最新藥典生化藥匯總 70

12010版藥典

生化藥總結(jié)報(bào)告徐康森2第一部分:生化藥的基本概況第二部分:2010年版中國(guó)藥典生化藥歸總3第一部分：生化藥的基本概況1、生化藥的定義2、生化藥的發(fā)展41、生化藥的定義生化藥物是我國(guó)醫(yī)藥產(chǎn)品的一個(gè)大類。生化藥主要從動(dòng)、植物及微生物發(fā)酵提取的、化學(xué)合成、生物-化學(xué)半合成或用現(xiàn)代生物重組技術(shù)制得的一類藥品尤其對(duì)于嚴(yán)重危害人類健康和生命的疾病，如心腦血管病、癌癥、糖尿病和病毒疾患等有其獨(dú)特的治療效果。深受人民的歡迎和重視。52、生化藥的發(fā)展歷程時(shí)間發(fā)展階段品種標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)值1950年-1978年初具規(guī)模1978年-1995年準(zhǔn)備發(fā)展品種100個(gè)左右產(chǎn)值20億1995年-2005年初步發(fā)展品種350個(gè)左右產(chǎn)值200億2005年-2009年發(fā)展品種400個(gè)左右產(chǎn)值500-600億6醫(yī)藥行業(yè)的發(fā)展?fàn)顩r增長(zhǎng)率2005年2006年2007年2008年2009年醫(yī)藥行業(yè)25%18%23%27%25%化學(xué)原料31%5%17%22%15%化藥制劑17%23%22%32%30%中藥飲片-18%28%43%36%35%中成藥35%19%19%23%18%生物生化藥11%29%28%42%40%782009年1月-12月醫(yī)藥制藥業(yè)總值單位：億元名稱總產(chǎn)值（當(dāng)年價(jià)）本月同期增長(zhǎng)本月累計(jì)同期增長(zhǎng)醫(yī)藥制造業(yè)982.9027.93%9403.0520.22%化學(xué)藥品制造487.3222.94%4831.8316.21%中成藥制造237.2434.53%2111.6822.38%生物生化制品制造94.4640.17%918.7127.88%92009年1月-12月醫(yī)藥制藥業(yè)工業(yè)銷售產(chǎn)值單位：億元名稱工業(yè)銷售產(chǎn)值（當(dāng)年價(jià)）本月同期增長(zhǎng)本月累計(jì)同期增長(zhǎng)醫(yī)藥制造業(yè)946.1128.58%8965.8921.19%化學(xué)藥品制造460.5823.45%4596.0916.86%中成藥制造225.5232.91%1997.9723.95%生物生化制品制造97.1846.02%887.1529.05%102009年1月-12月醫(yī)藥制藥業(yè)出口交貨值單位：億元名稱出口交貨值本月同期增長(zhǎng)本月累計(jì)同期增長(zhǎng)醫(yī)藥制造業(yè)78.9334.53%755.766.84%化學(xué)藥品制造48.5828.99%491.920.54%中成藥制造6.3193.50%47.8123.10%生物生化制品制造13.4158.44%112.9435.74%112009年1月-12月醫(yī)藥制藥業(yè)新產(chǎn)品產(chǎn)值單位：億元名稱新產(chǎn)品產(chǎn)值（當(dāng)年價(jià)）本月同期增長(zhǎng)本月累計(jì)同期增長(zhǎng)醫(yī)藥制造業(yè)145.9950.80%1313.7428.38%化學(xué)藥品制造85.8446.55%793.1325.30%中成藥制造32.9454.76%279.2732.82%生物生化制品制造13.0446.75%121.0718.79%12第二部分：2010年版中國(guó)藥典生化藥歸總

為貫徹黨的十七大精神，落實(shí)科學(xué)發(fā)展觀，建國(guó)以來(lái)的第九版藥典——《中國(guó)藥典》2010年版，已完成增修訂任務(wù)，目前已經(jīng)正式出版發(fā)行。13宗旨：提高藥典質(zhì)量，應(yīng)用高新技術(shù)，解決安全隱患，趕超國(guó)際水平。14本屆藥典生化藥修訂工作的特點(diǎn)時(shí)間短任務(wù)重難度大要求高15《中國(guó)藥典》2010版生化藥

