蕎麥花葉總黃酮對大鼠2型糖尿病胰島素抵抗的影響

1、蕎麥花葉總黃酮對大鼠2型糖尿病胰島素抵抗的影響【摘要】目的研究蕎麥花葉總黃酮TFBFL對2型糖尿病胰島素抵抗大鼠的血糖、血脂和對胰島素抵抗IR的影響,并討論其作用機制。方法以脂肪乳灌胃結(jié)合低劑量四氧嘧啶注射方法制作2型糖尿病大鼠胰島素抵抗模型。將SD大鼠隨機分為正常組，模型組，TFBFL高、中、低治療組，羅格列酮RSG治療組。連續(xù)灌胃6周后,測定空腹血糖(FBG),糖耐量TGG，空腹胰島素FINS，血清總膽固醇T，甘油三酯TG，游離脂肪酸(FFA),糖化血紅蛋白GHb，計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)和KITT。HE染色觀察胰腺和腎組織形態(tài)學改變。結(jié)果與正常對照組比擬,模型組大鼠FBG，TGG，F(xiàn)

2、INS,TG,T,FFA,GHb明顯升高P0.05或P0.01，ISI明顯降低P0.05或P0.01。與模型對照組相比,蕎麥花葉黃酮能使FBG,TGG,FINS,TG,T,FFA,GHb降低P0.05或P0.01而升高ISIP0.05或P0.01,呈一定劑量依賴性,高劑量組與羅格列酮相近。組織HE染色光鏡下觀察顯示，模型組大鼠胰腺及腎組織構(gòu)造異常。不同劑量的TFBFL均能明顯改善上述組織的病理改變。結(jié)論TFBFL可以劑量依賴性的增加2型糖尿病大鼠胰島素敏感性,改善胰島素抵抗,對糖尿病大鼠各器官損傷具有保護作用?！娟P(guān)鍵詞】蕎麥花葉黃總酮2型糖尿病胰島素抵抗Abstrat:bjetiveTstud

3、ytheeffetsfttalflavnesfbukheatflersandleavesnserugluse,serulipidandinsulinresistaneintype2diabetiratsithinsulinresistaneandtrytfinditsehanis.ethdsThedelfdiabetitype2ratsithinsulinresistaneasadebyinjetingallxanandgivingagastriperfusinfintralipid.Ratsererandlydividedintnralgrup,delgrup,TFBFL100,200and

4、400gkg-1grupsandrsiglitaznegrup.Fastingbldgluse(FBG),GTT,fastinginsulin(FINS),insulinsensitivityinex(ISI),KITT,freefattyaids(FFA),triglyeride(TG),ttalhlesterl(T),glysylatedheglbin(GHb)ereeasuredafter6eeks.Thepanreas,fat,renalissueserestainedbyHEsastbserveitsrphlgihanges.ResultsFBG,FINS,TG,T,FFA,GHbs

5、ignifiantlyinreasedinthedelgrupasparediththseinnralgrup,hileISIassignifiantlyredued.FBG,FINS,TG,T,FFA,GHbsignifiantlyreduedintheTFBFLgrupasparediththseindelgrup,hileISIassignifiantlyinreasedindse-dependentanner.TheeffetsfhighdseTFBFLtreatedgruperesiilartthsefRSGgrup.HE-stainedrganizatinserebservedth

6、atthedelgruprganizatinalstruturefthepanreasandkidneyereabnral.ThsepathlgihangesindifferentdseTFBFLgrupseresignifiantlyiprved.nlusinTFBFLaninreaseinsulinsensitivity,iprveinsulinresistaneandprtetrgansftype2diabetirats.Keyrds:Ttalflavnesfbukheatflerandleaf;Type2diabetesellitus;Insulinresistane2型糖尿病T2D胰

