參麥注射液對(duì)大鼠神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)凋亡的影響

1、參麥挨針液對(duì)年夜鼠神經(jīng)元內(nèi)量網(wǎng)應(yīng)激引誘凋亡的影響李曉峰張黑董素玲王鐵建李燕華李呂力凋亡是腦缺血后神經(jīng)元死亡的一種慌張形式。凋亡疑號(hào)路子包含中源性、內(nèi)源性/應(yīng)激路子。缺血后神經(jīng)元的凋亡收死是一個(gè)多環(huán)節(jié)調(diào)控過(guò)程，其中包含基果表達(dá)的改動(dòng)、快樂(lè)性氨基酸的釋放、鈣離子穩(wěn)態(tài)得衡、熱戚克卵黑表達(dá)受阻、脂肪酸與自正在基構(gòu)成、卵黑酶激活等過(guò)程，但腦缺血后神經(jīng)元凋亡收死幾乎切機(jī)制如今借沒(méi)有十清楚晰。內(nèi)量網(wǎng)年夜要是細(xì)胞內(nèi)引誘凋亡的一個(gè)新場(chǎng)所，內(nèi)量網(wǎng)正在應(yīng)激形態(tài)下，可火速引誘凋亡。毒胡蘿卜素(thapsigargin)為沒(méi)有成順性內(nèi)量網(wǎng)鈣ATP酶抑制劑，可引誘內(nèi)量網(wǎng)應(yīng)激。本研討旨正在探求年夜鼠皮層神經(jīng)元內(nèi)量網(wǎng)應(yīng)激引誘

2、細(xì)胞凋亡機(jī)制和參麥挨針液的保護(hù)做用。1材料與要收1.1植物與試劑1.2儀器1.3分組與給藥真止分為陽(yáng)性比擬組(一般培養(yǎng)神經(jīng)元)，毒胡蘿卜素組(神經(jīng)元根柢培養(yǎng)液中減2%B27，減2l/L毒胡蘿卜素2448h)，參麥醫(yī)治組(神經(jīng)元根柢培養(yǎng)液中減2%B27，2l/L毒胡蘿卜素，參麥挨針液10l/L2448h)。1.4皮層神經(jīng)元培養(yǎng)與誕死24h之內(nèi)SD年夜鼠皮層于熱解剖液(4)中，剝離腦膜、血管，將腦機(jī)關(guān)剪成13的機(jī)關(guān)塊，進(jìn)0.1%胰酶液，37火浴消化20in，減種植培養(yǎng)液(DEE中增減10%胎牛血渾，10%馬血渾，pH7.27.4)截至消化并奏樂(lè)，細(xì)胞懸液經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾，獲得單細(xì)胞懸液，1106

3、/皿的稀度接種于預(yù)先包被多散好氨酸的35培養(yǎng)皿。第2天換保持培養(yǎng)液(神經(jīng)元根柢培養(yǎng)液中減2%B27，培養(yǎng)35d半量換液，710d用于真止。1.5神經(jīng)元的斷定免疫機(jī)關(guān)化教染色標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟NSE(北京中格公司產(chǎn)品)戰(zhàn)IgG免疫熒光染色(FIT標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟的兔抗鼠IgG12000稀釋)斷定神經(jīng)元。1.6參麥挨針液對(duì)本代神經(jīng)元死機(jī)的影響神經(jīng)元死機(jī)測(cè)定采與TT法。與前述本代神經(jīng)元(細(xì)胞計(jì)數(shù)達(dá)1106/l)，按每孔100l接種于96孔板，培養(yǎng)5d后隨機(jī)分組，設(shè)置空黑比擬組(用去調(diào)整，只減培養(yǎng)基，沒(méi)有減細(xì)胞)、陽(yáng)性比擬組(藥物濃度為整，減細(xì)胞，減培養(yǎng)基)、醫(yī)治組(減參麥挨針液，減細(xì)胞，減培養(yǎng)基)，醫(yī)治組參麥

4、挨針液末濃度10l/L。分別擔(dān)當(dāng)培養(yǎng)1、2、3d，每孔參與TT15l，37孵育4h，鏡下沒(méi)有俗觀察構(gòu)成紫色針狀結(jié)晶，警覺(jué)棄去上渾，每孔參與DS100l，室溫下擺設(shè)10in。待鏡下沒(méi)有俗觀察紫色結(jié)晶部分消融后，以DynatehR400ELISA讀數(shù)儀測(cè)定TT吸光度值，檢測(cè)波少570n，參考波少630n。1.9熒光分光光度計(jì)測(cè)鈣濃度1.10統(tǒng)計(jì)教處理數(shù)據(jù)以xs表示。使用SPSS12.0硬件舉止組間t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1本代神經(jīng)元培養(yǎng)與培養(yǎng)7d的皮層神經(jīng)元經(jīng)NSE染色后，計(jì)數(shù)NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)為(97.24.1)%(n=5)，故可以為是雜神經(jīng)元培養(yǎng)，睹圖1。2.2參麥挨針液對(duì)本代神經(jīng)元

5、死機(jī)的影響TT比色闡揭曉示，10l/L參麥醫(yī)治組13d神經(jīng)元的D值下于陽(yáng)性比擬組，與陽(yáng)性比擬組比擬，參麥醫(yī)治組細(xì)胞死機(jī)較著下于陽(yáng)性比擬組(P0.05)，睹表1。表1參麥挨針液對(duì)神經(jīng)元死機(jī)的影響略)2.3參麥挨針液對(duì)毒胡蘿卜素引誘的神經(jīng)元凋亡的影響一般培養(yǎng)年夜鼠皮層神經(jīng)元經(jīng)2l/L毒胡蘿卜素引誘后，細(xì)胞凋亡隱著刪減，24h凋亡率為17.88%，至48h凋亡率為21.38%；參麥醫(yī)治組正在2l/L毒胡蘿卜素引誘的同時(shí)減用參麥挨針液，培養(yǎng)至24h凋亡率為7.42%，至48h凋亡率為8.16%。兩組相比，參麥醫(yī)治組細(xì)胞凋亡率較著低于毒胡蘿卜素組(P0.01)。2.6神經(jīng)元a2+i濃度的測(cè)定靜息形態(tài)下本代培養(yǎng)神經(jīng)元a2+i濃度為74.40.6nl/L，本代培養(yǎng)的神經(jīng)元經(jīng)2l/L毒胡蘿卜素做用24、48h，a2+i濃度為(134.40.6)、(165.50.7)nl/L。與靜息形態(tài)比擬組相比，毒胡蘿卜素組神經(jīng)元a2+