貞清膠囊對1型糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變改善作用的初步研究

1、貞清膠囊對1型糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變改善作用的初步研究【摘要】目的：觀察貞清膠囊對1型糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的影響，并初步討論其作用機(jī)制。方法：40只雄性istar大鼠，大劑量鏈脲佐菌素尾靜脈注射造成1型糖尿病動物模型。成模大鼠隨機(jī)分成3組：模型組、氨基胍組及貞清膠囊組，另設(shè)正常對照組。治療10周后，觀察治療前后體質(zhì)量和血糖變化以及治療后血清丙二醛alndialdehyde,DA和神經(jīng)電生理變化，并留取坐骨神經(jīng)標(biāo)本做形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果：貞清膠囊能顯著降低1型糖尿病大鼠血清DA程度P0.01；與模型組比擬，貞清膠囊組的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯加快P0.05，埋伏期縮短P0.01，波幅增加P0.05；貞

2、清膠囊治療后坐骨神經(jīng)髓鞘染色表現(xiàn)為局部神經(jīng)纖維節(jié)段性脫髓鞘，與模型組的大局部神經(jīng)纖維脫髓鞘相比有改善。結(jié)論：貞清膠囊能明顯改善糖尿病大鼠的神經(jīng)電生理功能，改善周圍神經(jīng)的病理變化，其機(jī)制有可能是通過去除自由基，抗脂質(zhì)過氧化作用來實現(xiàn)。【關(guān)鍵詞】貞清膠囊;糖尿病,1型;糖尿病神經(jīng)病變;丙二醛;大鼠bjetive:TinvestigatetheeffetsfZhenqingapsule(ZQ),apundtraditinalhineseherbalediine,intreatingtype1diabetiratsithperipheralneurpathy.nlusin:ZQanbviuslyael

3、iratetheneurlgialeletrphysilgialfuntinandthepathlgialhangesfperipheralnerveintype1diabetiratsthrughtherevalffreeradialandresistaneflipidperxidatin.Keyrds:Zhenqingapsule;diabetesellitus,type1;diabetineurpathies;alndialdehyde;rats糖尿病外周神經(jīng)病變是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一。在糖尿病早期，外周神經(jīng)的功能已受到損害，以電生理異常為主要表現(xiàn)，尤其是感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度的下降，

4、是較敏感的指標(biāo)1，2。我們在長期理論中發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方貞清方能改善2型糖尿病病人糖脂代謝狀況并且對糖尿病腎病有一定的防治作用3，4。本實驗通過建立1型糖尿病大鼠模型，觀察了貞清膠囊(Zhenqingapsule,ZQ)對糖尿病大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)以及坐骨神經(jīng)電生理和形態(tài)學(xué)變化的影響，為認(rèn)識該藥對糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的改善作用及其機(jī)制提供根據(jù)。1材料和方法1.1實驗材料1.1.1實驗試劑鏈脲佐菌素streptztin為美國Siga公司產(chǎn)品，純度大于98%，購自武漢亞法生物技術(shù)；丙二醛alndialdehyde,DA試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；葡萄糖氧化酶試劑盒為上海科欣生物技術(shù)研究所產(chǎn)品；鹽

5、酸氨基胍購自ayanheial公司。1.1.4實驗藥物制備復(fù)方ZQ由女貞子、地龍和山藥等中藥組成，其飲片購自武漢銀杏中藥飲片廠。制劑工藝：女貞子采用醇提，地龍采用水提，提取液濃縮至稠膏狀，減壓枯燥得粉。山藥適量，洗凈烤干粉碎過篩得粉，作為輔料與上述各提取藥粉混勻，制粒，枯燥，整粒，裝膠囊。所得膠囊經(jīng)質(zhì)量檢測符合相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。實驗時用水溶解，水溶液相當(dāng)于含生藥3g/l，4保存。鹽酸氨基胍于臨用前用蒸餾水配成10%的水溶液。1.2實驗方法1.2.1實驗動物模型的建立用0.05l/L枸櫞酸鈉緩沖液pH4.5配成2%鏈脲佐菌素溶液，雄性istar大鼠按65g/kg劑量一次性尾靜脈注射建立糖尿病模型，7

6、2h后斷尾采血測空腹血糖fastingplasagluse,FPG，F(xiàn)PG16.7l/L那么視為1型糖尿病造模成功。將造模成功大鼠隨機(jī)分成3組：模型組、氨基胍組和ZQ組，每組10只。另取鼠齡、體質(zhì)量相匹配的大鼠10只，尾靜脈僅注射枸櫞酸鈉緩沖液，作為正常對照組。ZQ組按成人60kg體質(zhì)量劑量的25倍給予ZQ藥液26g/kgd灌胃。氨基胍組給予鹽酸氨基胍50g/kgd灌胃。模型組及正常對照組給予蒸餾水灌胃。各組均于每天上午810時灌胃一次，連續(xù)治療10周。治療期間，動物分籠喂養(yǎng)，給予根底飼料，自由飲水，每周測體質(zhì)量。1.2.2血糖及血清DA的測定10周后禁食12h斷尾取血，取血約1.5l。別離血

