PCR檢驗實驗室檢查要點指南

1、PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 PAGE PAGE 1 / 91 / 9 試驗實驗室檢查要點指南2016 2016 8 31 日，北京市食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了PCR 試驗實驗室檢查要點指南（室檢查要點指南（2016 版），具體內容如下：聚合酶鏈反映）試驗實驗室檢查要點指南6 版）NA 或RNA 的試驗實驗室。聚合酶鏈反映（Polymerase Chain Reaction，PCR）是NANA的NANA聚合酶導致下的鏈延伸反映三個階段的多次循環(huán)。每一次循環(huán)后的擴增產物均可作為下一輪循環(huán)的模板，理論n 2n 倍。PCR 試劑操作簡單，短時間內在體外可獲得數百萬個特異靶 NA 序列的復制，為臨

2、床疾病的診斷、治療監(jiān)測和預后評估提供了一種極有幫助的實驗室輔助手段。PCRPCR試劑生產企業(yè)在產品試驗進程中不可缺少的工作環(huán)境，其環(huán)境控制水平和質量管理水平直接影響著最終產品是否合格，能否放行。由于該產品本身的特殊性，醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)矩附錄體外診斷試劑、醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)矩體外診斷試劑現場檢查指導原則條款中，明確關于PCR 試劑的生產和試驗環(huán)境做出規(guī)則。此外現行衛(wèi)生行業(yè)的法規(guī)、PCR試驗實驗室均作出規(guī)則，主要涉及全國臨床檢驗規(guī)程（第三版）、醫(yī)療機構臨床基因擴增管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2010 194 號）、醫(yī)療機構臨床基因擴增試驗實驗室工作導則及臨床PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 P

3、AGE PAGE 2 / 92 / 9診斷中聚合酶鏈反映（診斷中聚合酶鏈反映（PCR）技術的應用（WS/T 230-2002）等行業(yè)標準的相關要求。PCR試驗相關進程的PCR試驗實驗室設計建設與質量控PCR試劑生產企業(yè)在PCR試驗實驗室的設計建造和管理要求提供參考。當國家相關法規(guī)、標準、檢查要求發(fā)生變化時，應當重新討論以確保本檢查指南持續(xù)契合要求。適用范圍適用范圍本檢查指南可作為北京市食品藥品監(jiān)督管理局組織、實施的體外診斷試劑本檢查指南可作為北京市食品藥品監(jiān)督管理局組織、實施的體外診斷試劑產品注冊質量管理體系現場核查、醫(yī)療器械生產許可證現場核查、醫(yī)療器產品注冊質量管理體系現場核查、醫(yī)療器械生產

4、許可證現場核查、醫(yī)療器械生產監(jiān)督檢查等各項涉及 械生產監(jiān)督檢查等各項涉及 PCR 試驗實驗室檢查的參考資料。PCR試劑的相關部分應當參照本檢查指南執(zhí)行。核查要點核查要點（一）（一）現場察看生產企業(yè)PCR 試驗實驗室布局PCR試驗實驗室設計方案和/或平面設計圖（應當標明風向或壓差梯度）。1.PCRPCR試劑生產區(qū)域應當在各自獨力的建筑物或空間內，保證空氣不直接聯(lián)通，防止擴增時形成的氣溶膠造成交叉污染。2.原則上PCR 試驗實驗室應當設置以下區(qū)域：試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)。根據使用儀器的功能，區(qū)域可適當合并且。若使PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 PAGE PAGE

5、3 / 93 / 9用實時熒光定量PCR 儀且不需要進行后續(xù)產物分析工作，擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)可合并且。若使用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀， 則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)可合并且。各區(qū)域在物理空間上應當完全相互獨力，各區(qū)域無論是在空間上還是在使用區(qū)域嵌套一個區(qū)域。各區(qū)域不應當有空氣的直接相通。擴增區(qū)與擴增產物分析區(qū)各區(qū)域宜采用獨力直排方式出風。采用空調機組方式的，PCR 組；同時應當考慮停機后各房間空氣連通的可能性，采取必要的控制措施。依照試劑儲存和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產物分析區(qū)方向空氣壓PCR和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產物分析區(qū)方向進行，防止擴增產物順

