中醫(yī)藥管理局標書

1、附件3： 湖南省中醫(yī)藥科研計劃項目申請書上冊（任務(wù)務(wù)書） 課題名稱： 二二甲雙胍胍聯(lián)合滋滋腎活血血湯對22型糖尿尿病大鼠CRRP、TTNF-a的影影響的實實驗研究究 課題類別： 一般項項目 承擔單位： 湖湖南中醫(yī)醫(yī)藥大學學 課題負責人人： 顏國富富 聯(lián)系手機： 13660733066636 課題申請時時間： 220111.4.18 湖南省中中醫(yī)藥管管理局填寫說明一、請用AA4紙打打印，頁頁面不敷敷可另加加頁。二、所有欄欄目應(yīng)如如實填寫寫，確無無填寫內(nèi)內(nèi)容請?zhí)钐睢盁o”。三、課題研研究周期期一般設(shè)設(shè)計為二二年，最最長不超超過四年年。共同條款簽約各方應(yīng)應(yīng)共同遵遵守以下下條款：一、湖南省省中醫(yī)藥藥管理

2、局局為甲方方，課題題牽頭單單位為乙乙方，牽牽頭單位位所在市市州衛(wèi)生生行政部部門或省省部直單單位為丙丙方。二、任務(wù)執(zhí)執(zhí)行過程程中，乙乙丙方如如需變更更任務(wù)書書內(nèi)容，應(yīng)應(yīng)向甲方方提出書書面說明明，經(jīng)批批準后實實施。在在未接到到正式批批準前，乙乙丙方須須按原任任務(wù)書履履行，否否則，后后果由乙乙丙雙方方負責。三、本任務(wù)務(wù)書為下下達湖南南省中醫(yī)醫(yī)藥管理理局科技技計劃項項目使用用，甲丙丙方對課課題研究究有監(jiān)督督權(quán)、處處置權(quán)。乙乙方因主主、客觀觀原因不不能按任任務(wù)書約約定內(nèi)容容執(zhí)行時時，甲方方有權(quán)終終止任務(wù)務(wù)，乙方方應(yīng)償還還已投入入的全部部經(jīng)費。四、本任務(wù)務(wù)書由簽簽約方各各持一份份。一、基本情情況研究課題名

3、稱二甲雙胍聯(lián)聯(lián)合滋腎腎活血湯湯對2型糖尿尿病大鼠鼠CRPP、TNNF-aa的影響響的實驗研究究所屬學科生物與醫(yī)藥藥研究工作總總經(jīng)費3萬研究工作起起止年月月2011.620013.6預(yù)期成果本課題成果果預(yù)期達達到國內(nèi)內(nèi)領(lǐng)先水水平，尤尤其在糖糖尿病專專業(yè)領(lǐng)域域采用中中藥預(yù)防防與治療療糖尿病病血管并并發(fā)癥方方面起到到指導性性作用。課題組主要成員序號姓名身份證號職稱學歷所在單位工簽名1顏國富43060021996211124400116教授本科湖南中醫(yī)藥藥大學附附屬岳陽陽醫(yī)院全面負責指指導課題題全過程程的設(shè)計計實施2胡仙43018811998000810013882主治醫(yī)師碩士湖南中醫(yī)藥藥大學附附屬岳

4、陽陽醫(yī)院具體設(shè)計實實施方案案與資料料總結(jié)3李淑君43010031996900123315446教授碩士湖南中醫(yī)藥藥大學附附屬岳陽陽醫(yī)院具體設(shè)計實實施方案案與資料料總結(jié)4馮佩43062211998411025504669醫(yī)師碩士湖南中醫(yī)藥藥大學附附屬岳陽陽醫(yī)院實施設(shè)計方方案5承擔單位序號單位名稱地址及聯(lián)系系電話1湖南中醫(yī)藥藥大學附附屬岳陽陽醫(yī)院岳陽市楓橋橋湖路2269號號23二、研究目目標本研究基于于多年臨臨床經(jīng)驗驗和前期期大量基基礎(chǔ)研究究工作，旨旨在進一一步尋求求以中西西醫(yī)結(jié)合合為主，具具有良好好價效比比，適合合中國國國情的治治療和預(yù)預(yù)防糖尿尿病血管管病變的的有效方方藥。為為了進一一步探討討該