標(biāo)準(zhǔn)品種數(shù)匯總類別2005版標(biāo)準(zhǔn)（品種）2010版標(biāo)準(zhǔn)（品種）增加標(biāo)準(zhǔn)（品種）標(biāo)準(zhǔn)（品種）增長(zhǎng)%刪除氨基酸及其衍生物44（23）53（26）9（3）20.5%（13%）核酸及其衍生物44（10）51（11）7（1）15.9%（10%）酶與輔酶28（11）34（14）6（3）21.4%（27%）多肽、蛋白26（11）30（13）8（3）30.8%（27%）4多糖15（5）19（6）4（1）26.6%（20%）脂2（1）4（2）2（1）100.0%（100.0%）1總數(shù)159（61）191（72）36（12）22.6%（19.6%）516范圍特點(diǎn)工藝（制劑）質(zhì)標(biāo)增修訂內(nèi)容氨基酸及其衍生物人生命的基本組成單位，人健康的基本營(yíng)養(yǎng)成分，救死扶傷十分重要。85年200萬(wàn)瓶08年2億萬(wàn)瓶合成、發(fā)酵、提取、酶轉(zhuǎn)化固：片、膠囊、顆粒、散、口含液：口服液、滴眼液、注射、沖洗液TLC其它aa檢查

有關(guān)物質(zhì)滲透壓

紅外圖譜*可見(jiàn)異物

旋光度：系數(shù)法計(jì)算*抑菌劑

含量測(cè)定：非水滴定、比色、*微生物限度

HPLC*細(xì)內(nèi)核酸及其衍生物生命的基本物質(zhì)、臨床治病毒、心血管、腦損傷、缺氧等合成、發(fā)酵固：片、含、膠、顆、凍干液：口服、注射、滴液（眼、鼻）Nacl注射、葡萄糖注射

有關(guān)物質(zhì)

含量均勻度異常毒性

TLC滲透壓

含量測(cè)定殘留溶劑

熱源修訂為細(xì)內(nèi)溶液顏色和澄清

說(shuō)明書增加用法、用量、注射途徑、注速酶與輔酶參與一切代謝、生物體內(nèi)催化劑、往往有生物活性大部分從生物體組織提取、少部分發(fā)酵法固：片、膠囊、顆粒、軟膠囊、凍干、粉液：注射液、溶液溶液的顏色

無(wú)菌高分子物質(zhì)

過(guò)敏有關(guān)物質(zhì)

降壓物質(zhì)異常毒性細(xì)菌內(nèi)毒素微生物限度多肽蛋白aa殘基組成肽鏈，由肽鏈組成生命的基本物質(zhì)蛋白是國(guó)內(nèi)外新崛起一類新品種

3-32aa很關(guān)注大部分合成，少部分提取、重組產(chǎn)品歸發(fā)酵工藝固：注射用液：注射液溶液高分子蛋白

異毒有關(guān)物質(zhì)

細(xì)內(nèi)相關(guān)蛋白

微生物限度含量：HPLC過(guò)敏金屬離子：吸收光譜多糖、脂機(jī)體代謝中提供能源、碳源，亦是細(xì)胞結(jié)構(gòu)主要組成部分提取、發(fā)酵固：片、膠囊、乳膏、軟膠囊、注射用液：注射液、Nacl、葡萄糖注射液金屬離子：吸收光譜

有關(guān)物質(zhì)：HPLC比活：

含測(cè)：HPLC、GC比旋度

過(guò)氧化值有機(jī)殘留

*甲氧基胺值細(xì)內(nèi)

