分析方法驗證培訓(xùn)

1、關(guān)于分析方法驗證培訓(xùn)第1頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 1概念 1 ：分析方法ICHQ2定義：分析方法是指進行分析的方式，應(yīng)詳細描述每一個分析試驗所必需的步驟它包括，但不局限于：樣品，參照對照品，試劑的配制，儀器的使用，標(biāo)準曲線的繪制，計算公式的運用等第2頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 1概念2 分析方法驗證 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則定義：為使測試結(jié)果準確，可靠，必須對所采用的分析方法的科學(xué)性，準確性和可行性進行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的目的和要求，這就是通常所說的對方法進行驗證第3頁，共142

2、頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 2分析方法形成過程第4頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 3什么情況分析方法需要驗證？剛開發(fā)的分析方法修正或建立分析方法用于新的問題分析方法變更分析方法在不同實驗室，分析人員使用不同儀器證明兩個分析方法的等效性第5頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.4驗證需要考慮的因素確認并校驗的儀器文件化的方法可靠地參數(shù)標(biāo)準品合格的分析人員樣品完整性第6頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.5驗證基本假設(shè) 前提）專屬性得到證明方法己經(jīng)是最佳條件用統(tǒng)計學(xué)方法處理數(shù)據(jù)第7

3、頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.6 現(xiàn)有驗證指南缺陷僅僅提出了要求驗證的項目沒有給出具體的驗證方法沒有給出判斷標(biāo)準一些驗證中的實際問題沒有指導(dǎo)原則第8頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.7 分析方法驗證方案內(nèi)容闡明目的和范圍責(zé)任書面的分析方法使用的物料與儀器目錄每一參數(shù)的實驗程序統(tǒng)計方法每一參數(shù)的驗證標(biāo)準第9頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 8 儀器的確認構(gòu)造，型號和制造商手冊改造安裝確認和運行確認校準程序維護保養(yǎng)養(yǎng)計劃第10頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 0 不同

4、驗證具體要求驗證的范圍新方法驗證步驟方法轉(zhuǎn)移驗證方法重新驗證第11頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 1 驗證的范圍新方法要求進行完整的驗證藥典的方法要求部分進行驗證（確證）重大要的變化需要進行部分再驗證第12頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 2 新方法驗證步驟開發(fā)新方法或從相關(guān)實驗室獲得新方法制定驗證方案，驗證規(guī)程或驗證主計劃確定方法（驗證）適用的目標(biāo)，范圍確定實驗參數(shù)及可接受的標(biāo)準確定驗證實驗過程確認驗證使用的儀器相關(guān)性能第13頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.2-新方法驗證步驟（續(xù)1）確認驗證

5、所需的人員，試劑及標(biāo)準運行預(yù)驗證試驗如果需要調(diào)整方法或接受標(biāo)準運行完整的驗證試驗建立該方法的SOP用于日常分析工作確定需要重新驗證方法的標(biāo)準第14頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.2-新方法驗證步驟（續(xù)2）確定日常工作中系統(tǒng)適應(yīng)性測試及/或分析質(zhì)量控制檢查的類型及頻率將驗證過程，結(jié)果及結(jié)論總結(jié)形成完整的驗證報告第15頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.2.1概念3：替代分析方法FDA定義： 目的在于替代法規(guī)分析方法的分析方法第16頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 2 . 2基本內(nèi)容專屬性檢測限定量限精密

6、度線性與范圍準確度耐用性第17頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 2 . 3分析方法按特性分類第一類主成分定量第二類雜質(zhì)或降解產(chǎn)物測定第三類性能特點測定第四類鑒別試驗第18頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四USPICHWHO選擇性選擇性選擇性線性度及范圍線性度線性度及范圍范圍準確度準確度準確度精密度精密度重復(fù)性精密度 中間精密度重現(xiàn)性檢測限檢測限檢測限定量限定量限定量限耐用性耐用性耐受性第19頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 2 . 4ICH,USP及WHO驗證要求3.2.4.1FDA要求驗證項目鑒別雜