5、方的的作用機機制，特特設(shè)計此此實驗以以深入研研究，也也為其將將來的開開發(fā)提供供科學試試驗依據(jù)據(jù)。主要研究內(nèi)內(nèi)容和技技術(shù)方案案一研究內(nèi)內(nèi)容糖尿病血管管病變早早期階段段病理改改變的內(nèi)內(nèi)在機制制研究。2.中藥對對于糖尿尿病血管管病變的的預(yù)防和和治療作作用效果果評估。3.中藥對對于糖尿尿病血管管病變的的預(yù)防和和治療作作用的機機理研究究。4.中藥預(yù)預(yù)防和治治療糖尿尿病多系系統(tǒng)作用用途徑研研究。5.評價中中藥和化化學藥物物對于糖糖尿病血血管病變變的早期期預(yù)防和和治療的的效果差差異。6. 中西西醫(yī)結(jié)合合對于糖糖尿病血血管病變變的預(yù)防防和治療療作用效效果評估估。7.篩選預(yù)預(yù)防和治治療糖尿尿病血管管病變有有確切

6、作作用效果果的中藥藥二、技術(shù)方方案 、擬擬采取的的研究方方法、技技術(shù)路線線和實驗驗方案1. 實實驗對象象： 清清潔級近近交系雌雌性Wiisteer大鼠鼠42只，6月齡，重重約1550g-200 gg，由湖湖南省中中醫(yī)藥大大學動物物實驗中心心提供。2. 實實驗材料料飼料及及飼養(yǎng)環(huán)環(huán)境： 空空白對照照組常規(guī)規(guī)飲食，造造模組喂喂給高糖糖高脂高高膽固醇醇飼料。此此飼料由由本院實實驗動物物中心自自配，其其中含110%蔗蔗糖，110%豬豬油，22.5%膽固醇醇。每籠籠10只只，自由由攝食、飲飲水。室室溫188-222C，空空氣流通通，相對對濕度555-770%，112小時時光照維維持，晝晝夜循環(huán)環(huán)。 藥藥

7、品及試試劑： 滋滋腎活血血湯為湖南省省中醫(yī)藥藥大學附附屬岳陽陽醫(yī)院中中藥房一一次性購購買。 二二甲雙胍胍：北京嘉嘉德制藥藥有限公公司生產(chǎn)產(chǎn)。 實驗驗試劑NO試劑盒碧云天生物技術(shù)研究所INS放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所TNF-放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所ET放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所SABC免疫組化試劑盒博士德生物工程有限公司濃縮型DAB顯色試劑盒博士德生物工程有限公司 主主要儀器器：BIOMIIAS圖圖像分析析系統(tǒng)： 湖湖南中醫(yī)醫(yī)藥大學學基礎(chǔ)研研究院 日日本尼泰泰克ACCE9119型全全自動生生化分析析儀。 法法國S-5000P半自自動生化化分析儀儀。 光光鏡:OOLYMMPUS

8、S BXX50 日本產(chǎn)產(chǎn) 電電鏡:日日本JEEM-110100（HCC）1000KVV高襯度度透射電電子顯微微鏡3. 實實驗方法法： 造造模方法法：造模模組高糖糖高脂高高膽固醇醇飼料喂喂養(yǎng)2個個月后，禁禁食122小時，斷斷尾取血血，血糖糖值為116.77mmool/ll-255mmool/ll者入選選。造模模成功后后，各組組恢復常常規(guī)飲食食。分組方法：動物購購回，適適應(yīng)性喂喂養(yǎng)一周周后，隨隨機分成成空白對對照組、模型對照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組（n=6），除空白對照組外，其他動物均用于造模。造模后，選擇符合模型標準的大鼠分別隨機分組如下：模型對照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二

9、甲雙胍組，各組數(shù)量保持相等，每組均為6只。給藥方法：從造模模成功后后的第一一天開始始給藥，療療程為88周。灌灌胃情況況如下： eq oac(,1)中中藥組：每日灌灌胃量相相當于臨臨床成人人用藥量量的100倍，即即6mll/kgg，每日日1次，共共8周； eq oac(,2)二二甲雙胍胍組：每每日灌胃胃量相當當于臨床床成人用用藥量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日1次次，共88周； eq oac(,3)中中藥+二二甲雙胍胍組：每每日灌胃胃量相當當于臨床床成人用用藥量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日2次次，共88周； eq oac(,4)模模型對照照組：每每日灌胃胃量相當當于臨床床成人用