不皂化值17一、氨基酸及其衍生物類1、基本介紹該類品種是組成蛋白質(zhì)的基本單位。組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸只有20種左右，均為L(zhǎng)-a-氨基酸（除甘氨酸外）。因?yàn)槭侨祟惤】档幕緺I(yíng)養(yǎng)成分，故在救死扶傷中扮演十分重要角色。18臨床上除單方使用aa外，其還是復(fù)方aa注射液的主要組成成分。臨床上常用的氨基酸注射液有3aa、6aa、9aa、11aa、15aa、17aa、18aa（I-II）等。從1985年銷售100萬(wàn)瓶，到2008年銷售量已經(jīng)達(dá)到2億萬(wàn)瓶，市場(chǎng)潛力很大，前景美好。192、2010年版中國(guó)藥典收載的氨基酸及其衍生物類品種?；撬峒捌渲苿ㄆ?、散、顆粒、膠囊、滴眼液）；鹽酸精氨酸及其制劑（片、注射液）；色氨酸；谷氨酸（鈉）及其制劑（片、注射液、鉀注射液）；組氨酸及鹽酸組氨酸；脯氨酸；精氨酸；酪氨酸；絲氨酸；異亮氨酸；亮氨酸；賴氨酸（鹽酸、醋酸、芐達(dá)）；纈氨酸；門冬酰胺（片）、甘氨酸（沖洗液）、胱氨酸（片、鹽酸）、丙氨酸、甲硫氨酸（片）、蘇氨酸、苯丙氨酸、谷丙甘氨酸膠囊、乙酰半胱氨酸（滴眼液、顆粒）、乙酰谷氨酸（注射液）、羧甲司坦（口服溶液、片、顆粒）等53個(gè)品種。203、收載的氨基酸及其衍生物類藥品

基本特點(diǎn)幾乎包含了國(guó)內(nèi)外所有氨基酸類產(chǎn)品方便臨床使用，該類產(chǎn)品呈現(xiàn)制劑系列化特點(diǎn)，如固體制劑包括：片、膠囊、顆粒、散、口含片；液體制劑有：口服溶液、滴眼液、注射液等214、品種增修訂情況

增訂、修訂和統(tǒng)一有關(guān)檢查項(xiàng)目?jī)?nèi)容、使得該類標(biāo)準(zhǔn)基本與國(guó)外同類標(biāo)準(zhǔn)接軌。22增訂情況修訂情況TLC法檢查其他氨基酸增加方法學(xué)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)滲透壓可見(jiàn)異物抑菌劑（滴眼液、注射液）微生物限度細(xì)菌內(nèi)毒素增加限度要求、干擾試驗(yàn)等有關(guān)物質(zhì)增加靈敏度要求、最小檢測(cè)量熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素溶液的顏色紅外光譜旋光度用系數(shù)法計(jì)算含量測(cè)定非水滴定比色法

HPLC法23二、核酸及其衍生物類1、簡(jiǎn)介：核酸是生命的最基本物質(zhì)，存在于一切生物細(xì)胞內(nèi)，DNA只要存在細(xì)胞的染色體中，RNA主要存在細(xì)胞的微粒體中。242、2010年版藥典收載的核酸及其衍生物類藥品的品種三磷酸腺苷二鈉、注射用ATP（注射液）、胞磷膽堿鈉（注射用、注射液）、肌苷（口服溶液、片、注射液、膠囊、注射用）、環(huán)磷腺苷（注射用）、鹽酸阿糖胞苷（注射用）、腺苷鈷胺（片）、更昔洛韋（注射液、注射用）、利巴韋林原料及其制劑、阿昔洛韋原料及其制劑、泛昔洛韋（片、膠囊）、鹽酸伐昔洛韋（片、膠囊）等51個(gè)品種。253、收載的核酸及其衍生物類藥品品種的基本特點(diǎn)臨床上治療病毒疾患為主，部分治療心血管及腦損傷、缺氧等疾病。

如早期阿糖胞苷酸是治療威脅人類健康的病毒疾患的首創(chuàng)藥物；第一代核苷酸類藥物利巴韋林，第二代阿昔洛韋、更昔洛韋直至泛昔洛韋等。該類產(chǎn)品大部分是微生物發(fā)酵或半合成的，化學(xué)結(jié)構(gòu)清楚、成分明白、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較完善。2010年版藥典收載的核酸類藥物品種較為齊全，尤其制劑，劑型完整，低的2-3種，多的7-8種。如利巴韋林有11種：固體制劑有4種，片、口含片、膠囊、顆粒；液體制劑有7種，滴眼液、滴鼻液、口服溶液、注射劑、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液、注射用。264、品種增修訂情況該類藥品大部分標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目比較完善，大部分未增訂和修訂，少部分進(jìn)行了增修訂。27增訂情況修訂情況有關(guān)物質(zhì)異常毒性滲透壓殘留溶劑含量均勻度熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素含量測(cè)定方法TLC法分離度要求溶液的澄清度與顏色用法、用量注射途徑、注射速度28Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹

