生物化學(xué)和分子生物學(xué)課程教學(xué)大綱

生物化學(xué)和分子生物學(xué)課程教學(xué)大綱編制僅供參考審核批準生效日期地址：電話：傳真:郵編:《生物化學(xué)》和《分子生物學(xué)》課程實驗教學(xué)大綱課程名稱：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)英文名稱：ExperimentTechnologyofBiochemistryandMolecularBiology課程編號：實驗課性質(zhì)：必修課程負責(zé)人：崔行開放實驗項目數(shù)：3一、學(xué)時、學(xué)分課程總學(xué)時：70課程總學(xué)分：2.0二、適用專業(yè)及年級本大綱適用于醫(yī)療、公共衛(wèi)生、口腔、護理、預(yù)防醫(yī)學(xué)七年制學(xué)生。三、實驗教學(xué)目的與基本要求掌握人體生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能。掌握各種生物物質(zhì)能量的正常代謝過程，代謝調(diào)節(jié)，代謝障礙和臨床疾病的關(guān)系。通過實驗掌握基本的生物化學(xué)實驗技術(shù)及驗證部分課堂理論知識。在實驗教學(xué)中，要求學(xué)生掌握電泳技術(shù)、層析技術(shù)、分光光度法、離心技術(shù)、蛋白質(zhì)及分子生物學(xué)等技術(shù)。掌握蛋白質(zhì)、核酸、酶類的提取、測定，學(xué)習(xí)血液成分生化測定，以及部分生物化學(xué)理論知識的驗證。掌握紫外—可見分光光度計、高速離心機、PCR儀、層析系統(tǒng)、電泳儀系統(tǒng)、電熱恒溫水浴箱、凝膠掃描儀、電動勻漿器等儀器的使用，了解其性能、適用范圍及注意事項。四、主要儀器設(shè)備紫外—可見分光光度計、高速離心機、PCR儀、層析系統(tǒng)、電熱恒溫水浴箱、凝膠掃描儀、電泳儀、電動勻漿器等。五、實驗課程內(nèi)容和學(xué)時分配序號實驗項目名稱實驗內(nèi)容學(xué)時分配實驗屬性實驗類型每組人數(shù)實驗要求指導(dǎo)教師已開/未開11．可見分光光度技術(shù)2．蛋白質(zhì)含量測定1．掌握朗伯-比爾定律。2．掌握比色定量分析標準曲線的制備。3.熟悉可見分光光度計的使用。5設(shè)計基礎(chǔ)2必做已開2紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量掌握紫外分光光度計的使用方法2綜合基礎(chǔ)2必做已開3層析技術(shù)，蛋白質(zhì)的分離純化與鑒定1.熟悉層析技術(shù)的原理、分類及應(yīng)用范圍。2.掌握凝膠層析的基本原理、特點和應(yīng)用。用SephadexG25脫鹽法和用離子交換劑進行蛋白質(zhì)的純化。3.學(xué)習(xí)鹽析的方法，用醋酸纖維素薄膜電泳法進行蛋白質(zhì)的鑒定。7設(shè)計基礎(chǔ)2必做已開4離心技術(shù)，核酸的分離純化及含量測定1．熟悉離心技術(shù)的基本原理。掌握離心力及其作用。掌握常用離心機使用方法和注意事項。2.學(xué)習(xí)核酸的分離及生物學(xué)特性，了解RNA、DNA的提取和含量測定方法。7綜合基礎(chǔ)2必做已開5酶的提取及比活性測定1．掌握酶提取純化的方法和技術(shù)以及應(yīng)注意的問題。2.了解測定堿性磷酸酶活性的原理和方法。3.掌握紫外分光光度計的使用方法。4.了解蛋白質(zhì)測定在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。