10、用藥量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日1次次，共88周； eq oac(,5)空空白對照照組：每每日灌相相當于臨臨床成人人用藥量量的100倍的生生理鹽水水，即66ml/kg，每每日1次次，共88周；測試指標及及取材 動動物給藥藥8周后，處處死前112h禁禁食，股股動脈取取血約445mml，其其中1.5mll于EDDTA+抑肽酶酶的抗凝凝試管內(nèi)內(nèi)，用做做ET的的檢測。余余血放置置于試管管內(nèi)，離離心取血血清，備備做NOO、INNS、TTNF-、TTG、BBUN、CCREAA、UAA的檢測測。立即即取胰腺腺、肝臟臟、腎臟臟病理切切片：HHE 染染色；股股動脈、腹腹主動脈脈病理切切片：MMASS

11、SON 染色4.統(tǒng)計方方法： 所所有數(shù)據(jù)據(jù)均采用用SPSSS統(tǒng)計計軟件進進行統(tǒng)計計分析。計計量資料料以均數(shù)數(shù)標準準差（S）表表示。兩兩樣本均均數(shù)比較較采用成成組t檢檢驗（OOne- Saamplle TT Teest），多多樣本均均數(shù)的兩兩兩比較較采用單單因素方方差分析析（onne-wway ANOOVA）。以以P00.055作為有有顯著性性差異。5.技術(shù)路路線：（附附圖于后后） 實實驗開始始前，隨隨機抽取取6只大鼠鼠作為空空白組對對照組，并并立即斷斷頭處死死，取血血標本測測定生化化指標。然然后迅速速剝離取取出雙側(cè)側(cè)髂股動動脈、腹腹主動脈脈、胰腺腺、腎臟臟用生理理鹽水沖沖洗，110%福福爾馬林

12、林原位固固定244h，常常規(guī)制片片，動脈脈用MAASSOON染色色，內(nèi)臟臟用HEE染色，做做光鏡、電電鏡檢查查。造模模成功后后，選取取成模大大鼠，隨隨機分成成模型對對照組、中中藥組、二甲甲雙胍組組、中藥藥+二甲甲雙胍組組。除模模型對照照組外，余余組均給給藥。治治療8周周后，將將全部大大鼠處死死，收集集上述生生化、放放免及病病理切片片等各項項指標。各各組為66只算入入統(tǒng)計，認認真詳細細記錄所所有數(shù)據(jù)據(jù)。技術(shù)路線附附圖如下下：取血生化指標：取血生化指標：FPG、TG、HDL、TC。取6取6只斷頭處死 作為空白對照組購入清潔級Wistar大鼠40只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。取肝、胰、腎、股動脈、腹主動脈做病

13、理切片，準備光鏡和電鏡檢查。取肝、胰、腎、股動脈、腹主動脈做病理切片，準備光鏡和電鏡檢查。34只大鼠喂高糖高脂高膽固醇飼料（34只大鼠喂高糖高脂高膽固醇飼料（10%蔗糖，10%豬油，2.5%膽固醇），共8周。8周后取6只大鼠做上述指標模型對照組模型對照組用藥用藥8周后各組分別處死，測所有指標。中藥組中藥組二甲雙胍組二甲雙胍組中藥中藥+二甲雙胍組組C3統(tǒng)計指標，評估標本，發(fā)表論文，實驗結(jié)束。統(tǒng)計指標，評估標本，發(fā)表論文，實驗結(jié)束。四、實施計計劃和考考核指標標工作起止年年月研究內(nèi)容考核指標經(jīng)費預(yù)算（萬萬元）2012年年1月-20112年33月 檢索資料，開開題2012年年4月-20112年66月購

14、買大鼠、聯(lián)聯(lián)系實驗驗室，準準備預(yù)試試驗2012年年7月-20112年99 月 統(tǒng)計數(shù)據(jù)，初初評實驗驗2012年年10月月-20012年年12 月 正式實驗2013年年1月-20113年33 月 掃尾工作，形形態(tài)學觀觀察。2013年年4月-20113年66 月相關(guān)指標檢檢測2013年年7月-20113年99月數(shù)據(jù)收集，匯匯總分析析2013年年10月月-20013年年12月月統(tǒng)計數(shù)據(jù)，總總結(jié)課題題，發(fā)表表文章，申申請成果果鑒定。其他說明注：時間安安排以33個月為為單位填填寫。五、經(jīng)費預(yù)預(yù)算分類類細目科目細目規(guī)格數(shù)量單價經(jīng)費預(yù)算（元元）備注實驗材料費費試劑藥品、動動物采購購、耗材材Wistaar大鼠