鹽酸阿糖胞苷（上海所起草，標(biāo)準(zhǔn)已全面達(dá)到或超過(guò)國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)，有代表意義值得借鑒）修訂了含量測(cè)定為HPLC法，限度達(dá)到98%-102%增訂項(xiàng)目共6項(xiàng)：氯含量（因鹽酸鹽）、溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)、熾灼殘?jiān)⒅亟饘?、殘留溶劑等?9特別是其中的氯含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)檢查、殘留溶劑檢查等很重要氯含量：電位滴定法測(cè)定，回收率100.4%，RSD=0.8%（n=6）；有關(guān)物質(zhì)：對(duì)阿糖腺苷、尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷等進(jìn)行考察，采用2種C18色譜柱進(jìn)行系統(tǒng)適用性考察，得出相應(yīng)結(jié)果。經(jīng)天津所和廣東所復(fù)核，結(jié)果一致；殘留溶劑：對(duì)5個(gè)企業(yè)的8種溶劑進(jìn)行考察（聚乙二醇毛細(xì)管柱，進(jìn)行系統(tǒng)適用性、回收率和最低檢出限進(jìn)行考察）。經(jīng)天津所和廣東所復(fù)核，結(jié)果一致。30鹽酸阿糖胞苷質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比2010版

2005版

BP2007

USP30

JP15

鹽酸阿糖胞苷

同左

阿糖胞苷

阿糖胞苷

阿糖胞苷

含量限度

無(wú)水干燥98.0%～102.0%

97.0%～103.0%

99.0%～100.5%98.0%～102.0%

98.5%～101.0%性狀

白色、類白色細(xì)小針狀結(jié)晶或結(jié)晶粉末，水易溶，乙醇略溶，乙醚幾乎不溶

同左

白色或近白結(jié)晶性粉末

同左

白色晶體或晶粉，水易溶，乙醇略溶

熔點(diǎn)

189～198℃

同左

215℃

∕

214℃

比旋度

127°→+133°

同左

154°→+160°

同左

同左

鑒別

⑴紫外-可見(jiàn)：280nm最大吸收，241nm最小吸收;⑵含測(cè)：與對(duì)照液主峰RT一致;⑶紅外圖譜;⑷溶液呈氯化物鑒別反應(yīng)

同左

154°→+160°

⑴紫外-可見(jiàn):230-350檢測(cè)，281nm最大吸收；特殊吸收最大值在540nm～570nm;⑵紅外圖譜;⑶相關(guān)物檢查：與對(duì)照品斑點(diǎn)一致

⑴紅外圖譜⑵含測(cè)：與對(duì)照品主峰RT一致

⑴紅外圖譜⑵紫外-可見(jiàn)與對(duì)照在相同nm有相同吸收

澄清度與顏色

1號(hào)＜顏色＞2號(hào)1.2g→10ml澄清無(wú)色

∕

1g→10ml澄清且不得比對(duì)照溶液Y5顏色深

∕

0.2g→20ml，澄清無(wú)色

PH

∕

∕

∕

∕

0.20g/20ml水溶液，6.5～8.031三、酶及其輔酶類1、簡(jiǎn)介：酶是生物體內(nèi)的催化劑，參與一切代謝過(guò)程。酶的組成為單純蛋白質(zhì)和結(jié)合蛋白質(zhì)。后者為酶蛋白，非蛋白部分為輔酶或輔基。酶又可以按照各種催化反應(yīng)分類，如氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、異構(gòu)酶、合成酶等。322、2010年版藥典收載的酶及輔酶類

藥品品種胰酶（腸溶片、腸溶膠囊）、胰蛋白酶（注射用）、糜蛋白酶（注射用）、胃蛋白酶（片、顆粒、含糖胃蛋白酶）、玻璃酸酶（注射用）、抑肽酶（注射用）、凝血酶凍干粉、尿激酶（注射用）、門冬酰胺酶Ⅰ、Ⅱ*（注射用）、細(xì)胞色素C（注射用、注射液）、烏司他丁*（溶液、注射用）、輔酶Q10（片、注射液、膠囊、軟膠囊）、激肽原酶*等34個(gè)品種。

