微生物的實驗室培養(yǎng)公開課

1、關(guān)于微生物的實驗室培養(yǎng)公開課第1頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三一.微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、放線菌、藍藻個體微小、結(jié)構(gòu)簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生動物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒微生物的共同特點：第2頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三1.細菌的形態(tài)第3頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三2.細菌的菌落.定義：單個或者少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落。.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。.功能：每種

2、細菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。第4頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三幾種菌落及其形態(tài)第5頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三1.概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。二.培養(yǎng)基思考：微生物要生存繁殖，需要“吃”什么？第6頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三2.培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)1.水2.碳源（提供碳元素的物質(zhì)）3.氮源（提供氮元素的物質(zhì)）4.無機物（無機鹽）第7頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三3.培養(yǎng)基的類型（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)

3、基 液體培養(yǎng)基區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。注意：一般細菌不能利用瓊脂。第8頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三 單個或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖,可以形成肉眼可見子細胞的群體菌落固體培養(yǎng)基用途：用于微生物純化、計數(shù)、鑒定第9頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)表面生長均勻混濁生長沉淀生長第10頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三半固體培養(yǎng)基：觀察運動第11頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基化學(xué)成分不恒定的天然有機物如：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基化

4、學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基（2）按化學(xué)成分劃分：第12頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三鑒別培養(yǎng)基將某種類微生物從混雜的微生物群體中分離出來用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基（3）按用途劃分：第13頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較種類用途例子選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基從眾多微生物中分離所需的微生物鑒別不同種類的微生物不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基，伊紅美籃培養(yǎng)基使大腸桿菌的菌落呈黑色，可以鑒別大腸桿菌分離自養(yǎng)型微生物第14頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三2.無菌范圍：實驗操作空間消毒操作者的

5、手、衣著消毒實驗用具滅菌實驗操作過程3.無菌的方法：酒精燈旁操作三.無菌技術(shù)防止外來雜菌的污染1.無菌的意義：消毒與滅菌第15頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三（1）消毒（2）滅菌概念較為溫和理化方法殺死部分有害微生物強烈的理化因素殺死所有的微生物2.無菌的方法第16頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三接種室內(nèi)空氣、接種箱、超凈工作臺紫外線消毒實驗者的手臂、實驗臺等化學(xué)藥劑消毒牛奶等不宜高溫消毒滅菌的巴氏消毒日常食物、罐裝食品煮沸消毒法適用范圍方法（1）消毒第17頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三培養(yǎng)基、實驗器材高壓蒸汽滅菌耐高溫

6、需干燥的物品（玻璃器皿等）干熱滅菌接種的工具、試管口、瓶口灼燒滅菌適用對象滅菌方法灼燒滅菌干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋（2）滅菌第18頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻璃棒、試管、燒瓶（3） 實驗操作者的雙手思考答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。第19頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三我們已經(jīng)對培養(yǎng)基和無菌技術(shù)有了一定的了解，你能不能用培養(yǎng)基進行大腸桿菌的純化培養(yǎng)？思考第20頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三大

7、腸桿菌的純化培養(yǎng)：（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基四. 實驗操作（二）純化大腸桿菌第21頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g1.計算：依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂、攪拌補水定容4.滅菌：5.倒平板：（一）制備培養(yǎng)基培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿干熱滅菌第22頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三計算稱量溶化滅菌倒平板（一）制備培養(yǎng)基1.將培養(yǎng)皿放

8、在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。12342.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。3.用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上皿蓋。4.等待平板冷卻凝固（約需5 10min）。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。第23頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微

9、生物污染培養(yǎng)基。第24頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染 避免培養(yǎng)基中水分過快蒸發(fā)。答：最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。 防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。第25頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三單個細胞單個菌落（二）純化大腸桿菌如何純化？接種常見方法平板劃線法如何分散成單個細胞？稀釋涂布平板法微生物群分散第26頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3

10、分，星期三1.平板劃線法：分區(qū)劃線法連續(xù)劃線法（1）概念與原理：聚集的菌群連續(xù)劃線稀釋分散單個細胞菌落生長繁殖第27頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三(2)“平板劃線”實驗操作第28頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三（1）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？問題討論殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者接種結(jié)束后殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細胞每次劃線前殺死接種環(huán)上原有微生物取菌種前目的灼燒

11、時期第29頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三（2）在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？ 答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。（3）在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到單個細菌繁殖而來的菌落。第30頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三3個劃線平板1個不劃線平板（重復(fù)實驗）（空白對照）（3）培養(yǎng)放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h第31頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三2.稀釋

12、涂布平板法菌液的梯度稀釋：涂布平板操作：(1)概念與原理：聚集的微生物單個細胞菌液梯度稀釋菌落涂布平板(2)操作：生長繁殖第32頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三系列梯度稀釋操作9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水注意：移液管需要經(jīng)過滅菌；試管口和移液管離火焰12cm處。第33頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三涂布平板操作：第34頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h（3）培養(yǎng)第35頁，共

13、43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三1.臨時保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油1ml菌液20三 菌種的保存36個月，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)第36頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三2分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請回答：(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是_和_。(2)想一想這種培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進行選擇的？_。有選擇作用。因為此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長葡萄糖尿素第37頁，共

14、43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三3.培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是() 化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法ABC DA第38頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三四 成果評價如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求。（一）培養(yǎng)基的制作是否合格第39頁，共43頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h