王實驗二 土壤中微生物的分離與純化

1、實驗二 土壤中微生物的分離與純化1實驗?zāi)康膌掌握常用的分離純化微生物的方法。2了解微生物常用的接種和培養(yǎng)方法，熟練掌握斜面接種的方法和技術(shù)3學(xué)習(xí)倒平板的方法，進(jìn)一步掌握無菌操作技術(shù)2實驗原理從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。土壤中混雜著大量的微生物, 是微生物生活的大本營，它所含微生物無論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。因此土壤是微生物多樣性的重要場所，是發(fā)掘微生物資源的重要基地，可以從中分離、純化得到許多有價值的菌株。本實驗將采用不同的培養(yǎng)基，通過稀釋涂布平板法和平板劃線法，從土壤中分離不同類型的微生物。3微生物的分離技術(shù)稀釋涂布平板法 平板劃線分離法

2、簡易單孢子分離法 菌落（colony）單個微生物在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度,形成肉眼可見有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞的群落。4微生物培養(yǎng)技術(shù)斜面接種液體培養(yǎng)基接種穿刺接種5實驗器材實驗材料: 菌源:土樣10g、大腸桿菌、金黃葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、四聯(lián)球菌、黑曲霉菌、青霉菌、放線菌、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基、高氏一號培養(yǎng)基等試劑:10%酚、鏈霉素、工業(yè)酒精實驗儀器: 盛9mL無菌水的試管、涂布器、1-2ml無菌吸管、0.1-0.2ml無菌吸管、接種環(huán)，酒精燈、無菌培養(yǎng)皿、試管架、培養(yǎng)箱、超凈工作臺、記號筆、廢液缸6實驗方法及步驟微生物的分離一、稀釋涂布分離法1.倒平板：牛肉

3、膏蛋白胨，高氏I號，馬丁氏培養(yǎng)基加熱溶解后冷卻至55-60時，分別向高氏I號培養(yǎng)基中加入數(shù)滴10%的酚，向馬丁氏培養(yǎng)基中加入3ml/1000ml的鏈霉素，混勻后倒平板，牛肉膏蛋白胨倒4皿、高氏I號和馬丁氏培養(yǎng)基各倒3皿。72.土壤稀釋液的制備：10g土樣，加入90ml無菌水中，在三角瓶中振搖1020min，即成為稀釋度為10-1的土壤懸液。取0.5ml 加入盛有4.5ml無菌水的試管中，以此類推，分別制成稀釋度為10-210-6的土壤懸液。893.涂布：將上述每種培養(yǎng)基平板底面標(biāo)記稀釋度，然后用無菌吸管從最后三種稀釋度，即10-4、10-5和10-6的試管中吸取0.1ml對號放入平板上，用玻棒

4、涂布。104.培養(yǎng)：高氏I號和馬丁氏倒置培養(yǎng)于28培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5d，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基在37培養(yǎng)1-2d。115.挑菌落：轉(zhuǎn)至斜面，檢查是否一致，保存。12 1.倒平板，標(biāo)記培養(yǎng)基名稱、編號和日期。 2.劃線方法 3.挑單菌落 二、平板劃線分離法13斜面接種：由已長好微生物的斜面中挑取少量菌種接種至另一空白斜面培養(yǎng)基上。 1.接種前用記號筆在距試管口23cm位置上，注明菌名、接種日期等。 2.將試管放于手掌中，并用手指夾住，使兩支試管呈“V”字形。 3.用火焰將接種環(huán)燒紅，然后將接種環(huán)來回通過火焰數(shù)次。 4.用小指、無名指和手掌拔下試管塞，并持于手中。 5.將試管口在火焰上微燒一周。 6.

5、將燒過的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，先將環(huán)接觸一下沒有長菌的培養(yǎng)基部分，使其冷卻， 以免燙死菌體，然后用環(huán)在菌苔上輕輕地接觸，刮下少許培養(yǎng)物，并將接種環(huán)慢慢的從試管中抽出，并迅速地伸入另一試管中，在斜面上劃線（波浪或直線），使菌體沾附在培養(yǎng)基上。 7.將接種環(huán)抽出，灼燒管口。 8.塞上棉塞。 9.將接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌。微生物接種培養(yǎng)1415結(jié)果與觀察： 2.繪出平板上出現(xiàn)的菌落的生長和分布情況。 3.觀察與記錄以下內(nèi)容： 序號 來源 大小 形狀 邊緣 顏色 表面 代謝物 種類1.檢查接種后培養(yǎng)物的生長情況和染菌情況，將實驗結(jié)果填入下表16注意事項1.無菌操作前需對超凈工作臺進(jìn)行滅菌（紫外燈、無菌風(fēng)、酒精消毒）2.接種環(huán)要灼燒滅菌，滅菌后放入菌液或要接觸菌體前要冷卻，接種后要在火焰上將多余的菌種燒死。3. 實驗操