*為新增品種333、收載的酶及輔酶類品種的基本特點(diǎn)國(guó)外藥典收載的品種，本次藥典大部分均已收入。大部分是生物體某些組織中提取、純化和精制的；另一部分是微生物經(jīng)發(fā)酵、破壁后再?gòu)陌l(fā)酵液中提取、純化和精制而成的。酶是蛋白質(zhì)，具有生物活性，通常用于提純和純化蛋白質(zhì)的方法都適用于酶。質(zhì)量指標(biāo)的制定中注意酶的總活性和比活力純度的關(guān)系。新增訂的藥品品種僅有3個(gè)。344、增修訂情況溶液的顏色高分子物質(zhì)檢查有關(guān)物質(zhì)異常毒性細(xì)菌內(nèi)毒素微生物限度無(wú)菌過(guò)敏35Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹抑肽酶該品種由上海藥檢所起草Chp2005、、USP32版均收載，本版繼續(xù)收載，但依據(jù)USP作了三個(gè)方面的修訂。1.檢查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有關(guān)物質(zhì)參照USP32采用附錄新技術(shù)毛細(xì)管電法：這是我國(guó)第一個(gè)用該法上藥典的品種。柱：石英毛細(xì)管分離柱毛細(xì)管溫度：30℃電極液：磷酸二氫鉀溶液分離壓：12KV波長(zhǎng)：214nm結(jié)果：去丙aa抑肽酶~抑肽酶（上海所）

去丙aa-去甘aa-抑肽酶~抑肽酶（上海所）（兩相關(guān)物分離度，去丙aa-抑肽酶~抑肽酶分離度、抑肽酶拖尾因子）對(duì)照品圖供試品圖36Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹2.檢查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關(guān)物（參照USP32）色譜柱：TSK-GELIC-Cation-SW柱溫：40℃

流動(dòng)相：磷酸二氫鉀緩沖液流速：梯度洗程序結(jié)果：N-焦谷氨酰-抑肽酶~抑肽酶（分離度，抑肽酶拖尾因子，最低檢出量：82ng）對(duì)照品圖供試品圖37Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹3.檢查高分子蛋白（USP32）關(guān)鍵是采用三根串聯(lián)Gel色譜柱（TSK-G4000SWXL柱）柱溫35℃，流速1.0ml/min,二聚體相對(duì)，分離度，拖尾因子。

以上用新技術(shù)的三項(xiàng)檢查，有效控制抑肽酶產(chǎn)品的純度，使產(chǎn)品質(zhì)量有一個(gè)飛躍，使標(biāo)準(zhǔn)的制定達(dá)到或超過(guò)國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照品圖供試品圖38項(xiàng)目ChP2010版ChP2005版BP2008/EP6.0USP32性狀同右白色、微黃幾乎白色粉，易濕／溶解性同右易溶于水、0.9%NaCl，不溶于乙醇、丙酮、乙醚溶于水溶液不溶于有機(jī)溶劑／鑒別（1）胰蛋白酶能使底物顯紫紅色，本品不能；（2）HPLC（同USP31）同左（1）（1）TLC法（2）抑制抑肽酶活性（1）TLC法（2）HPLC法pH同右5mg/ml：5.0～7.0／／溶液澄清度同右2mg/ml：溶液應(yīng)澄清／／吸光度同右3U/ml：277nm最大吸收度≤0.8同左同左干燥失重／／0.1g真空干燥≤6.0%0.1g真空3h≤6.0%水分≤6.0%≤6.0%／／去丙aa–抑肽酶和去丙aa-去甘aa–抑肽酶同USP32／／毛細(xì)管電泳法，分別＜7.5%和8.0%N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關(guān)物質(zhì)同USP32／／HPLC：已知＜1.0%，單個(gè)＜0.5%，未知總量＜1.0%高分子蛋白同USP32凝膠柱＜3.0%分子排阻，抑肽酶前不得有峰分子排阻＜1.0%細(xì)菌內(nèi)毒素／／≤0.14IU/抑肽酶同左熱原／15U/kg，應(yīng)符合同左同左異常毒性同右4U/ml，iv，應(yīng)符合同左同左降壓／1.5U/kg，應(yīng)符合／／效價(jià)同右酶底物法＞3.0U/mg同左同左抑肽酶國(guó)內(nèi)外質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較39四、多肽、蛋白類1、簡(jiǎn)介：肽類是氨基酸相互結(jié)合成多肽鏈。蛋白質(zhì)就是由多個(gè)氨基酸殘基組成的多肽鏈。一般以51個(gè)aa殘基，分子量為5733的Insulin劃分，高于此分子量的稱為蛋白，小于的為肽類。40肽鍵(peptide