15、鼠預(yù)實驗100只+正正式實驗驗40只只350.9萬小型專用儀儀器設(shè)備備費實驗觀察和和資料收收集儀器器購買費費用0.4萬業(yè)務(wù)費資料查新和和收集0.1萬協(xié)作費科研協(xié)作費費、設(shè)備備租賃使使用費0.4萬差旅費管理費參加會議和和科研協(xié)協(xié)作，管理和協(xié)調(diào)調(diào)0.2萬經(jīng)費合計2萬六、簽約一、甲方：湖南省省中醫(yī)藥藥管理局局同意將本課課題列為為湖南省省中醫(yī)藥藥科研計計劃項目目。課題資助金金額： 萬萬元課題編號： 科技主管： 湖南南省中醫(yī)醫(yī)藥管理理局（蓋蓋章） 年 月 日二、乙方：課題牽牽頭單位位匹配研究經(jīng)經(jīng)費： 萬元課題組第一一負責人人：財務(wù)負責人人：開戶名、行行及帳號號：同意按任務(wù)務(wù)書約定定內(nèi)容執(zhí)執(zhí)行?？萍贾鞴埽?/p>

16、 單位位（蓋章章） 年 月 日其他單位科科技主管管：單位（蓋章章）其他單位科科技主管管： 單位位（蓋章章）三、丙方：課題牽牽頭單位位所在市市州衛(wèi)生生行政部部門（或或省部直直單位等等）同意按要求求進行日日常管理理。 科技主管： 單單位（蓋蓋章） 年年 月月 日日注：請在詳詳細了解解共同條條款之后后簽署。湖南省中醫(yī)醫(yī)藥科研研計劃項項目申請請書下冊課題名稱： 二甲甲雙胍聯(lián)聯(lián)合滋腎腎活血湯湯對2型糖尿尿病大鼠CRRP、TTNF-a的影影響的實實驗研究究 申請時間： 20111-44-222 湖南省中醫(yī)醫(yī)藥管理理局一、研究本本課題的的科學依依據(jù)（包包括本領(lǐng)領(lǐng)域研究究現(xiàn)狀、水水平、發(fā)發(fā)展趨勢勢、存在在問題

17、、本本課題特特色、創(chuàng)創(chuàng)新之處處等）隨著人們生生活水平平的提高高和生活活方式的的改變，糖糖尿病患患病率逐逐年增加加。根據(jù)據(jù)國際糖糖尿病聯(lián)聯(lián)盟(IInteernaatioonall DiiabeetessFedderaatioon IIDF)統(tǒng)計，目目前全球球有糖尿尿病患者者233億，預(yù)預(yù)計到220255年全球球?qū)⒂?380億人人罹患糖糖尿病。糖糖尿病可可導致多多種大血血管及微微血管病病變，其其中心血血管疾病病、腦血血管疾病病以及糖糖尿病腎腎病為糖糖尿病患患者的主主要死亡亡原因。近近年來，糖糖尿病與與炎癥的的關(guān)系備備受關(guān)注注，有學學者提出出，糖尿尿病是一一種炎癥癥性疾病病，諸多多炎癥因因子與糖糖尿

18、病及及糖尿病病并發(fā)癥癥發(fā)生與與發(fā)展密密切相關(guān)關(guān)。糖尿尿病患者者在血糖糖升高的的同時，體體內(nèi)炎癥癥因子如如C一反應(yīng)應(yīng)蛋白(CRPP)、腫腫瘤壞死死因子-a(TTNFa)、白白細胞介介素6(IL一一6)等也也明顯升升高。近年研究表表明，胰胰島素抵抵抗、肥肥胖、高高血壓患患者血清清炎癥因因子包括括C一反應(yīng)應(yīng)蛋白(CRPP)、腫瘤瘤壞死因因子一aa(TNNF-a)、白白細胞介介素一66(ILL一6)、血血漿纖溶溶酶原激激活物抑抑制因子子一l(PAJJ一1)等升升高。炎炎癥反應(yīng)應(yīng)與糖尿尿病的發(fā)發(fā)生發(fā)展展以及血血管并發(fā)發(fā)癥的關(guān)關(guān)系受到到關(guān)注，目目前認為為2型糖尿尿病可能能是細胞胞因子介介導的炎炎癥反應(yīng)應(yīng)，

