志賀氏菌檢測(cè)課件

1、志賀氏菌檢測(cè)技術(shù) 志賀氏菌是引起人類細(xì)菌性痢疾的病原菌，僅引起人類的腸道內(nèi)感染，對(duì)其他動(dòng)物均無(wú)致病力，可隨患者的糞便污染外環(huán)境。 細(xì)菌性痢疾至今仍然是我國(guó)城鄉(xiāng)最為常見的腸道傳染病,病人和帶菌者是本病的傳染源，尤以非典型病例、慢性患者和帶菌者在流行病學(xué)上的意義更為重要。主要內(nèi)容生物學(xué)性狀標(biāo)本采集和運(yùn)送分離培養(yǎng)初步鑒定血清凝集系統(tǒng)生化鑒定生物學(xué)性狀 形態(tài)與染色 為革蘭氏陰性桿菌，長(zhǎng)約2-3 m ,寬0.5-0.7 m 。不形成芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，有菌毛。 培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧。營(yíng)養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，最適溫度為37，最適pH為6.4-7.8。37培養(yǎng)18-24小時(shí)后菌落呈圓形、微凸

2、、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色、半透明、邊緣整齊，直徑約2nm，宋內(nèi)氏菌菌落一般較大，較不透明，并常出現(xiàn)扁平的粗糙型菌落。在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長(zhǎng)，無(wú)菌膜形成。 常以甘露醇和乳糖發(fā)酵特性來(lái)區(qū)分志賀菌的生化群常以甘露醇和乳糖發(fā)酵特性來(lái)區(qū)分志賀菌的生化群 A群：痢疾志賀菌，甘露醇、乳糖、棉子糖及鳥氨 酸脫羧酶均陰性。B群：福氏志賀菌，棉子糖和甘露醇陽(yáng)性（其 中4、 6型常見甘露醇陰性的變種），乳糖及鳥氨酸 脫羧酶陰性。C群：鮑氏志賀菌，甘露醇陽(yáng)性，乳糖、棉子糖及 鳥氨酸脫羧酶（除13型）均陰性。D群：宋內(nèi)氏菌，甘露醇和乳糖（遲緩）陽(yáng)性，鳥 氨酸脫羧酶陽(yáng)性。標(biāo)本采集糞便標(biāo)本 應(yīng)盡量在抗生素應(yīng)用前采集，采集新鮮

3、糞便標(biāo)本中的膿血、黏液部分1g5g（水樣便1ml5ml）。肛拭子或采便管將標(biāo)本立即保存于Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢 水標(biāo)本直接增菌法:直接采集可疑水樣450ml，加入50ml 10倍濃縮的GN增菌肉湯，37增菌68h。過濾集菌法：采集水樣5001000ml用無(wú)菌濾膜（ 0.450.65m）過濾，取下菌膜直接貼種于選擇性平板培養(yǎng)過夜或無(wú)菌條件下剪碎后放入9mlGN增菌肉湯，37增菌68h后轉(zhuǎn)種平板 。吸附沉淀法食品固體：于廣口瓶或無(wú)菌塑料袋中，實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌稱取25g樣品，剪碎后加入225ml GN增菌肉湯中， 37增菌68h。液體：采取食品50100ml，實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌稱（量）取25g（ml

4、）樣品加入225ml GN增菌肉湯中， 37增菌68h。乳粉類應(yīng)以無(wú)菌操作取25g放入裝有225ml滅菌鹽水的三角瓶中，搖勻，37增菌68h。其他標(biāo)本: 疑似痢疾爆發(fā)疫情病原學(xué)檢測(cè)時(shí)外環(huán)境樣本可采集患者的污染衣物、剩飯菜、可疑食品、抹布、污水、井水等，采集的標(biāo)本應(yīng)立即按1：10的比例接種GN增菌肉湯，置37增菌68h。媒介昆蟲如蒼蠅類，用消毒蠅拍拍打1015只/份,裝入9mlGN增菌肉湯中，盡快送實(shí)驗(yàn)室，置37增菌46h。標(biāo)本運(yùn)送現(xiàn)場(chǎng)采集的糞便標(biāo)本若在2小時(shí)內(nèi)不能送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)置冷藏包中送檢（內(nèi)置冰排，可保存13天）。水、食品等外環(huán)境標(biāo)本若在2小時(shí)內(nèi)不能送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)保存于帶有冰排的采樣箱內(nèi)送檢。增菌分離 水、食品及其他標(biāo)本于GN增菌肉湯中37增菌68h后，直接劃線分離MAC及HE瓊脂平板各一塊，37培養(yǎng)1824h。 在HE上為透明、白色或淺綠色菌落 。在MAC上為無(wú)色（乳糖陰性） ，圓形，半透明，濕潤(rùn)、光滑、突起，大小為12mm的菌落。志賀氏菌在不同平板上的菌落形態(tài)初步生化反應(yīng) 從37培養(yǎng)1624h的分離培養(yǎng)基上，觀察挑選可疑菌落，接種TSI或KAI培養(yǎng)基，先穿刺后劃線，做好標(biāo)記，取出后直接接種動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素（MIU）培養(yǎng)基，放37培養(yǎng)16h以上，觀察結(jié)果。 志賀菌屬在TSI上的生化反應(yīng)為：斜面紅色，底