍的藥物，其療效比H2受體拮抗劑好； （6）羥甲戊二酰輔酶A還原酶抑制劑等降血脂藥； （7）5-睪酮還原酶抑制劑，可減少雙氫睪

26、酮合成，減輕對前列腺的增生刺激，治療良性前列腺增生癥。2021/9/1330丙酸睪丸酮致小鼠前列腺增生模型前列腺是雄激素依賴器官，前列腺的生長依賴于體內(nèi)雄激素的存在，動(dòng)物去睪丸后體內(nèi)雄激素水平降低，可使前列腺萎縮，給予動(dòng)物雄激素可引起外源性的前列腺增生，皮下注射丙酸睪丸酮可復(fù)制前列腺增生動(dòng)物模型。激素法引起外源性前列腺增生，迅速簡便，適于藥物篩選，但與人類疾病相關(guān)性較小。實(shí)驗(yàn)方法：模型制備：性成熟雄性小鼠（8周齡，約30g），每天s.c.注射丙酸睪丸酮5mg/kg，同時(shí)進(jìn)行藥物處理，連續(xù)3周后，剖取前列腺各葉，稱取濕重。另烘干后稱取干重。2021/9/1331表 前列腺各葉及相關(guān)器官濕重指數(shù)指

27、標(biāo)組別劑量mg/kg動(dòng)物數(shù)體重（g）凝固腺指數(shù)mg/10g腹葉指數(shù)mg/10g背葉指數(shù)mg/10g精囊指數(shù)mg/10g正常對照組1037.852.4911.624.70*4.051.66*2.331.28*60.7814.10*模型對照組1044.392.3315.643.575.751.783.441.0274.2712.22陽性對照組0.01251039.873.7111.462.83*2.331.04*2.480.72*58.1433.72低劑量組0.1251044.873.8014.951.933.081.11*2.400.57*68.2327.86中劑量組0.3751042.581.

28、5312.682.51*2.732.25*1.940.87*68.1112.00高劑量組1.1251043.203.0311.963.36*2.301.29*1.740.76*68.8022.70注：與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01，*P0.0012021/9/1332組別體重（g）凝固腺指數(shù)mg/10g腹葉指數(shù)mg/10g背葉指數(shù)mg/10g精囊指數(shù)mg/10g正常對照組37.852.493.841.51*1.270.48*0.790.42*20.134.61*模型對照組44.392.335.211.081.910.601.210.3124.914.38陽性對照組39.873.7

29、13.740.85*0.820.39*0.800.31*19.4111.29低劑量組44.873.804.870.851.080.40*0.850.29*22.508.63中劑量組42.581.534.300.940.900.60*0.710.36*22.643.87高劑量組43.203.034.031.17*0.730.49*0.680.41*22.927.38注：與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01，*P0.001表 前列腺各葉及相關(guān)器官干重指標(biāo)2021/9/1333表 血清中Zn濃度和ACP含量指標(biāo)組別劑量mg/kg動(dòng)物數(shù)血清ACP含量平均值（U/L）血清中Zn濃度平均值（mol

30、/L）正常對照組102.640.25*391.9331.14*模型對照組103.090.56439.8128.22陽性對照組0.0125102.590.27*413.4924.67*低劑量組0.125102.990.35426.8723.85中劑量組0.375102.820.35421.6428.18高劑量組1.125102.490.56*412.9520.29*注：與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01，*P0.0012021/9/1334分析上述前列腺及相關(guān)器官干、濕重指數(shù)指標(biāo)，可知由于外源激素（丙酸睪丸酮）的作用，模型對照組較正常對照組的前列腺各葉均有明顯增生；同樣，由于性激素的影