bond)的形成412、2010年版藥典收載的多肽及蛋白類藥品品種尿促性素、注射用HMg、絨促性素、注射用HCg、醋酸丙氨瑞林、注射用醋酸丙氨瑞林、硫酸魚精蛋白及其注射液、五肽胃泌素及其注射液、縮宮素注射液、鮭降鈣素及其注射液、生長(zhǎng)抑素及其注射用、甲狀腺素片、醋酸奧曲肽（注射液、注射用）、胸腺法新（注射用）、胰島素（系列產(chǎn)品）、重組人生長(zhǎng)激素（注射用）等30個(gè)品種。423、收載多肽及蛋白類品種的基本特點(diǎn)本次藥典收載的產(chǎn)品中少部分為臟器提取的激素、肽類。安全性無(wú)法保障的品種如垂體后葉粉、注射液；縮宮素溶液；甲狀腺粉等刪除。部分肽和小分子蛋白中的生物活性、生物鑒別由化學(xué)測(cè)定法代替。本次藥典收載的合成肽類藥品，純度較高、質(zhì)量?jī)?yōu)良，大部分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際接軌。43生物測(cè)定法修訂情況修訂類型品種名稱修訂內(nèi)容（修訂原因）刪除品種垂體后葉粉工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒(méi)有保障刪除品種垂體后葉注射液工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒(méi)有保障刪除品種縮宮素溶液工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒(méi)有保障刪除品種甲狀腺粉工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒(méi)有保障刪除部分生物測(cè)定胰島素豬胰島素注射液中性胰島素注射液精蛋白胰島素注射液刪除生物效價(jià)和兔血糖法，改用HPLC法測(cè)定，加限度試驗(yàn)（動(dòng)物減半，隨機(jī)涉及生物統(tǒng)計(jì)，結(jié)果為等效）簡(jiǎn)化效價(jià)測(cè)定為活性鑒別。刪除生物測(cè)定硫酸魚精蛋白*國(guó)外用化學(xué)滴定法替代生物測(cè)定刪除生物測(cè)定縮宮素注射液*國(guó)外已用HPLC法代替生物測(cè)定。國(guó)內(nèi)目前產(chǎn)品因雜質(zhì)多，大于30%，故未收載刪除生物測(cè)定肝素及其制劑*國(guó)外已用抗II和抗Xa（分光法）取代生物測(cè)定國(guó)內(nèi)尚待盡快改用分光法替代生物測(cè)定減少生物測(cè)定注射用重組人生長(zhǎng)激素常規(guī)用HPLC法測(cè)定，同時(shí)一年進(jìn)行至少一次生物測(cè)定減少生物測(cè)定鮭降鈣素常規(guī)用HPLC法測(cè)定，同時(shí)一年進(jìn)行至少一次生物測(cè)定*暫未修訂444、增修訂情況高分子蛋白有關(guān)物質(zhì)相關(guān)蛋白含量測(cè)定：HPLC金屬離子：吸收光譜細(xì)菌內(nèi)毒素異常毒性微生物限度過(guò)敏45Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹（一）生長(zhǎng)抑素BP09；EP60有收載；ChP和USP均未收載浙江省所參照各國(guó)藥典，進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)等進(jìn)行起草。1、含量限度：同國(guó)外使用HPLC法，C18柱，進(jìn)樣量少，等度洗脫。2、鑒別：TLC法，點(diǎn)樣量改成10ul，Rf=0.25，展開劑改為冰醋酸。ug4、氨基酸組成：經(jīng)方法學(xué)改進(jìn)采用二硫代二丙酸先與半胱氨酸結(jié)合再水解進(jìn)行測(cè)定。5、醋酸：參照國(guó)內(nèi)外合成肽有關(guān)方法，用HPLC法進(jìn)行方法學(xué)研究。210nm檢測(cè)，梯度洗脫，線性10-500ug/ml，回收率101.6%（n=3），ng，ng。