7綜合基礎(chǔ)2必做已開6底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響本實驗以堿性磷酸酶為例，測定不同濃度底物時的酶活性，再根據(jù)Lineweaver-Burk法作圖，計算其Km值。2驗證基礎(chǔ)2必做已開7pH對酶促反應(yīng)速度的影響本實驗以磷酸苯二鈉為底物，在不同pH值的甘氨酸緩沖液條件下，測定堿性磷酸酶的活性，從而確定其最適pH值。2驗證基礎(chǔ)2必做已開8溫度對酶促反應(yīng)速度的影響本實驗以堿性磷酸酶為例，在不同溫度下保溫一定時間，觀察酶活性的差別。2驗證基礎(chǔ)2必做已開9聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血LDH同工酶掌握電泳分離同工酶的方法并了解其原理，了解顯色原理，了解血清乳酸脫氫酶同工酶電泳分離的臨床意義。5綜合基礎(chǔ)2必做已開10胰島素對血糖含量的影響及測定1．熟悉激素對血糖含量的影響因素。2.學(xué)習(xí)鄰甲苯法測定血糖的原理，了解測定血糖的方法。1.5綜合基礎(chǔ)2必做已開11糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定1．復(fù)習(xí)糖酵解的主要中間步驟及其產(chǎn)物，2.了解一碘醋酸對3-磷酸甘油醛脫氫酶的抑制作用。1.5驗證基礎(chǔ)2必做已開12氨基轉(zhuǎn)換作用GPT測定掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的方法及臨床意義1驗證基礎(chǔ)2必做已開13血清尿素氮測定學(xué)習(xí)尿素測定的方法。1驗證基礎(chǔ)2必做已開14血清脂類薄層層析1．學(xué)習(xí)脂類薄層層析法的具體操作。2．了解薄層層析在脂類成份分析及脂代謝研究中的用途。1綜合基礎(chǔ)2必做已開15電泳技術(shù)，血漿脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳1．熟悉電泳技術(shù)的基本原理。2.掌握影響電泳的因素(介質(zhì)、緩沖溶液、電場強度、電滲等)。3.掌握電泳技術(shù)的應(yīng)用，了解電泳的分類。4.掌握正常人血漿脂蛋白的分類。1.5綜合基礎(chǔ)2必做已開161．分子生物學(xué)技術(shù)。2.感受態(tài)的轉(zhuǎn)化和鑒定1.掌握DNA提取、轉(zhuǎn)染、PCR、核酸雜交、DNA重組等生物學(xué)技術(shù)和方法。2.掌握感受態(tài)的轉(zhuǎn)化和鑒定。7綜合基礎(chǔ)2必做開部分17質(zhì)粒的提取及鑒定掌握質(zhì)粒的提取及電泳鑒定的方法7綜合基礎(chǔ)2必做開部分18酶切及酶切鑒定掌握限制性內(nèi)切酶的特點及應(yīng)用。7綜合基礎(chǔ)2必做開19DNA的回收及重組鑒定學(xué)習(xí)DNA的回收方法及重組子的連接技術(shù).7綜合基礎(chǔ)2必做開部分20SDS測定蛋白質(zhì)分子量在聚丙烯酰胺凝膠中加入陰離子去污劑SDS測定蛋白質(zhì)的相對分子量。7綜合基礎(chǔ)2必做已開21等電聚焦測測定蛋白質(zhì)等電點根據(jù)蛋白質(zhì)在不同pH環(huán)境中所帶凈電荷等于零時，將蛋白質(zhì)分離。7綜合基礎(chǔ)2必做未開22脂蛋白的分離和提純用不同沉淀劑或不同濃度的沉淀劑將脂蛋白分開，分別測定各類脂蛋白。5綜合基礎(chǔ)2選做未開23PCR擴增技術(shù)對提取的基因組DNA進行隨機引物PCR擴增，再觀察擴增的結(jié)果。6研究基礎(chǔ)2選做未開24Western印跡應(yīng)用Western印跡技術(shù)，分析經(jīng)SDS電泳分離并