潔凈環(huán)境滅菌與檢查

1、潔凈環(huán)境滅菌與檢查第1頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院【知識目標(biāo)】 熟悉生物制品生產(chǎn)對環(huán)境、廠房及潔凈級別的要求?！灸芰δ繕?biāo)】 1、學(xué)會領(lǐng)取并配制消毒劑，填寫領(lǐng)料 單及配制單。 2、學(xué)會不同級別潔凈區(qū)的清洗和消毒。 3、學(xué)會測定潔凈區(qū)的沉降菌并填寫檢 查記錄。第2頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院【主要內(nèi)容】基礎(chǔ)知識介紹：生物制品生產(chǎn)對廠房及環(huán)境的要求實訓(xùn)操作：任務(wù)1、 領(lǐng)取并配制消毒劑任務(wù)2、潔凈區(qū)清洗和消毒任務(wù)3、測定模擬潔凈區(qū)的沉降菌第3頁，共41頁，2022年，

2、5月20日，10點44分，星期四上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)知識介紹：生物制品生產(chǎn)對廠房及環(huán)境的要求1. 選擇廠址時應(yīng)注意考慮滿足的條件應(yīng)在大氣含塵、含菌濃度低，無有害氣體，自然環(huán)境好， 衛(wèi)生條件較好的區(qū)域。(2) 交通方便，但應(yīng)遠(yuǎn)離交通要道及工廠。(3) 排水良好，應(yīng)無洪水淹沒危險。第4頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院(4) 市政區(qū)域規(guī)劃中，不會使廠址環(huán)境產(chǎn)生不利于產(chǎn)品質(zhì)量 的影響。(5) 水、電、燃料、排污、物資供應(yīng)和公用服務(wù)條件較好。(6) 地勢高燥，有利于污水的排放與凈化。第5頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分

3、，星期四2. 廠區(qū)布置生產(chǎn)、行政、生活和輔助區(qū)的總體布局應(yīng)合理，不得互相妨礙。(2) 生產(chǎn)車間與實驗動物房、附屬車間分開，即潔凈區(qū)與污染區(qū)、非潔凈區(qū)分離，以保證產(chǎn)品質(zhì)量和防止散毒、污染；人流與物流分開；潔凈物與污染物分流。(3) 生產(chǎn)房應(yīng)充分利用組合式車間結(jié)構(gòu)，并根據(jù)要求設(shè)立不同潔凈級(100級、1000級、l0000級、100000級)的潔凈生產(chǎn)區(qū)和緩沖區(qū)。生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第6頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四我國生產(chǎn)廠房的潔凈等級標(biāo)準(zhǔn)生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院潔凈級別/級塵粒數(shù)（個/m3）活微生物數(shù)/（個/m3）0.5m5m沉降菌浮

4、游菌100350001510003500020003100100003500002000010500100003500000200000-第7頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院 100級：灌裝前不經(jīng)無菌過濾的制品及配制、合并、精制、 添加穩(wěn)定劑、佐劑、滅火劑等。 10000級：灌裝前需經(jīng)無菌過濾的制品及其配制、合并、精制、添加穩(wěn)定劑、佐劑、滅活劑、除菌過濾、超濾等。生物制品生產(chǎn)環(huán)境的空氣潔凈級別要求如下：第8頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四 100000級：原料血漿的合并、非低溫提取、分裝前巴氏消毒、軋蓋及

5、制品最終容器的清洗等。 體外免疫診斷試劑的陽性血清的分裝，抗原、抗體分裝，應(yīng)在100000級環(huán)境、局部100級級下進(jìn)行。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第9頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院不同潔凈級別之間的靜壓差應(yīng)5Pa(0.5mm水柱)；潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間的靜壓應(yīng)l0Pa(1.0mm水柱)；靜態(tài)或動態(tài)情況下，壓差均應(yīng)能始終維持設(shè)計規(guī)定的數(shù)值。第10頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院(5) 生產(chǎn)用苗(毒)種和非生產(chǎn)用菌(毒)種、生產(chǎn)用細(xì)胞與非生產(chǎn)用細(xì)胞、強(qiáng)毒與弱毒、死毒與活毒、脫

6、毒前與脫毒后的制品和活疫苗與滅活疫苗、預(yù)防制品等的加工或灌裝不得同時在同一生產(chǎn)廠房內(nèi)進(jìn)行，其貯存要嚴(yán)格分開。（6）必須建立等級實驗動物房；（7）綠化設(shè)計要做到“土不見天”。 第11頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四任務(wù)1、 領(lǐng)取并配制消毒劑生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)習(xí)目標(biāo)： 了解消毒的目的和意義；掌握領(lǐng)取和配置消毒劑的方法。 任務(wù)提出：現(xiàn)在要開始進(jìn)行某種生物制品的生產(chǎn)，需要一個萬級潔凈室作為潔凈生產(chǎn)車間，為了對潔凈室進(jìn)行徹底的清洗、消毒，需要按生產(chǎn)指令單向倉庫領(lǐng)取配料并核對、填寫收料記錄，并按照處方及SOP要求配制0.2%新潔爾滅、5%甲酚皂液、75%乙醇