7、質(zhì)限度雜志定量含量及溶出度 特性準確度-+ +重復(fù)性-+中間精密度-+專屬性+檢測限-+- - -定量限-+- -線性-+ -范圍-+ -耐用性-+第20頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.2.4.2ICH要求驗證項目鑒別雜質(zhì)限度雜志定量含量及溶出度準確度-+ +重復(fù)性-+中間精密度-+專屬性+檢測限-+- -定量限-+-線性-+范圍-+耐用性第21頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.2.4.3WHO要求驗證項目鑒別雜質(zhì)定量雜質(zhì)限度含量特性準確度-+ -+ + 精密度-+ -+ + 耐用性+ + + + + 線性和范圍-+ -+ + 專屬

8、性+ + + + + 檢測限-+ -定量限-+ -第22頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 3方法轉(zhuǎn)移驗證證明經(jīng)過其它實驗室的驗證，并可以正式運行的分析測試過程，是否可以在本實驗室運行，并適應(yīng)實際的使用情況： 滿足相應(yīng)的測試要求 真實反映被測物相應(yīng)的特性， 濃度，質(zhì)量，純度及效價情況第23頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 3 . 1概念 4 ：法規(guī)分析方法FOA 定義：是用于評佑原料藥或制劑某一個規(guī)定特性的分析方法第24頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.3.2概念5 :交叉驗證FDA定義：在同一個研

9、究或不同交叉研究中，用兩種或多種分析方法進行分析，對驗證參數(shù)進行比較第25頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 3 . 3轉(zhuǎn)移驗證方法來源官方認可的標(biāo)準 USP/NFEPBPChPJPAOAC客戶提供的，經(jīng)過驗證后的方法相關(guān)實驗室經(jīng)驗證后正在使用的方法第26頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 3 . 4轉(zhuǎn)移驗證的要求系統(tǒng)適應(yīng)性及方法專屬性必須驗證方法耐用性可以不驗證雜質(zhì)測試方法檢測限與定量限必須驗證其它驗證項目根據(jù)實際情況決定，對于項目的選擇與取舍應(yīng)有詳細的討論第27頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 .

10、 3 . 5分析方法轉(zhuǎn)移驗證分析方法轉(zhuǎn)移方案及程序精密度準確度耐用性編寫并批準的具體測試方法熟練程度核實新實驗室正式驗收第28頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 4方法再驗證概念需運行方法再驗證的變更情況方法再驗證要求第29頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 4 . 1概念 6 ：方法再驗證 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則定義：在某些情況下，如原料藥合成工藝改變，制劑處方改變，分析方法發(fā)生改變等，均有必要對分析方法再次進行全面或部分指標(biāo)的驗證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法再驗證第30頁，共142頁，2022年，5

11、月20日，11點23分，星期四3 . 4 . 2需運行方法再驗證的變更情況改變藥物合成工藝改變制劑組成改變分析過程操作過程的更改改變儀器，色譜柱等硬件測試條件持續(xù)改變以適應(yīng)系統(tǒng)適應(yīng)性要求，且改變程度超出藥典規(guī)定的方法耐用性驗證范圍第31頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 4 . 3方法再驗證要求證實相應(yīng)的變更發(fā)生后，原使用的分析測試過程：能夠繼續(xù)保持其特有的性質(zhì)（如專屬性）能夠繼續(xù)真正反映被測物的相應(yīng)特性（檢測限與定量限）依靠變更情況確定重新驗證的內(nèi)容與程度第32頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 0其它概念參考文獻第33頁，共1