6、細(xì)菌內(nèi)毒素：方法學(xué)研究包括限值與熱原對(duì)比，靈敏度、干擾試驗(yàn)、確證試驗(yàn)等。7、殘留溶劑：進(jìn)行了乙腈、甲醇、乙醚、三乙胺、二甲基甲酰胺進(jìn)行測(cè)定46Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹（二）胰島素ChP2010版依據(jù)USP33、標(biāo)準(zhǔn)，參照2005版分別對(duì)來(lái)源、性狀、鑒別、檢查項(xiàng)下含量測(cè)定項(xiàng)、活性檢查作了修訂和補(bǔ)充，（該品種江蘇所起草，檢定所復(fù)核）1.肽圖分析：經(jīng)V8酶水解胰島素、對(duì)其分子碎片中的肽圖進(jìn)行分析，該法能確定不同種屬的胰島素，該法專屬性強(qiáng)。人胰島素酶解-HPLC肽圖豬胰島素酶解-HPLC肽圖47Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹胰島素2.相關(guān)蛋白：參照USP32、由SDS改為分離度較好的HPLC法，梯度洗脫及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，使A21脫酰胺胰島素<0.5%，其它相關(guān)蛋白限值<5.0%，而實(shí)測(cè)樣前者<0.5%；后者<3.9~4.0%。3.高分子蛋白：將一般柱色譜改為分子排阻色譜，色譜條件和系統(tǒng)實(shí)用性試驗(yàn)均與ChP2005重組人胰島素標(biāo)準(zhǔn)一致。48Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹胰島素4.含量測(cè)定：用HPLC法代替生物測(cè)定法。ChP2010版考慮到胰島素生物活性的重要性，故除改用HPLC法外，原料在檢查項(xiàng)中再加生物活性測(cè)定，參考USP32，動(dòng)物數(shù)減半，生物統(tǒng)計(jì)簡(jiǎn)化，作限度實(shí)驗(yàn)，為常規(guī)測(cè)定用，該法既能省時(shí)、省力、省成本，又能有效控制質(zhì)量。49五、多糖、脂類1、簡(jiǎn)介：糖類是自然界中一類重要的含碳化合物，主要生物學(xué)功能是在機(jī)體代謝中提供能源和碳源，也是組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的主要組成成分。主要分類有單糖（簡(jiǎn)單的多羥基醛或酮）和聚糖（單糖縮合而成，20個(gè)單糖結(jié)構(gòu)以下的為低聚糖，20個(gè)以上的為多糖。低聚糖：蔗糖、麥芽糖、乳糖；純多糖：右旋糖酐、香菇多糖；雜多糖：肝素、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸）502、2010年版藥典收載的糖及脂類品種硫酸軟骨素片、膠囊肝素鈉、注射液、乳膏右旋鐵、片、注射液右旋糖酐20、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液右旋糖酐40、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液右旋糖酐70、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液前列地爾、注射用前列地爾多烯酸乙酯、軟膠囊513、收載的糖及脂類品種的主要特點(diǎn)采用高科技、新方法，是質(zhì)量顯著提高（如肝素、硫酸軟骨素等）脂類，采用新的質(zhì)控指標(biāo)是多烯酸乙酯的質(zhì)量與EP、JP等基本一致。524、增修訂情況金屬離子：吸收光譜有關(guān)物質(zhì)：HPLC比活含量測(cè)定：HPLC、GC比旋度殘留溶劑甲氧基苯胺值不皂化值細(xì)菌內(nèi)毒素53Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹（一）肝素鈉