7、溶液，填寫配制記錄。任務(wù)分析：要配置消毒劑，首先要得到生產(chǎn)指令單，按照處方要求，向倉庫領(lǐng)取所需要的配料，再按照SOP的要求，逐一配置。第12頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院知識鏈接：一、消毒劑的種類清潔劑包括：洗衣粉溶液、洗衣液、洗手液、潔廁劑、洗潔精、硫酸-重鉻酸鉀洗液、0.2%、1%、2%NaOH溶液、1%稀鹽酸、95%乙醇溶液、乙醇：乙醚（3：7）混合液。 消毒劑包括：75%乙醇溶液、0.1%新潔爾滅溶液、4%苯酚液、2%過氧乙酸、2%甲酚皂溶液、3%碘酊、84消毒液。 空氣消毒劑：臭氧 第13頁，共41頁，2022年，5月

8、20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院二、常見消毒劑的配制與稀釋采用稀釋法配制消毒劑，其公式是： CV=C1V1C：濃溶液的濃度 V：需用濃溶液的體積C1：稀溶液的濃度 V1：欲配制稀溶液的體積。第14頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院任務(wù)實施：一、領(lǐng)取配料，填寫領(lǐng)料單 領(lǐng)取 新潔爾滅、甲酚皂液、乙醇等配料。第15頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院二、配制步驟0.2%新潔爾滅溶液：取5%新潔爾滅液200ml加水至5000ml 稀釋成0.2%的溶

9、液，置干燥容器內(nèi)密閉保存。5%甲酚皂溶液：取50%甲酚皂液500ml加水至5000ml稀釋成 5%的溶液，置干燥容器內(nèi)密閉保存。75%乙醇溶液：取95%乙醇液3947ml加水至5000ml稀釋成 75%的溶液，置干燥容器內(nèi)密閉保存。第16頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四注意事項：萬級潔凈區(qū)所用消毒劑的配制用水為注射用水，十萬級潔凈區(qū)所用消毒劑的配制用水為純化水。萬級潔凈區(qū)與十萬級潔凈區(qū)盛裝消毒劑的容器必須有明顯的級別狀態(tài)標(biāo)示，禁止不同級別容器交叉使用。配制消毒劑時必須二人復(fù)核操作。并及時填寫配制記錄。配制消毒劑必須戴保護(hù)用品，避免燒傷。在指定地點配制消毒劑，避免造成污

10、染。生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第17頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四評分標(biāo)準(zhǔn)：生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院序號項目與技術(shù)要求評分比例%檢測標(biāo)準(zhǔn)實訓(xùn)記錄得分1準(zhǔn)備30正確填寫領(lǐng)料單2操作20按照SOP正確操作3結(jié)果50配制的消毒劑可用第18頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四生物制品與檢測課件上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院任務(wù)2、潔凈區(qū)清洗和消毒學(xué)習(xí)目標(biāo)：了解不同級別潔凈區(qū)清洗和消毒操作SOP；掌握操作方法并學(xué)會填寫記錄。 任務(wù)提出：現(xiàn)在要開始進(jìn)行某種生物制品的生產(chǎn)，需要萬級潔凈室作為潔凈生產(chǎn)車間，要求按照萬級潔凈區(qū)清潔消毒規(guī)程進(jìn)行清洗

11、和消毒，并填寫清洗消毒記錄。任務(wù)分析：首先熟悉萬級潔凈區(qū)清潔消毒規(guī)程，列出所需清潔劑及消毒劑，向倉庫領(lǐng)取并登記；按照萬級潔凈區(qū)清潔消毒規(guī)程進(jìn)行清洗和消毒。第19頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四知識鏈接：清潔頻率及范圍：操作室每天生產(chǎn)前、工作結(jié)束后，進(jìn)行1次清潔、消毒，每天用臭氧消毒60分鐘。清潔范圍：操作臺面、門窗、墻面、地面、用具及其附屬裝置、設(shè)備外壁等。 每星期六工作結(jié)束后，進(jìn)行全面清潔、消毒1次。 清潔范圍：以消毒劑擦拭室內(nèi)一切表面，包括墻面、照明和頂棚。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第20頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四每月，室內(nèi)空間用臭氧消毒