12、42頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 1概念 7 ：系統(tǒng)適應(yīng)性在一個系統(tǒng)（主要是色譜分離系統(tǒng)）被使用前，檢查其系統(tǒng)性能指標(biāo)是否滿足分析要求的過程它是確保色譜系統(tǒng)質(zhì)量性能的要素第34頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 1概念8：接受標(biāo)準FDA定義：用于驗收分析結(jié)果的數(shù)字限度，范圍，或其他適當(dāng)?shù)挠嬃康?5頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 2 一參考文獻ICH 一 QZA Text on Validatlon of Analytical Procedure : ( 1994 ) ICH 一 QZB Validat

13、ion on AnaIytical Procedures : Methodology： ( 1995 ) CDER Reviewer Guidance : Validation of ChromatographicMethod ( 1994 ) CDER Submitting Samples and Analytical Data for MethodValidations （1987 ) CDER Draft Analytical Procedures and Method Validation ( 2000 )CDER Bioanalytical Method Validation for

14、 Human Studles ( 1999 ) USP Vaildation of Compendial Methods ( current revlsion ) 中國藥典：藥品質(zhì)量標(biāo)準分析方法驗證第36頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第一部分：基本要求第37頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第二部分：實驗設(shè)計與操作第38頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期

15、四1.0講座目的 掌握驗證試驗設(shè)計 掌握驗證試驗操作 了解確定接受標(biāo)準原則第39頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四第一部分:基本要求Validation of Analytical Procedure 分析方法驗證第40頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四第二部分:實驗設(shè)計與操作1.0講座目的 掌握驗證試驗設(shè)計 掌握驗證試驗操作 了解確定接受標(biāo)準原則第41頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 0 一精密度概念容易混淆的精密度中術(shù)語重復(fù)性中間精密度推薦重復(fù)性接受標(biāo)準 AOAC 濃度與精密度關(guān)系重現(xiàn)性第42頁，共142

16、頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 1 一概念 1 ：精密度lCH-Q2 定義：分析方法的精密度指在規(guī)定條件下，對均質(zhì)樣品，多次取樣進行一系列檢測結(jié)果的接近程度（離散程度）第43頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 2 一容易混淆的精密度中術(shù)語儀器重復(fù)性相同人員，儀器，日期，標(biāo)準液方法重復(fù)性相同人員，儀器，日期，重新配制標(biāo)準液中間精密度不同日期，不同分析人員，不同儀器第44頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 3 一重復(fù)性概念推薦重復(fù)性測定方法第45頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 .

17、 3 . 1 一概念 2 ：重復(fù)性ICH -Q2 定義：重復(fù)性是指在同樣的操作條件下，較短時間間隔的精密度第46頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 3 . 2 一推薦重復(fù)性測定方法在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)重復(fù)測定如 3 個濃度，每個濃度 3 次或 100 的測試濃度，測定六次記錄每次測定各組分響應(yīng)計算各響應(yīng)值與平均值之間相對標(biāo)準偏差第47頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.3.2.1-概念3：系統(tǒng)重復(fù)性相同條件下，同一分析人員對同一樣品溶液多次測試結(jié)果的接近程度第48頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 3

18、 . 2 . 2 系統(tǒng)重復(fù)性實驗 取同一均勻標(biāo)準樣品溶液連續(xù)重復(fù)測定六次記錄每次測定各組分響應(yīng)計算各響應(yīng)值與平均值之間相對標(biāo)準偏差第49頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.3.2.3-概念4：方法重復(fù)性相同條件下，同一個分析人員對同一個均勻樣品，多次取樣測定所得結(jié)果的接近程度第50頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 3 . 2 . 4 一方法重復(fù)性實驗取同一批號均勻樣品按照分析方法規(guī)定至少稱量出六份按含量測定方法測定每一份樣品含量計算每一次測定的含量與平均含量之間的相對標(biāo)準偏差第51頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分

19、，星期四2.4-中間精密度概念推薦中間精密度測定方法第52頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 4 . 1 一概念 5 ：中間精密度ICH-Q2 定義中間精密度指的是試驗室內(nèi)部條件改變，如：不同日，不同分析者，不同儀器等情況下的精密度第53頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 4 . 2 推薦中間精密度測定方法應(yīng)確定隨機事件對分析方法精密度的影響，如不同日期，不同分析人員，不同儀器等等沒有必要一一考察用均勻設(shè)計，或正交設(shè)計方法第54頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 5 一推薦重復(fù)性接受標(biāo)準系統(tǒng)重復(fù)性