19、是一一種免疫疫性疾病病，炎癥癥在糖尿尿病的發(fā)發(fā)病機制制中起媒媒介作用用【1】。因因此，在在控制糖糖尿病患患者血糖糖的同時時，應(yīng)該該設(shè)法減減輕患者者體內(nèi)的的慢性炎炎癥反應(yīng)應(yīng)，尤其其需要降降低循環(huán)環(huán)中CRRP等代代表機體體炎癥反反應(yīng)的指指標，以以改變糖糖尿病及及其慢性性血管并并發(fā)癥的的進程，延延緩動脈脈粥樣硬硬化的發(fā)發(fā)生與發(fā)發(fā)展。CRP是由由肝臟產(chǎn)產(chǎn)生的一一種急性性期反應(yīng)應(yīng)蛋白。在在正常人人體含量量甚微，急性炎炎癥階段段可迅速速升高，是臨床床上最有有效的炎炎癥標志志物。近年來來多項研研究結(jié)果果提示，體內(nèi)CRRP水平平升高可可能參與與了IRR和胰島島細胞的的損害。CRPP主要受受血循環(huán)環(huán)IL-6、T

20、TNF-調(diào)節(jié)節(jié)，尤其ILL-6是是促進肝肝臟合成成CRPP的主要要炎癥因因子,反過來來CRPP也可以以刺激單單核細胞胞釋放IIL-66、IL-1、TTNF-介導導內(nèi)皮細細胞產(chǎn)生生單核細細胞趨化化蛋白-1和內(nèi)內(nèi)皮細胞胞黏附分分子等,發(fā)揮致致炎作用用。TNF-是一種種主要由由單核EE巨噬細細胞產(chǎn)生生的具有有廣泛生生物活性性的細胞胞因子，可誘導導IL-6、IL-1、CCRP的的合成。TTNF-通過過多種途途徑導致致糖尿病病的發(fā)生生：（11）直接接作用于于胰島細胞，生成環(huán)環(huán)磷酸鳥鳥苷，損傷細細胞DNNA；（22）與其其他細胞胞因子協(xié)協(xié)同作用用，誘導NOO的形成成,并抑制制葡萄糖糖誘導的的胰島素素分泌；

21、（3）抑制胰島素受體和胰島素受體底物1（IRS-1）的酪氨酸殘基磷酸化,影響胰島素信號傳導；（4）抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運因子4（GLUT4）基因轉(zhuǎn)錄,并使GLUT4mRNA降解加速；（5）激活I(lǐng)KK進而促進TNF-轉(zhuǎn)錄，形成低度炎癥的正反饋環(huán)，加重IR；（6）抑制其他脂肪細胞因子如脂聯(lián)素的合成及增加游離脂肪酸的釋放等。近年來炎癥癥學說備備受關(guān)注注，認為為糖尿病病是一種種自然免免疫和低低度炎癥癥性疾病病，炎癥癥在2型糖尿尿病的發(fā)發(fā)病機制制中起媒媒介作用用。炎癥癥反應(yīng)程程度的高高低和22型糖尿尿病中糖糖、脂代代謝紊亂亂以及后后期各種種并發(fā)癥癥的出現(xiàn)現(xiàn)關(guān)系密密切。炎炎癥學說說的提出出為糖尿尿病的發(fā)發(fā)病機制制