31、響，模型組精囊較正常組也有一定的增生，提示復(fù)制了前列腺增生癥動(dòng)物模型。連續(xù)給藥30天后，陽性對照藥保列治能明顯抑制該動(dòng)物模型的前列腺增生，樣品也有明顯的抑制前列腺增生的作用（t-test具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。前列腺含有豐富的酸性磷酸酶，其活性主要存在于腺狀上皮和腺腔內(nèi)的分泌物中。前列腺肥大和前列腺炎患者的血清酸性磷酸酶總活性及前列腺的酸性磷酸酶活性也升高。實(shí)驗(yàn)證明樣品能降低血清酸性磷酸酶活性（t-test具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），其作用機(jī)理有待進(jìn)一步的探討。前列腺增生的發(fā)生與雙氫睪酮積聚有關(guān)。在某些個(gè)體，隨年齡增長，前列腺內(nèi)形成雙氫睪酮的能力增強(qiáng)，發(fā)生雙氫睪酮異常增多，促發(fā)前列腺增生。前列腺增生患者血清雙

32、氫睪酮顯著增高，其濃度與血鋅水平呈正相關(guān)，兩者在前列腺增生發(fā)生中起一定作用。由于Zn2+是維持5-還原酶活性的重要成分，而此還原途徑是雙氫睪酮生成的主要途徑，所以降低血清Zn2+濃度可能減少雙氫睪酮的產(chǎn)生和積聚，并進(jìn)而抑制前列腺增生。2021/9/1335第三節(jié) 新藥新制型與新技術(shù) 一、口服緩釋和控釋制劑 主要為有膜控釋、骨架控釋、滲透泵及胃滯留片等。二、沖式控釋給藥系統(tǒng)根據(jù)時(shí)辰動(dòng)力學(xué)原理設(shè)計(jì)的新型定時(shí)定量給藥系統(tǒng)，投入研究的主要有平喘藥、心血管用藥及胰島素等。三、透皮給藥系統(tǒng)（TTS）由按需設(shè)計(jì)的多層高分子控釋膜組成，藥物經(jīng)皮膚吸收達(dá)到長效及減輕不良反應(yīng)的目的，可避免藥物受胃腸道生理因素的影

33、響和肝臟“首過效應(yīng)”，使用方便，可持續(xù)用藥，又可隨時(shí)終止給藥，對于一些大分子生化藥物和生物工程藥物，可借助微電流導(dǎo)入皮膚，達(dá)到全身給藥的目的。我國TTS制劑上市品種較少，主要是沒有定型的合適生產(chǎn)設(shè)備，用于TTS的原材料品種、性能、規(guī)格、質(zhì)量等方面難以保障，以及與能配合體內(nèi)血藥檢測的先進(jìn)設(shè)備不足有關(guān)。2021/9/1336四、靶向給藥系統(tǒng)指通過載體將藥物導(dǎo)向到病變靶部位，從而減輕藥物對非靶組織、器官和細(xì)胞的毒性，以獲得最佳療效，最少不良反應(yīng)及毒性的目的。 靶向給藥對于抗腫瘤藥物尤有意義。主要包括： 1、脂質(zhì)體、單克隆抗體 理論上講，利用其對腫瘤和病變器官親和性強(qiáng)，使局部藥物濃度增高或增強(qiáng)細(xì)胞毒素

34、和生物活性物質(zhì)的載體，起到“生物導(dǎo)彈”的作用，實(shí)踐中，多數(shù)用于臨床的產(chǎn)品，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中作用明顯，療效好，而用之于人體時(shí)，效果并不十分明顯，可能與人體內(nèi)相應(yīng)抗原濃度較低有關(guān)； 2、微球、毫微球、磁性微球 用抗癌藥微球進(jìn)行動(dòng)脈栓塞療法，以栓塞腫瘤部位血管，切斷腫瘤組織的營養(yǎng)源，使藥物在靶部位緩慢釋放，保持局部高藥物濃度，提高療效。我國已有不少單位用此法治療肝癌和腎癌，取得良好效果；3、脂肪乳劑、微乳和復(fù)乳脂肪乳劑可使藥物在淋巴節(jié)區(qū)域吸收增加，可防止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。微乳是乳劑內(nèi)相被高濃度乳化劑增溶，可降低抗癌藥的毒性。復(fù)乳是將普通乳劑二次乳化形成水/油/水或油/水/油型乳劑，在特定組織中相對濃度較高，可