20、S/N1000,RSD S/N100,RSD2% S/N10,RSD4% S/N10,RSD8%方法重復(fù)性 測定結(jié)果的相對偏差 儀器分析小于2% 容量分析小于0.3%第55頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 6 AOAC 濃度與精密度關(guān)系濃度（%）比率單位RSD（%）1001100%1.31010-110%2.7110-21%2.80.110-30.1%3.70.0110-4100ppm5.30.00110-510ppm7.30.000110-61ppm110.0000110-7100ppb150.00000110-810ppb210.000000110-91p

21、pb30第56頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.7-重現(xiàn)性 概念 什么時候需要作重現(xiàn)性第57頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 7 . 1 一概念 6 ：重現(xiàn)性ICH Q2定義：重現(xiàn)性指不同試驗室之間的精密度第58頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2.7.2-什么時候需要作重現(xiàn)性？是比較實驗室間的差異當(dāng)一個方法要升級到法規(guī)方法時，需要做這個工作第59頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 0 準確度概念原料藥準確度測定制劑產(chǎn)品準確度測定雜質(zhì)準確度測定推薦準確度測定方法推薦準確度測

22、定接受標(biāo)準AOAC 濃度與回收率關(guān)系第60頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 1 概念 7 ：準確度ICHQ2 定義分析方法的準確性指的是真實值或認可的參考值與測量值之間相近程度第61頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 2 原料藥準確度測定用該方法分析已知純度的分析物該方法的分析結(jié)果與成熟的分析方法相比較，該成熟方法準確度是已知的在精密度，線性，專屬性建立后，進行推論第62頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 3 制劑準確度測定用該方法去測按處方量制成的混合物（加入已知量被測物）在制劑中加入已知量主藥

23、或與另一成熟方法比較在精密度，線性和專屬性建立后得出第63頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 4 雜質(zhì)準確度測定在樣品（原料浩擠）中加入已知量的雜質(zhì)無法得到雜質(zhì)降解物的，與采用其他方法測得的結(jié)果比較，可以使用原料的響應(yīng)值第64頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 5 推薦準確度測定方法在六個空白樣品中，分別加入已知濃度的樣品（濃度范圍為含量測定濃度的 80120 % ) 計算該方法的百分回收率第65頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.6推薦準確度測定接受標(biāo)準測定得到的主品的百分回收率與理論回收率100%間

24、的相對標(biāo)準偏差不得大于方法重復(fù)性相對標(biāo)準偏差的4倍第66頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3.7AOAC濃度與回收率關(guān)系濃度（%）比率單位平均回收率（%）1001100%98-1021010-110%98-102110-21%97-1030.110-30.1%95-1050.0110-4100ppm90-1070.00110-510ppm80-1100.000110-61ppm80-1100.0000110-7100ppb80-1100.00000110-810ppb60-1150.000000110-91ppb40-120第67頁，共142頁，2022年，5月20日

25、，11點23分，星期四4 . 0 檢測限概念直觀法信噪比法標(biāo)準偏差和斜率法推薦檢測限測定方法第68頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 1概念 8 ：檢測限ICH Q2 定義檢測限度指的是樣品中的被分析物質(zhì)能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量第69頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 2 直觀法直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法檢測限的測定是通過對一系列已知濃度被分析物的樣品進行分析，并以能準確（或被可靠）地檢測被測物的最小量或最低濃度來建立第70頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 .