6、空氣氣流進入擴增前的區(qū)域?？諝饬飨驊敒閱蜗?，禁止下游污染上游。應當設置合理的壓差梯度，并且安裝壓差監(jiān)測裝置，以有效表明空氣流向，壓差梯度5 帕。相應措施，避免出現兩個門同時打開的情況。為互鎖裝置或采取相應措施保證兩側門不會同時開啟。（二）現場察看儀器設施配置1.的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 PAGE PAGE 4 / 94 / 9配套用品一般應當囊括：配套用品一般應當囊括：（1 ）溫度調控范圍為 2 8和（或）-20 以下冰箱；（2）混勻器；（3）微量加樣器；（4）紫外消毒設備；）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭；）專用工

7、作服和工作鞋(套)；（7）專用辦公用品。2.標本制備區(qū)的功能：核酸（RNA、NA）提取、貯存及加樣。配套用品一般應當囊括：）2和（或）-20 以下冰箱；）高速離心機；（3）混勻器；（4）水浴箱或加熱模塊；（5）微量加樣器；）紫外消毒設備；）生物安全柜；（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）；（9 ）專用工作服和工作鞋(套)；（10）專用辦公用品；（11）NA，應當具有超聲波儀。PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 PAGE PAGE 5 / 95 / 9擴增區(qū)的功能：cNA 合成、NA 擴增及檢測。配套用品一般應當囊括：）核酸擴增儀；）微量加樣器；）紫外消毒設備；）消

8、耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心（帶濾芯）；）專用工作服和工作鞋；）專用辦公用品。擴增產物分析區(qū)的功能：擴增片段的進一步分析測定。方法不同而定，基本配置如下：）微量加樣器；）紫外消毒設備；）消耗品：一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭（帶濾芯）；）專用工作服和工作鞋；）專用辦公用品。設備的維持保養(yǎng)應當建立設備維持保養(yǎng)規(guī)程，計量設備應當定期檢定。例如核酸擴增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機應當每年進行檢定或校準工作。（三）現場檢查工作流程及注意事項進入各工作區(qū)域應當嚴格依照單一方向進行，即試劑儲存和準備區(qū)備區(qū)擴增區(qū)擴增產物分析區(qū)。各工作區(qū)域必需有明確的標記，不同工作區(qū)域內的設備、物

9、品不得混用。PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 PAGE PAGE 6 / 96 / 9不同工作區(qū)域的工作服應當加以區(qū)分，不得混用（色）。實驗室的清潔應當依照試劑貯存和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產物 分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應當有其各自的清潔用具并且防止交叉污 理。工作結束后，應當立即關于工作區(qū)進行清潔及消毒。貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備 區(qū)，不能經過擴增檢測區(qū)。應當關于加樣吸頭、PCR 污染。試劑盒中的陽性關于照品及質控品應當保存在標本處理區(qū)。試劑應當使用分子生物學級別試劑，使用的純化水應當高壓滅菌。質檢用于原輔料、半成 PCR反映試劑應當有相應的

10、質量標準及操作程序。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，應當蓋好含反映混合液的反映管。應當注意PCR 反映液加樣的順序，應當為空白樣本陰性關于照樣本性關于照。關于具有潛在傳染危險性的材料，應當在生物安全柜內開蓋，并且有明確的樣本處理和滅活程序。在擴增區(qū)打開。酰胺、甲醛或放射性核素等，應當注意實驗人員的安全防護。（四）現場檢查人員培訓情況PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 PAGE PAGE 7 / 97 / 9參與參與PCR 試驗的工作人員應當具備相應的專業(yè)知識和技能，囊括能熟練操作相關設備,明確整個工作的流程,掌握出現污染情況的處理方法以及實驗室質量控制方法和檢測結果的解釋。檢查人員可以經過詢問或要求人員實際操作關于其進行評判，也可以經過查閱人員培訓記錄，關于其進行評判。（五）現場檢查文件情況在檢查進程中應當特別注意現場察看、詢問、記錄的實際情況與生產企業(yè)的文件規(guī)則、記錄的契合性。PCRPCR試驗實驗室檢查要點指南 PAGE PAGE 8 / 98 / 9圖圖A和圖B所給出的PCR試驗實驗室設置圖是較為理想的設置模式，建議企業(yè)參照此種模式設計并且建立實驗