35、降低毒性，提高療效。2021/9/1337含藥脂肪乳“抗心律失常海洋一類新藥的藥學(xué)研究”, 2002年10月獲得國家衛(wèi)生部授予第7屆 “吳階平醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)保羅.楊森藥學(xué)獎(jiǎng)”的藥學(xué)研究三等獎(jiǎng)。2021/9/1338配套示范工程及示范基地等建設(shè)以海洋藥物研究為特色, 建立海洋生物科技園，形成“科技興?！碑a(chǎn)學(xué)研示范基地，。該項(xiàng)目解決了大海馬養(yǎng)殖過程中，健康苗種培養(yǎng)、水質(zhì)處理與調(diào)控、強(qiáng)化營養(yǎng)及餌料選擇、高效低毒藥物等一系列防止暴發(fā)性疾病發(fā)生的配套技術(shù)，建立了大海馬養(yǎng)殖工藝流程，成功實(shí)現(xiàn)了大海馬名優(yōu)種類的工廠化養(yǎng)殖，為我國海洋藥源生物的大量增殖提供了一個(gè)范例。該項(xiàng)目對于改善我國海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的結(jié)構(gòu)，提高人民的

36、健康水平具有重要意義。海馬工廠化健康養(yǎng)殖2021/9/1340雜色鮑工廠化健康養(yǎng)殖2021/9/1341雜色鮑工廠化健康養(yǎng)殖2021/9/1342雜色鮑工廠化健康養(yǎng)殖 由于海馬、雜色鮑有規(guī)?；⒐S化養(yǎng)殖基地，可提供足量無污染健康養(yǎng)殖的鮮活海馬、雜色鮑，將加速生產(chǎn)高附加值、高新技術(shù)含量的保健食品或藥品的發(fā)展。 隨著科學(xué)的進(jìn)步，結(jié)合海馬、雜色鮑補(bǔ)腎壯陽、抗應(yīng)激、延緩衰老等藥理作用，應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)，提高其深加工生產(chǎn)的水平，發(fā)揮其在保健功能食品、新藥開發(fā)的巨大潛力，其生物醫(yī)藥應(yīng)用開發(fā)的前景十分廣闊。 已通過技術(shù)鑒定。經(jīng)專家鑒定認(rèn)為，“該成果技術(shù)水平居國際先進(jìn)水平，技術(shù)的系統(tǒng)性與產(chǎn)業(yè)化在國際上是罕見

37、的”。大海馬雜色鮑工廠化健康養(yǎng)殖2021/9/1345The End2021/9/1346 第一章 總 則 第一條 為保證藥品的安全、有效和質(zhì)量可控，規(guī)范藥品注冊行為，根據(jù)中華人民共和國藥品管理法（以下簡稱藥品管理法）、中華人民共和國藥品管理法實(shí)施條例（以下簡稱藥品管理法實(shí)施條例），制定本辦法。 第二條 在中華人民共和國境內(nèi)從事藥物研制和臨床研究，申請藥物臨床研究、藥品生產(chǎn)或者進(jìn)口，以及進(jìn)行相關(guān)的藥品注冊檢驗(yàn)、監(jiān)督管理，適用本辦法。 第三條 藥品注冊，是指依照法定程序，對擬上市銷售的藥品的安全性、有效性、質(zhì)量可控性等進(jìn)行系統(tǒng)評價(jià)，并作出是否同意進(jìn)行藥物臨床研究、生產(chǎn)藥品或者進(jìn)口藥品決定的審批過