26、 3 信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較算出能被可靠地測出的最低濃度或量一般以信噪比為3：1或2：1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測限第71頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 4 標(biāo)準偏差和斜率法根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準偏差和斜率檢測限度（DL）=3 . 3 / s：響應(yīng)值的標(biāo)準偏差（通過空白樣品測背景響應(yīng)值或Y軸截距） s ：校正曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）第72頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四4 . 5 推薦檢測限測定方法在最靈敏的儀器狀態(tài)下測定至少四個空白樣品洗脫時間需

27、要覆蓋整個樣品中所有組分的樣品溶液每個樣品進樣三次計算該組分的最小檢測限第73頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四5.0定量限概念推薦定量限測定方法第74頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四5 . 1 概念 9 ：定量限ICH Q2 定義：某種分析方法的定量限度是指具有合適準確性和精密度的條件下，能夠定量測定分析組分的最低限量。它是樣品中含量低的化合物定量分析的參數(shù)，特別適用于雜質(zhì)和（或）降解產(chǎn)物的測定第75頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四5 . 2 推薦定量限測定方法按檢測限方法測定儀器的平均噪聲然后按信噪比等于10

28、.00.5配置樣品溶液連續(xù)進樣三次計算組分的最小定量限第76頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 0 耐用性概念變動因素色譜分析中耐用性項目第77頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 1 概念10:耐用性ICHQ2 定義分析方法的耐用性是指試驗參數(shù)適當(dāng)?shù)匕l(fā)生細小改變時，測量能力保持不受影響，可用于說明正常使用時的可靠性第78頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 2 變動因素流動相的組成pH值不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱柱溫流速等第79頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 .

29、2 變動因素典型氣相色譜法變動因素載氣流速不同廠牌或批號的色譜柱固定相擔(dān)體柱溫進樣口檢測器溫度第80頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6.3色譜分析中耐用性項目分析方法變量所有分析樣品制備操作提取時間HPLC濃度項組成不同的柱溫度濃度GC不同的柱溫度流量第81頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 0 線性度概念線性范圍推薦線性度測定方法推薦線性度測定接受標(biāo)準第82頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 1 概念11 ：線性度ICHQ2 定義分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（含量）成

30、比例關(guān)系的能力第83頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 3 推薦線性度測定方法在含量測定濃度的70%-130%或50%-150%均勻選擇至少六個不同的濃度點每一個嘗試至少需要測定四次記錄各對應(yīng)濃度下的響應(yīng)值第84頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 2 推薦線性度測定接受標(biāo)準相關(guān)系數(shù)應(yīng)當(dāng)在0 . 999與1 . 000 之間經(jīng)線性回歸處理其截距不應(yīng)明顯地偏離零點第85頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 0 專屬性概念推薦專屬性測定方法降解研究內(nèi)容第86頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23

31、分，星期四8.1概念13：專屬性ICH-Q2定義 專屬性是指在一些可能存在的組分，如雜質(zhì)，降解物，基質(zhì)等存在時，對被分析物準確可靠測定的能力第87頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8.1推薦專屬性測定方法按照規(guī)定的標(biāo)準或參考文獻的色譜分析方法分別將原料藥，中間體，可得到雜質(zhì)，原料，中間體，前體及降解產(chǎn)物的樣品分別進樣記錄各物質(zhì)的相對保留時間確保各樣品之間的峰可以分開至少確保其他物質(zhì)的峰與主峰分開第88頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 2 概念 14 ：穩(wěn)定性指示性分析方法FDA定義穩(wěn)定性指示性分析方法是一種驗證了的定量分析方法，其能夠

32、測定原料藥或藥品在有關(guān)性質(zhì)的變化一個穩(wěn)定性指示性分析能在沒有降解產(chǎn)物，工藝雜質(zhì)，輔助材料或其他的雜質(zhì)干擾下，準確地對活性成分進行測量第89頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 3 降解研究目的降解途徑影響因素確定包裝分析方法專屬性第90頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 4 降解研究內(nèi)容光酸堿氧化還原高熱高濕第91頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第二部分：實驗設(shè)計與操作第92頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23