22、、探討討防治的的新方法法和開發(fā)發(fā)新藥物物提供了了一個新新的研究究方向。英國前瞻性糖尿病研究證實，二甲雙胍是唯一能減少糖尿病大血管并發(fā)癥的口服降糖藥。二甲雙胍抗炎機制可能與下列作用有關(guān)：抑制炎癥因子的形成：降低血漿纖溶酶原激活物抑制物一1、CRP的水平，減少氧化應(yīng)激，改善內(nèi)皮功能，從而延緩動脈粥樣硬化的進程。研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍能夠抑制核因子活性，進而抑制炎癥因子的形成。DM屬中醫(yī)醫(yī)學“消消渴”范范疇。其其發(fā)生多多由以下下病因：先天天稟賦不不足。靈靈樞五五變說說“五臟臟皆柔弱弱者，善善病消癉癉?！遍L期過過食肥甘甘、醇酒酒厚味等等損傷脾脾胃，釀釀生內(nèi)熱熱，消食食耗液而而發(fā)。素素問奇奇病論說說：“此此

23、肥美之之所發(fā)也也，此人人必數(shù)食食甘美而而多肥，甘甘者令人人中滿，故故其氣上上溢，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)為消渴渴?！遍L期過過度精神神刺激，肝肝氣郁結(jié)結(jié)，郁而而化火；或勞心心竭慮，營營謀強思思等，以以致郁久久化火，火火熱內(nèi)燔燔，消灼灼陰津而而發(fā)。正正如臨臨證指南南醫(yī)案三消說說：“心心境愁郁郁，內(nèi)火火白燃，乃乃消癥大大病?！狈渴虏徊还?jié)，勞勞欲過度度，腎精精虧虛，虛虛火內(nèi)生生，則“火火因水竭竭而益烈烈，水因因火烈而而益干”，終終致腎虛虛肺燥胃胃熱，發(fā)發(fā)為消渴渴。歷代代認為，陰陰津虧損損，燥熱熱偏勝，即即陰虛為為本，燥燥熱為標標是消渴渴的主要要病機。但但由于燥燥熱傷津津耗氣，因因此，消消渴的病病機不唯唯是陰虛虛，病程程日

24、久，也也可導致致氣陰兩兩虛【22】。正正如明代代證治治要訣三消日日：“三三消得之之，氣之之實，血血之虛也也，久久久不治，氣氣盡虛”。在在近年的的消渴證證型研究究中也發(fā)發(fā)現(xiàn)，氣氣陰兩虛虛是臨床床最常見見的證型型【3-6】。多多數(shù)文獻獻認為，DM在病程初期、年齡較輕時，以陰虛為主；隨著年齡增大，病程延長，病情發(fā)展，其病機則由陰虛轉(zhuǎn)向氣陰兩虛以致陰陽兩虛，氣陰兩虛是病機轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵。2002舨中藥新藥臨床研究指導原則(試行)將DM分為陰虛熱盛、濕熱困脾、氣陰兩虛、陰陽兩虛血瘀水停和血瘀脈絡(luò)五型【7】。中國中西醫(yī)結(jié)合學會糖尿病專業(yè)委員會制定的中西醫(yī)結(jié)合糖尿病診療標準(草案)中將DM分為陰虛熱盛、氣陰兩虛

25、及陰陽兩虛三型【8】。可見，氣陰兩虛是消渴的主要病機。近年DM的瘀血病機倍受關(guān)注，并日益受到重視，認為瘀血為貫穿DM病程始終的重要病機。DM及其并發(fā)癥患者，多表現(xiàn)為舌質(zhì)紫暗，或有瘀斑，或舌下靜脈曲張，或心胸憋悶、刺痛，或肢體疼痛，或眼底出血及血管瘤，屬于中醫(yī)瘀血證。近來，許多學者從血液流變學、甲皺微循環(huán)、血小板粘附聚集及纖溶系統(tǒng)等方面證明DM患者確有瘀血存在，并認為瘀血是形成DM血管和神經(jīng)并發(fā)癥的重要因素【9】。綜合起來，氣陰兩虛，燥熱津傷，瘀血阻滯為消渴的主要病機，因此益氣養(yǎng)陰、清熱生滓、活血化瘀，為治療消渴的基本治法。滋腎活血湯湯以六味味地黃湯湯為基礎(chǔ)礎(chǔ)方，肝肝、脾、腎腎三陰并并補，重重補