7、清，用于檢測血糖酶法和DA詳細(xì)方法參照DA試劑盒說明書。1.2.4坐骨神經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察處死大鼠后迅速游離出左側(cè)坐骨神經(jīng)，剪取約5，用10%中性福爾馬林固定，1%鋨酸染色，蠟塊包埋，切片，光鏡下觀察坐骨神經(jīng)的病理變化。1.3統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)展統(tǒng)計分析，結(jié)果以xs表示，多組之間均數(shù)比擬采用單因素方差分析，兩組之間比擬采用q檢驗。2結(jié)果2.1造模動物的一般情況及各組大鼠治療前后體質(zhì)量和空腹血糖實驗過程中正常對照組有1只因患中耳炎剔除，其他組各有2只死亡。與正常對照組相比，模型組、氨基胍組和ZQ組大鼠體質(zhì)量顯著降低P0.01，而空腹血糖那么顯著升高P0.01，ZQ組大鼠體質(zhì)量較模型

8、組增加P0.05，空腹血糖那么未明顯降低P0.05。見表1。表1各組大鼠治療前后體質(zhì)量及空腹血糖略Table1Bdyeightandfastingbldsugarlevelindifferentgrupsbefreandaftertreatent*P0.01,vsnralntrlgrup;P0.05,vsuntreatedgrup.2.2大鼠血清DA的含量治療后各組DA程度均高于正常對照組P0.01，與模型組比擬，ZQ組與氨基胍組治療后DA程度明顯降低P0.01。見表2。2.3大鼠坐骨神經(jīng)的神經(jīng)電生理檢測指標(biāo)與模型組比擬，ZQ治療后坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯加快P0.05，波幅增加P0.05，埋伏期

9、縮短P0.01。見表3。2.4大鼠坐骨神經(jīng)組織病理形態(tài)學(xué)400倍光鏡下髓鞘染色見正常對照組大局部神經(jīng)纖維髓鞘構(gòu)造完好，糖尿病模型組大局部神經(jīng)纖維脫髓鞘，氨基胍組局部神經(jīng)節(jié)段性脫髓鞘，ZQ組局部神經(jīng)節(jié)段性脫髓鞘。見圖1。表2各組大鼠血清DA含量略Table2SeruDAlevelindifferentgrups*P0.01,vsnralntrlgrup;P0.01,vsuntreatedgrup.表3各組大鼠坐骨神經(jīng)電生理指標(biāo)略Table3Eletrphysilgyindexinsiatinerveindifferentgrups*P0.05,*P0.01,vsnralntrlgrup;P0.0

10、5,P0.01,vsuntreatedgrup.圖1大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)學(xué)特征髓鞘染色，400略Figure1rphlgyharateristisfsiatinerveinrats(yelinstaining,400)3討論目前公認(rèn)鏈脲佐菌素能選擇性破壞大鼠胰島細(xì)胞，可用于建立以高血糖、多飲、多食、多尿和體質(zhì)量減輕為特征的糖尿病大鼠動物模型。本次實驗采用大劑量鏈脲佐菌素注射，制備了1型糖尿病模型。糖尿病外周神經(jīng)病變是糖尿病的主要并發(fā)癥，臨床發(fā)病率較高，國內(nèi)流行病學(xué)調(diào)查顯示周圍神經(jīng)病變占所有并發(fā)癥的16.44%5。1型糖尿病和2型糖尿病均可并發(fā)外周神經(jīng)損害，有報道指出74.8%的2型糖尿病患者會并發(fā)

11、神經(jīng)病變6，并且隨著年齡和病程的進(jìn)展而更容易出現(xiàn)。1型糖尿病由于發(fā)病更早、血糖程度更高，所以其神經(jīng)病變表現(xiàn)會更嚴(yán)重。Kaiya等7研究也指出自發(fā)性1型糖尿病BB/r大鼠神經(jīng)病變的構(gòu)造、功能和分子構(gòu)造變化都比2型糖尿病BB/r大鼠進(jìn)展更快。糖尿病外周神經(jīng)病變一般表現(xiàn)為髓鞘的板層剝離、髓鞘剝脫、軸突萎縮和神經(jīng)纖維腫脹變形。本實驗中1型糖尿病大鼠的神經(jīng)纖維病理主要表現(xiàn)為神經(jīng)纖維脫髓鞘。ZQ治療后表現(xiàn)為局部神經(jīng)纖維節(jié)段性脫髓鞘，較之模型組髓鞘完好。神經(jīng)電生理檢測發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，ZQ治療組坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度加快，埋伏期縮短且波幅增加，ZQ可改善神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)，使參與神經(jīng)傳導(dǎo)的神經(jīng)纖維數(shù)目和這些神經(jīng)纖維同步活動的程度增加。氧化應(yīng)激學(xué)說是最近備受關(guān)注的有關(guān)糖尿病周圍神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制之一。過多的糖基化終產(chǎn)物的形成能通過一系列復(fù)雜的生化和分子旁路產(chǎn)生活性氧簇，干擾神經(jīng)的營養(yǎng)支持，產(chǎn)生缺血再灌注損傷8。氧自由基損傷被認(rèn)為是糖尿病神經(jīng)病變發(fā)生的直接或間接最后共同通路，在糖尿病慢性并發(fā)癥中處于核心的角色。糖尿病的高血糖狀況能使體內(nèi)自由基生成增多，加重細(xì)胞脂質(zhì)過氧化9，10。一種測定脂質(zhì)過氧化物方便而敏感的方法是定量測定其代謝終末產(chǎn)物DA，其程度的上下可反映組織中脂質(zhì)過氧化的程度11，它能使蛋白質(zhì)、核酸和脂類構(gòu)造發(fā)