33、分，星期四Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第三部分：鹽酸氟西汀驗證實例第93頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四1 . 1 目的掌握色譜方法驗證所需要的項目掌握色譜驗證基本實驗方法了解穩(wěn)定性指示性方法驗證的要求了解析因分析在驗證中應(yīng)用第94頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四1 . 2 簡介美國某公司生產(chǎn)10mg和20mg鹽酸氟西汀兩種相膠囊其重量與配方相同僅鹽酸氟西汀與輔料比例不同所驗證方法時公司內(nèi)部對美國和歐盟市場產(chǎn)品放行和穩(wěn)定性研究中使用的含量和雜質(zhì)分析的方法該分析方法已經(jīng)建立第95頁，共1

34、42頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四1 . 3 驗證項目清單1 精密度 2 線性 3 范圍 4 準確性 5 低濃度鹽酸氟西汀驗證6 m -鹽酸氟西汀驗證 7 選擇性 8 耐用性第96頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 0 精密度項目： 系統(tǒng)重復(fù)性方法重復(fù)性中間精密度第97頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 1 系統(tǒng)重復(fù)性方法按照分析方法要求，配制鹽酸氟西汀標(biāo)準溶液重復(fù)進樣 5 次計算峰面積平均值與相對標(biāo)準偏差第98頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 2 方法重復(fù)性方法按照分析方法要求

35、，分別配制 20mg 鹽酸氟西汀樣品溶液 6 個分別進樣計算含量相對標(biāo)準偏差第99頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四2 . 3 中間精密度方法由另外一個分析員，在不同日期，另外的儀器上，按照分析方法 分別配制 20 mg 鹽酸氟西汀樣品溶液 6 個計算 含量及相對標(biāo)準偏差第100頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四3 . 0 線性方法正常含量分析用標(biāo)準溶液濃度的 50到 200% 范圍內(nèi)均勻選擇 5個點并配制相應(yīng)濃度的鹽酸氟西汀含量標(biāo)準溶液分別進樣計算線性回歸分析相關(guān)系數(shù)，斜率，Y軸截距第101頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23

36、分，星期四4 . 0 范圍方法正常20mg樣品含量分析濃度50到200范圍內(nèi)均勻選5個點配制鹽酸氟西汀樣品溶液分別進樣計算線性回歸分析相關(guān)系數(shù)，斜率，Y軸截距第102頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四5 . 0 準確性項目 標(biāo)準品準確性 樣品準確性第103頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四5 . 1 標(biāo)準品準確性方法按照分析方法要求，配制鹽酸氟西汀標(biāo)準溶液重復(fù)進樣 5 次計算 準確性測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算第104頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四5 . 2 樣品準確性方法按照產(chǎn)品標(biāo)準量，在70到180

37、正常標(biāo)示量選均勻選擇 4 個點，混合輔料與及鹽酸氟西汀每點3個樣品，分別進樣計算 回收率測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算第105頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 0低濃度鹽酸氟西汀驗證項目：線性準確性系統(tǒng)重復(fù)性定量限度檢測限度第106頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 1 線性方法按照分析方法要求，均勻選擇 6個點配制標(biāo)示量的 0 . 02到 1 . 0 含量標(biāo)準溶液分別進樣計算線性回歸分析相關(guān)系數(shù)，斜率，Y袖截距第107頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 2 準確性方法配制雜質(zhì)濃度的標(biāo)準溶

38、液進樣6次計算按峰面積用回歸線性方程來計算測量濃度平均值，相對標(biāo)準偏差第108頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 3 系統(tǒng)重復(fù)性方法配制工作濃度的 0 . 02和 0 . 05標(biāo)準溶液分別進樣6次計算峰面積的平均值與相對標(biāo)準偏差第109頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 4 定量限度 用系統(tǒng)重復(fù)性實驗中的標(biāo)準偏和線性回歸 方程中的斜率差計算第110頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四6 . 5 檢測限度 用系統(tǒng)重復(fù)性實驗中的標(biāo)準偏和線性回歸 方程中的斜率差計算第111頁，共142頁，2022年，5月20日，