26、腎陰陰，其中中熟地滋滋腎陰、益益精髓，山山藥滋脾脾補腎，山山茱萸滋滋養(yǎng)肝腎腎，工程程三陰并并補之功功；茯苓苓、澤瀉瀉健脾利利水消腫腫；丹皮皮活血化化瘀清虛虛熱；黃黃芪、丹丹參益氣氣活血。本研究從低低度炎癥癥的病因因角度探探討中西西結(jié)合防防治T22DM及及血管病病變的作作用機理理，屬于于一種全全新的探探索和嘗嘗試。參考文獻：1.阮丹杰杰，王偉偉炎性性因子與與胰島素素抵抗的的研究進進展JJ醫(yī)醫(yī)學綜述述，20009，15(4)：508851 l。2.張發(fā)榮榮主編中西醫(yī)醫(yī)結(jié)合糖糖尿病治治療學【M】北京：中國中醫(yī)藥出版社，1998年(第一版)：3.陳澤奇奇，劉英英哲，陳陳大舜，等等14490例例2型糖尿

27、尿病臨床床辨證分分型調(diào)查查分析ll耳湖南南中醫(yī)學學院學報報，20004，24(5)：33364.張萍，諶諶劍飛糖尿病病中醫(yī)證證型的分分布及動動態(tài)資料料對比分分析JJ遼遼寧中醫(yī)醫(yī)學院學學報，119999， 1(4)： 221721885.于青云云，張德德憲，楊楊浚憲，等等糖尿尿病證群群調(diào)查及及證型研研究JJ】山山東中醫(yī)醫(yī)藥大學學學報，2001，25(3)：1851886.劉曉華華，于春春光不不同中醫(yī)醫(yī)證型辨辨治糖尿尿病研究究述評【J】中醫(yī)藥信息，2003，20(4)：19207.鄭筱萸萸主編中藥新新藥臨床床研究指指導原則則(試行)【M】北北京：中中國醫(yī)藥藥科技出出版社，2002年(第一版)：11

28、08.中國中中西醫(yī)結(jié)結(jié)合學會會糖尿病病專業(yè)委委員會中西醫(yī)醫(yī)結(jié)合糖糖尿病診診療標準準(草案)J】中國中中西醫(yī)結(jié)結(jié)合雜志志，20005，25(1)：94959.戴萬亨亨主編中西醫(yī)醫(yī)臨床內(nèi)內(nèi)科學【M】北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2003年(第一版)：656二、研究內(nèi)內(nèi)容（包包括研究究的具體體方案、內(nèi)內(nèi)容、方方法等）研究內(nèi)容1.糖尿病血管病變早期階段病理改變的內(nèi)在機制研究。2.中藥對于糖尿病血管病變的預(yù)防和治療作用效果評估。中藥對于糖尿病血管病變的預(yù)防和治療作用的機理研究。4.中藥預(yù)防和治療糖尿病多系統(tǒng)作用途徑研究。5.評價中藥和化學藥物對于糖尿病血管病變的早期預(yù)防和治療的效果差異。6. 中西醫(yī)結(jié)合對于

29、糖尿病血管病變的預(yù)防和治療作用效果評估。7.篩選預(yù)防和治療糖尿病血管病變有確切作用效果的中藥二、技術(shù)方案、擬采取的研究方法、技術(shù)路線和實驗方案1. 實驗對象： 清潔級近交系雌性Wister大鼠42只，6月齡，重約150g-200 g，由湖南省中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。2. 實驗材料飼料及飼養(yǎng)環(huán)境： 空白對照組常規(guī)飲食，造模組喂給高糖高脂高膽固醇飼料。此飼料由本院實驗動物中心自配，其中含10%蔗糖，10%豬油，2.5%膽固醇。每籠10只，自由攝食、飲水。室溫18-22C，空氣流通，相對濕度55-70%，12小時光照維持，晝夜循環(huán)。 藥品及試劑： 滋腎活血湯為湖南省中醫(yī)藥大學附屬岳陽醫(yī)院中藥房一

30、次性購買。 二甲雙胍：北京嘉德制藥有限公司生產(chǎn)。 實驗試劑NO試劑盒碧云天生物技術(shù)研究所INS放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所TNF-放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所ET放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所SABC免疫組化試劑盒博士德生物工程有限公司濃縮型DAB顯色試劑盒博士德生物工程有限公司 主要儀器：BIOMIAS圖像分析系統(tǒng)： 湖南中醫(yī)藥大學基礎(chǔ)研究院 日本尼泰克ACE919型全自動生化分析儀。 法國S-500P半自動生化分析儀。 光鏡:OLYMPUS BX50 日本產(chǎn) 電鏡:日本JEM-1010（HC）100KV高襯度透射電子顯微鏡3. 實驗方法： 造模方法：造模組高糖高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)