38、程，包括對申請變更藥品批準(zhǔn)證明文件及其附件中載明內(nèi)容的審批。 第四條 國家鼓勵(lì)研究創(chuàng)制新藥，對創(chuàng)制的新藥及治療疑難危重疾病的新藥實(shí)行快速審批。 第五條 國家藥品監(jiān)督管理局主管全國藥品注冊管理工作，負(fù)責(zé)對藥物臨床研究、藥品生產(chǎn)和進(jìn)口的審批。 省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理局受國家藥品監(jiān)督管理局的委托，對藥品注冊申報(bào)資料的完整性、規(guī)范性和真實(shí)性進(jìn)行審核。 第六條 藥品注冊申請人（以下簡稱申請人），是指提出藥品注冊申請，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任，并在該申請獲得批準(zhǔn)后持有藥品批準(zhǔn)證明文件的機(jī)構(gòu)。境內(nèi)申請人應(yīng)當(dāng)是在中國境內(nèi)合法登記的法人機(jī)構(gòu)，境外申請人應(yīng)當(dāng)是境外合法制藥廠商。境外申請人辦理進(jìn)口藥品注冊，應(yīng)當(dāng)由其

39、駐中國境內(nèi)的辦事機(jī)構(gòu)或者由其委托的中國境內(nèi)代理機(jī)構(gòu)辦理。 辦理藥品注冊申請事務(wù)的人員應(yīng)當(dāng)是相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員，并熟悉藥品注冊管理法律、法規(guī)和技術(shù)要求。 2021/9/1347 二、申報(bào)資料項(xiàng)目 （一）綜述資料 1、藥品名稱。 2、證明性文件。 3、立題目的與依據(jù)。 4、研究結(jié)果總結(jié)及評價(jià)。 5、藥品說明書樣稿、起草說明及參考文獻(xiàn)。 6、包裝、標(biāo)簽設(shè)計(jì)樣稿。 （二）藥學(xué)研究資料 7、藥學(xué)研究資料綜述。 8、生產(chǎn)用原材料研究資料： (1)生產(chǎn)用動(dòng)物、生物組織或細(xì)胞、原料血漿的來源、收集及質(zhì)量控制等研究資料。 (2)生產(chǎn)用細(xì)胞的來源、構(gòu)建（或篩選）過程及鑒定等研究資料。 (3)種子庫的建立、檢定、保

40、存及傳代穩(wěn)定性資料。 (4)生產(chǎn)用其它原材料的來源及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 9、原液或原料生產(chǎn)工藝的研究資料。 10、制劑處方及工藝的研究資料，輔料的來源和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，及有關(guān)文獻(xiàn)資料。 11、產(chǎn)品質(zhì)量研究資料及有關(guān)文獻(xiàn)，包括參考品或者對照品的制備及標(biāo)定,以及與國內(nèi)外已上市銷售的同類產(chǎn)品比較的資料。 12、臨床研究申請用樣品的制造和檢定記錄。 13、制造和檢定規(guī)程草案，附起草說明及檢定方法驗(yàn)證資料。 14、初步穩(wěn)定性研究資料。 15、直接接觸制品的包裝材料和容器的選擇依據(jù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2021/9/1348第一部分治療用生物制品 一、注冊分類 1、未在國內(nèi)外上市銷售的生物制品。 2、單克隆抗體。 3、基因治療、

41、體細(xì)胞治療及其制品。 4、變態(tài)反應(yīng)原制品。 5、由人的、動(dòng)物的組織或者體液提取的，或者通過發(fā)酵制備的具有生物活性的多組份制品。 6、由已上市銷售生物制品組成新的復(fù)方制品。 7、已在國外上市銷售但尚未在國內(nèi)上市銷售的生物制品。 8、含未經(jīng)批準(zhǔn)菌種制備的微生態(tài)制品。 9、與已上市銷售制品結(jié)構(gòu)不完全相同且國內(nèi)外均未上市銷售的制品（包括氨基酸位點(diǎn)突變、缺失，因表達(dá)系統(tǒng)不同而產(chǎn)生、消除或者改變翻譯后修飾，對產(chǎn)物進(jìn)行化學(xué)修飾等）。 10、與已上市銷售制品制備方法不同的制品（例如采用不同表達(dá)體系、宿主細(xì)胞等）。 11、首次采用DNA重組技術(shù)制備的制品（例如以重組技術(shù)替代合成技術(shù)、生物組織提取或者發(fā)酵技術(shù)等）