39、11點23分，星期四7 . 0 m -鹽酸氟西汀驗證項目：線性檢測限度定量限度準確性精密度方法重復(fù)性中間精密度 第112頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 1 m-鹽酸氟西汀簡介M -鹽酸氟西汀是產(chǎn)品中的一個雜質(zhì)m -鹽酸氟西汀在0 . 05- 1 . 0區(qū)間呈線性相對響應(yīng)因子（對鹽酸氟西?。?F = 132 . 73952/74859534 = 1 . 8第113頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 2定量限度根據(jù) 鹽酸氟西汀定量限相對響應(yīng)值計算鹽酸 m -氟西汀定量限度第114頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分

40、，星期四7 . 3 檢測限度根據(jù) 鹽酸氟西汀檢測限度 相對響應(yīng)值計算鹽酸 m -氟西汀檢測限度第115頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 4回收方法分別6個標(biāo)空白中加0 . 05的 m -鹽酸氟西汀進樣計算 回收率實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算第116頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 5準確性方法在已知 m -鹽酸氟西汀含量的樣品中分別在0 . 4 % , 0 . 5和 0 . 6 % 3 個水平加入 m -鹽酸氟西汀標(biāo)準品每組3個樣品中計算回收率實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算第117頁，共142頁，2022年，

41、5月20日，11點23分，星期四7 . 6 重復(fù)性項目方法重復(fù)性中間精密度第118頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7. 61方法重復(fù)性方法按照要求配制溶液反復(fù)進樣6次計算平均值標(biāo)準偏差相對標(biāo)準偏差第119頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四7 . 62 中間精密度方法另外一個分析員，在不同日期，另外的儀器上按照方法重復(fù)性方法配制溶液6次分別進樣計算含量及相對標(biāo)準偏差第120頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 0 選擇性1.降解 2.系統(tǒng)適用性 1）原樣 3.空白 2）酸降解 4）氧化降解 5）日光降解 6）溶液

42、加熱降解 7）粉末加熱降解第121頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 1 簡介降解產(chǎn)物的選擇性試驗是分析方法穩(wěn)定性指示性驗證的一個重要部分主要目的是通過試驗證明各種降解的產(chǎn)物與所要分析的物質(zhì)庫完全分開本試驗中的主要設(shè)備是二極管矩陣檢測器并通過計算：純度角，匹配角，純度閾值匹配閾值，含量來證明峰的純度第122頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8.2原樣品方法20mg膠囊按照規(guī)定的方法進行分析標(biāo)準品按照規(guī)定的方法進樣分析第123頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 3 酸降解方法：樣品：稱量大約等量20mg的樣

43、品，轉(zhuǎn)移到 50ml 容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml的濃鹽酸。放置18小時。用 10N 氫氧化鈉中和到 pH 5 . 5。稀釋到刻度。過濾。標(biāo)準品：稱量大約22mg 的標(biāo)準品，轉(zhuǎn)移到 50ml 容量瓶中，加入 20ml稀釋劑，加2ml 的鹽酸。放置18小時。用10N氫氧化鈉中和到 pH5 . 5。稀釋到刻度。第124頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 4堿降解方法：樣品：稱量大約等量20mg的樣品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml 的5N氫氧化鈉。放置18小時。用5N鹽酸中和到 pH 5 . 5。稀釋到刻度。過濾。標(biāo)準品：稱量大約22mg的標(biāo)準品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，加2 ml的5N氫氧化鈉。放置18小時。用5N鹽酸中和到 p H5 . 5。稀釋到刻度。第125頁，共142頁，2022年，5月20日，11點23分，星期四8 . 5氧化降解樣品：稱量大約等量20mg的樣品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml 的30%過氧化氫。放置5小時。稀釋到刻度。過濾。標(biāo)準品：稱量大約22mg的標(biāo)準品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，2 ml的30%過氧化氫。放