31、2個月后，禁食12小時，斷尾取血，血糖值為16.7mmol/l-25mmol/l者入選。造模成功后，各組恢復常規(guī)飲食。分組方法：動物購回，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機分成空白對照組、模型對照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組（n=6），除空白對照組外，其他動物均用于造模。造模后，選擇符合模型標準的大鼠分別隨機分組如下：模型對照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組，各組數(shù)量保持相等，每組均為6只。給藥方法：從造模成功后的第一天開始給藥，療程為8周。灌胃情況如下： eq oac(,1)中藥組：每日灌胃量相當于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,2)二甲雙

32、胍組：每日灌胃量相當于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,3)中藥+二甲雙胍組：每日灌胃量相當于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日2次，共8周； eq oac(,4)模型對照組：每日灌胃量相當于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,5)空白對照組：每日灌相當于臨床成人用藥量的10倍的生理鹽水，即6ml/kg，每日1次，共8周；測試指標及取材 動物給藥8周后，處死前12h禁食，股動脈取血約45ml，其中1.5ml于EDTA+抑肽酶的抗凝試管內(nèi)，用做ET的檢測。余血放置于試管內(nèi)，離心取血清，備做NO、INS、T

33、NF-、TG、BUN、CREA、UA的檢測。立即取胰腺、肝臟、腎臟病理切片：HE 染色；股動脈、腹主動脈病理切片：MASSON 染色4.統(tǒng)計方法： 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)標準差（S）表示。兩樣本均數(shù)比較采用成組t檢驗（One- Sample T Test），多樣本均數(shù)的兩兩比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。以P0.05作為有顯著性差異。5.技術(shù)路線：（附圖于后） 實驗開始前，隨機抽取6只大鼠作為空白組對照組，并立即斷頭處死，取血標本測定生化指標。然后迅速剝離取出雙側(cè)髂股動脈、腹主動脈、胰腺、腎臟用生理鹽水沖洗，10%福爾馬林原位固定24h

34、，常規(guī)制片，動脈用MASSON染色，內(nèi)臟用HE染色，做光鏡、電鏡檢查。造模成功后，選取成模大鼠，隨機分成模型對照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組。除模型對照組外，余組均給藥。治療8周后，將全部大鼠處死，收集上述生化、放免及病理切片等各項指標。各組為6只算入統(tǒng)計，認真詳細記錄所有數(shù)據(jù)。技術(shù)路線附圖如下： 取血生化指標：FPG、取血生化指標：FPG、TG、HDL、TC。取6只斷頭處死 作為空白對照組購入清潔級Wistar大鼠40只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。取肝、胰、腎、股動脈、腹主動脈做病理切片，準備光鏡和電鏡檢查。取肝、胰、腎、股動脈、腹主動脈做病理切片，準備光鏡和電鏡檢查。8周后取8周后取6只

35、大鼠做上述指標34只大鼠喂高糖高脂高膽固醇飼料（10%蔗糖，10%豬油，2.5%膽固醇），共8周。模型對照組模型對照組用藥8周后各組分別處死，測所有指標。用藥8周后各組分別處死，測所有指標。中藥組二甲雙胍組二甲雙胍組中藥中藥+二甲雙胍組組C3統(tǒng)計指標，評估標本，發(fā)表論文，實驗結(jié)束。統(tǒng)計指標，評估標本，發(fā)表論文，實驗結(jié)束。三、研究目目的與意意義（包括研究究目標、預(yù)預(yù)期成果果及水平平、社會會經(jīng)濟效效益及推推廣前景景）本研究基于于多年臨臨床經(jīng)驗驗和前期期大量基基礎(chǔ)研究究工作，旨旨在進一一步尋求求以中醫(yī)醫(yī)藥為主主，具有有良好價價效比，適適合中國國國情的的治療和和預(yù)防糖糖尿病血血管病變變的有效效方藥。為為了進一一步探討討該方的的作用機機制，特特設(shè)計此此實驗以以深入研研究，也也為其將將來的開開發(fā)提供供科學試試驗依據(jù)據(jù)。成果預(yù)期水水平：本課題成果果預(yù)期達達到國內(nèi)內(nèi)領(lǐng)先水水平，尤尤其在糖糖