12、150分鐘。根據(jù)室內(nèi)菌檢情況或出現(xiàn)異常，再決定消毒頻率。倒班生產(chǎn)，兩班清潔時間，間距應(yīng)在2小時以上。更衣室、緩沖間及公共設(shè)施，由專職清潔工每日上班后，下班前進(jìn)行清潔、消毒。 上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第21頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四消毒劑及使用方法： 用于消毒表面的有：0.2%新潔爾滅、5%甲酚皂液、75%乙醇溶液。用于空間消毒的有：臭氧。消毒劑使用前，應(yīng)經(jīng)過0.22m微孔濾膜過濾。各種消毒劑每月輪換使用。消毒劑從配制到使用不超過24小時。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第22頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四任務(wù)實施：一、準(zhǔn)備工作領(lǐng)NaCl（50-100

13、PPm）每天用于手消毒領(lǐng)NaCl（200-250PPm）用于潔具和下水道的消毒領(lǐng)75%酒精和NaCl（150-200PPm）用于工器具的消毒領(lǐng)75%酒精用于設(shè)備表面的消毒用紫外線對整個潔凈區(qū)空氣和設(shè)備表面殺菌消毒上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第23頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四二、清潔消毒步驟清潔、消毒方法：先用滅菌的超細(xì)布，在消毒劑中潤濕后，擦拭各臺面、設(shè)備表面，然后用滅菌的不脫落纖維的清潔布擦拭墻面和其它部位。最后擦拭地面。操作室每天清潔后，對房間進(jìn)行臭氧消毒。清潔程序：清潔過程中本著先物后地、先內(nèi)后外、先上后下、先拆后洗、先零后整的擦拭原則。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第24頁

14、，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四清潔效果評價：目檢各表面應(yīng)光潔，無可見異物或污垢。QA對塵埃粒子、沉降菌進(jìn)行檢測，應(yīng)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。清潔工具的清潔及存放：清潔工作結(jié)束后，清潔工具按清潔工具清潔規(guī)程清洗、存放并貼掛狀態(tài)標(biāo)示。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第25頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四問題思考：為什么各種消毒劑每月輪換使用？上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第26頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四任務(wù)3、測定模擬潔凈區(qū)的沉降菌 學(xué)習(xí)目標(biāo)：1、了解潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測原理；2、熟悉潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)；3、學(xué)會潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測操作方法

15、，并會填寫填寫檢查記錄。任務(wù)提出： 潔凈區(qū)清潔消毒后，需經(jīng)過監(jiān)測，各項指標(biāo)合格后方可使用。本次任務(wù)是對潔凈區(qū)沉降菌進(jìn)行監(jiān)測。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第27頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四任務(wù)分析： 采用沉降法，即通過于培養(yǎng)皿中利用自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子，經(jīng)不少于48小時的培養(yǎng)，在3035下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計數(shù)，以菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度，并做好檢查記錄。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第28頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四任務(wù)實施：一、器材準(zhǔn)備 高壓消毒鍋：使用時嚴(yán)格按照說明書操作。恒溫培養(yǎng)箱：

16、必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進(jìn)行檢定。培養(yǎng)皿：90mm玻璃培養(yǎng)皿培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第29頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四二、 操作程序采樣將已制備好的培養(yǎng)平皿按要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第30頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四采樣點數(shù)目及其布置 沉降菌測試的最少采樣點數(shù)目可查表1確定。在滿足最少測點數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第31頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四表1 最小采樣點數(shù)目上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院面

17、積（m2）潔凈度級別10010,000100,000300,000102322210204222204082224010016422100200401032注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面積；對非單向流潔凈室，指的是房間面積。第32頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四表2 最少培養(yǎng)皿數(shù) 上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院潔凈度級別所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)1001410,0002100,0002300,0002第33頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四采樣點的位置工作區(qū)采樣點的位置離地0.81.5m左右（略高于工作面）。 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增

18、加采樣點。 上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第34頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四培養(yǎng)：1、 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)。2、 在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48小時。3、 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照實驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否 污染。 可每批選定3只培養(yǎng)皿做對照實驗。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第35頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四菌落計數(shù)1、用肉眼直接計數(shù)，標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，然后 用510倍放大鏡檢查，是否有遺漏。2、若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時 仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第36頁，共41頁，20

19、22年，5月20日，10點44分，星期四注意事項1、 測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。2、 采取一切措施防止人為對樣本的污染。3、 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細(xì)的記錄。4、 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于 培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長 的菌落，須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要 時用顯 微鏡鑒別。5、 采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破 損或污染的應(yīng)剔除。上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院第37頁，共41頁，2022年，5月20日，10點44分，星期四結(jié)果計算 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù). 平均菌落數(shù)的計算：平均菌落數(shù)=（M1+M2+Mn）/n 式中