7、島素抵抗的發(fā)病率逐年增加，已成為嚴重威脅人類安康的慢性病，其危害性不僅在于它的發(fā)病率高，更主要的是它所導致的心腦血管疾并失明、腎衰等各種并發(fā)癥，因此糖尿病的防治刻不容緩。研究說明，蕎麥種子提取物有許多藥理活性，但對蕎麥花葉的研究較少。我室前期研究發(fā)現(xiàn)蕎麥花葉總黃酮TFBFL具有降糖、降脂、抑制體內(nèi)外糖基化終產(chǎn)物的形成等作用1,2，本實驗在此根底上，進一步觀察TFBFL對實驗性2型糖尿病胰島素抵抗大鼠的防治作用，討論其防治糖尿病及其并發(fā)癥的可能機制。1材料與儀器1.1藥品與試劑蕎麥花葉為甜蕎麥子粒收割后自然枯燥的花葉來自內(nèi)蒙古庫倫旗，其水提取物經(jīng)乙醇溶解過濾后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收乙醇，濃縮枯燥即得

8、蕎麥花葉總黃酮經(jīng)中國醫(yī)學科學院藥物研究所鑒定提取物中總黃酮含量為92.2%。羅格列酮RSG,葛蘭素史克，批號：20220916;四氧嘧啶(allxan)美國Siga公司；胰島素江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份，批號：20220105；胰島素放射免疫分析試劑盒(原子高科股份)；膽固醇北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠；蔗糖北京拜爾迪生物公司；L谷氨酸鈉北京拜爾迪生物公司；1,2丙二醇天津北方天醫(yī)化學試劑廠,分析純，考馬斯亮藍試劑盒美國Siga公司，血肌酐、游離脂肪酸、糖化血紅蛋白等測定試劑盒南京建成生物工程研究所，甘油三酯、總膽固醇測定試劑盒浙江東甌生物工程，其他試劑為國產(chǎn)分析純。1.3動物清潔級SD大鼠，雄性，體

9、質(zhì)量20020g，北京中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供，合格證號為SXK11-00-0006。2方法2.1大鼠糖尿病模型SD雄性大鼠70只,隨機抽取10只作為正常對照組,每天灌胃蒸餾水,其余60只大鼠每天灌胃脂肪乳(豬油2g,膽固醇0.5g,谷氨酸鈉0.1g,蔗糖0.5g,果糖0.5g,吐溫2l,丙二醇3l,丙硫氧嘧啶0.1g,加水至10l),第14天腹腔注射四氧嘧啶100g/kg，隔日1次，共3次，同時繼續(xù)灌胃脂肪乳。末次腹腔注射四氧嘧啶72h后,用血糖儀測定空腹血糖,用毛細血管法斷定胰島素抵抗3，其方法為：待測大鼠禁食不禁水12h，腹腔注射胰島素0.05U/kg，選取注射前，注射后15，3

10、0，60，120in，5個時間點測血糖，用KITT值表示(以血糖為縱坐標,時間為橫坐標,直線回歸得回歸系數(shù)r乘以100即KITT)，以空腹血糖16.7l/L,同時KITT小于正常對照組的60作為2型糖尿病胰島素抵抗大鼠,造模成功52只。2.2分組與給藥將52只2型糖尿病胰島素抵抗大鼠隨機分5組：模型對照組11只,灌胃水10l/kg；陽性藥物組11只，灌胃RSG1g/kg，TFBFL低、中、高劑量組L-TFBFL，-TFBFL，H-TFBFL各10只，分別灌TFBFL100，200，400g/kg。上述各組大鼠上午8點灌胃給藥,2h后灌胃脂肪乳,連續(xù)6周。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3檢測指標末次

11、給藥后禁食12h，用血糖儀及配套血糖試紙測FBG，GTT；比色法測定TG，T，F(xiàn)FA，GHb；放免法測定FINS，計算ISI評價胰島素抵抗的程度。按文獻4方法：ISI等于FBG與FINS乘積倒數(shù)的自然對數(shù)，即ISI=Ln1/FINSFBG;HE染色觀察胰腺和腎組織形態(tài)學改變。2.4數(shù)據(jù)處理實驗數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件處理，以s表示，用方差分析和t檢驗進展組間比擬。3結(jié)果3.1TFBFL對糖尿病大鼠血糖、胰島素和胰島素敏感指數(shù)的影響與正常對照組相比，模型對照組血糖和胰島素明顯升高P0.01，P0.05，而ISI明顯降低P0.01，說明已形成糖尿病胰島素抵抗，類似2型糖尿玻TFBFL能明顯降低血