42、。 12、國內(nèi)外尚未上市銷售的由非注射途徑改為注射途徑給藥，或者由局部用藥改為全身給藥的制品。 13、改變已上市銷售制品的劑型但不改變給藥途徑的生物制品。 14、改變給藥途徑的生物制品（不包括上述12項(xiàng)）。 15、已有國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的生物制品。2021/9/1349 （三）藥理毒理研究資料 16、藥理毒理研究資料綜述。 17、主要藥效學(xué)試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 18、一般藥理研究的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 19、急性毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 20、長期毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 21、動(dòng)物藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 22、致突變試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 23、生殖毒性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 24、致癌試驗(yàn)資

43、料及文獻(xiàn)資料。 25、免疫毒性和/或免疫原性研究資料及文獻(xiàn)資料。 26、溶血性和局部（血管、皮膚、粘膜、肌肉等）刺激性等主要與局部、全身給藥相關(guān)的特殊安全性試驗(yàn)研究和文獻(xiàn)資料。 27、復(fù)方制劑中多種組份藥效、毒性、藥代動(dòng)力學(xué)相互影響的試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。 28、依賴性試驗(yàn)資料及文獻(xiàn)資料。2021/9/1350中藥、天然藥物分類及申報(bào)資料要求 一、注冊分類及說明 （一）注冊分類 1、未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物中提取的有效成分及其制劑。 2、未在國內(nèi)上市銷售的來源于植物、動(dòng)物、礦物等藥用物質(zhì)制成的制劑。 3、中藥材的代用品。 4、未在國內(nèi)上市銷售的中藥材新的藥用部位制成的制劑。 5、未在國內(nèi)

44、上市銷售的中藥、天然藥物中提取的有效部位制成的制劑。 6、未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物制成的復(fù)方制劑。 7、未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物制成的注射劑。 8、改變國內(nèi)已上市銷售藥品給藥途徑的制劑。 9、改變國內(nèi)已上市銷售藥品劑型的制劑。 10、改變國內(nèi)已上市銷售藥品工藝的制劑。 11、已有國家標(biāo)準(zhǔn)的中成藥和天然藥物制劑。2021/9/1351 （二）說明 1、“未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物中提取的有效成分及其制劑”是指國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中未收載的從中藥、天然藥物中得到的未經(jīng)過化學(xué)修飾的單一成分及其制劑。 2、“未在國內(nèi)上市銷售的來源于植物、動(dòng)物、礦物等藥用物質(zhì)制成的制劑”是指未被國家藥品標(biāo)準(zhǔn)或省、自治區(qū)、直轄市地方藥材規(guī)范（以下簡稱“法定標(biāo)準(zhǔn)”）收載的中藥材及天然藥物制成的制劑。 3、“中藥材的代用品”是指用來代替中藥材某些功能的藥用物質(zhì)，包括： （1）已被法定標(biāo)準(zhǔn)收載的中藥材； （2）未被法定標(biāo)準(zhǔn)收載的藥用物質(zhì)。 4、“未在國內(nèi)上市銷售的中藥材新的藥用部位制成的制劑”是指具有法定標(biāo)準(zhǔn)的中藥材原動(dòng)、植物新的藥用部位制成的制劑。 5、“未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物中提取的有效部位制成的制劑”是指從中藥、天然藥物中提取的一類或數(shù)類成分制成的制劑。 6、“未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物制成的復(fù)方制劑”包括： （1）傳統(tǒng)中藥復(fù)