12、糖P0.05，高劑量組與陽性對照藥羅格列酮相近。TFBFL高劑量組與陽性對照藥羅格列酮能明顯增加ISIP0.05。結(jié)果見表1。表1TFBFL對糖尿病大鼠TBG，F(xiàn)INS和ISI敏感指數(shù)的影響略3.2TFBFL對2型糖尿病大鼠糖耐量及胰島素抵抗的影響正常對照組灌服葡萄糖后2h血糖程度根本恢復正常，模型組糖耐量各點血糖值均較正常對照組高P0.01，2h血糖程度仍然很高，符合臨床2型糖尿病胰島素抵抗。而各劑量TFBFL治療組和羅格列酮治療組各點血糖值較模型對照組明顯降低P0.05，P0.01，TFBFL隨著劑量的增加糖耐量改善更明顯。結(jié)果見表2及圖1。表2TFBFL對糖尿病大鼠GTT的影響略3.3T

13、FBFL對糖尿病大鼠TG、T、FFA和GHb的影響中、高劑量TFBFL能抑制2型糖尿病胰島素抵抗大鼠血清TG升高P0.01，高劑量TFBFL能抑制2型糖尿病胰島素抵抗大鼠血清T、FFA和血液GHb的升高P0.01，高劑量組作用與羅格列酮相近。結(jié)果見表3。表3TFBFL對糖尿病大鼠TG，T，F(xiàn)FA和GHb的影響略3.4TFBFL對腎、胰腺病理改變的影響正常大鼠腎臟腎小球大小均勻，較為飽滿，腎小管上皮細胞排列規(guī)那么圖2a；糖尿病模型腎臟腎小球大小不等，腎小球萎縮、變性壞死，腎小囊腔增大，腎小球基底膜增厚，腎小管萎縮，腎血管壁變厚，管腔狹窄，炎癥細胞浸潤圖2b；給予TFBFL高劑量治療組腎臟較糖尿病

14、模型對照有明顯改善(圖2)。正常大鼠胰島數(shù)目較多、體積較大，呈現(xiàn)圓形或橢圓形細胞團狀，邊界清楚。胰島內(nèi)細胞數(shù)目、形態(tài)正常圖3a；糖尿病模型組胰島數(shù)目減少、體積萎縮，有明顯出血灶,胰島內(nèi)細胞排列不規(guī)那么，形態(tài)異常，邊界不清，有大量炎細胞浸潤，有明顯出血灶圖3b；TFBFL高劑量治療組與模型組相比病變均較輕，胰島體積有所增大，胰島數(shù)量及胰島內(nèi)細胞數(shù)目增多，細胞的排列趨于規(guī)整，細胞形態(tài)、大小根本正常圖3。4討論胰島素抵抗是糖尿并肥胖和脂質(zhì)代謝紊亂、動脈硬化、高血壓病等多種慢性代謝相關(guān)性疾病的共同病理生理根底和2型糖尿病的顯著特征5。目前認為改善IR及其相關(guān)的代謝異常已成為降低糖尿病發(fā)病率的重要防治策

15、略。本實驗結(jié)果顯示，用灌胃脂肪乳和反復小劑量四氧嘧啶腹腔注射可使大鼠空腹血糖增高，KITT小于正常對照組的60即胰島素敏感指數(shù)降低，血清T、TG、FFA和血液GHb顯著增高，提示大鼠已經(jīng)產(chǎn)生胰島素抵抗和代謝紊亂。灌服蕎麥黃酮干預(yù)治療的大鼠可使其空腹血糖降低，T、TG、FFA和血液GHb顯著下降，改善糖耐量和胰島素抵抗。?中藥大全?記載：“蕎麥全草含蕓香苷，槲皮素，咖啡酸等黃酮類化合物。有降糖、降脂、降低毛細血管通透性，抗炎等作用。本課題組前期大量研究證明蕎麥黃酮有降糖、降脂、抗炎、抗氧化等作用。蕎麥花葉含多種黃酮類物質(zhì)，主要有蕓香苷蘆丁、槲皮素等。研究說明FFA是糖尿病發(fā)生過程中重要的危險因素。本實驗動物用脂肪乳和小劑量四氧嘧啶后可見血糖、血脂、FFA明顯升高，KITT小于正常對照組的60即胰島素敏感指數(shù)降低，與胰島素抵抗出現(xiàn)相一致。TFBFL降糖、降脂、改善胰島素抵抗的作用，可能是通過降脂、降FF