（中檢所起草）比活：從原150u/mg提高到170u/mg(USP32<180，BP2008為150，JP15為130)產(chǎn)品純度提高比旋度：從原+35°到+50°（因雜質(zhì)嚴(yán)控，故該項(xiàng)提高）吸收度：260nm、280nm是核酸和蛋白質(zhì)吸收峰，因雜質(zhì)嚴(yán)控，260nm吸收度從原到，280nm吸收度從原到<0.10說(shuō)明雜質(zhì)減少。Na+：用原子吸收光譜限度9.5-12.5%（同EP）有機(jī)殘留：甲醇，乙醇，丙酮<中國(guó)藥典規(guī)定細(xì)菌內(nèi)毒素：原1單位到1單位

以上六項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)均有十分明顯的提高54Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹（一）肝素鈉

（中檢所起草）有關(guān)物質(zhì)：應(yīng)用離子色譜HPLC，使雜質(zhì)硫酸皮膚軟骨素<5.0%，多硫酸軟骨素不得檢出。該法USP,EP,BP,JP均沒(méi)訂。美國(guó)藥典論壇可能要采用該法，因該法能十分清晰分析：肝素，硫酸皮膚素，多硫軟骨素，可代替昂貴核磁共振及毛細(xì)管電泳。ChP2010的該項(xiàng)目超過(guò)國(guó)際水平，有十分重要的意義。55Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)例介紹（二）硫酸軟骨素（中檢所起草）該品質(zhì)量指標(biāo)有顯著性提高，從含量原來(lái)40%左右直提至90%（口服），直接與國(guó)際接軌。除標(biāo)準(zhǔn)中來(lái)源豬、紅外、吸收度、細(xì)內(nèi)、有機(jī)殘留增修有提高外，主要含量測(cè)定：用專一性很強(qiáng)且靈敏的酶解法分離硫酸軟骨素呈——A、B、C。再用離子色譜柱法很好分離硫酸軟骨素成B、C和A。使硫骨素含量為90%（固）、95%（固）、97%（注、眼）。該法的特點(diǎn)，抵能測(cè)豬軟骨素（A/C有固定值），因國(guó)外來(lái)源很雜（牛、豬、禽、海洋動(dòng)物），靈敏度優(yōu)于USP和EP的電泳法、EP為滴定時(shí)，因無(wú)專屬性使將其它多糖混雜于方法中，使硫酸軟骨素含量偏高。56

2010版藥典生化藥完成情況總結(jié)1、標(biāo)準(zhǔn)和品種完成情況標(biāo)準(zhǔn)完成191個(gè)規(guī)格，增加36個(gè)，增加率（與chp2005年版比較）為22.6%品種完成72個(gè)、增加12個(gè)新品種，增加率（與chp2005年版比較）為19.6%刪除標(biāo)準(zhǔn)共5個(gè)

572、附錄和指導(dǎo)原則增訂情況

（1）蛋白質(zhì)含量測(cè)定（提供六種可選擇的方法，適應(yīng)各有關(guān)品種的選擇）（2）多肽醋酸含量測(cè)法（為合成肽的檢查項(xiàng)提供統(tǒng)一的方法）（3）電泳附錄中等點(diǎn)聚焦法（電泳附錄中增加先進(jìn)技術(shù)及常用方法）（4）氨基酸分析中的衍生法（為考慮各有關(guān)單位習(xí)慣等）

其中的（4）為指導(dǎo)原則中增訂58（1）蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法第一法：凱氏定氮法（提供了非蛋白氮供試品制備方法）。靈敏度較低，適用于氮。換算系數(shù)因蛋白質(zhì)所含氨基酸結(jié)構(gòu)差異會(huì)稍有區(qū)別。第二法：福林酚法（Lowry法）。靈敏度高，測(cè)定范圍通常可達(dá)20-250ug。干擾物質(zhì)較多（還原物質(zhì)、酚類、檸檬酸、硫酸銨、Tris緩沖液、甘氨酸、甘露醇、糖類、甘油等）第三法：雙縮脲法。快速、靈敏度低，測(cè)定范圍為1-10mg。干擾物質(zhì)有硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸59第四法：2,2’-聯(lián)喹啉-4,4’-二羧酸法（BCA法）。靈敏度較高，測(cè)定范圍80-400ug。樣品中不能有還原劑和銅螯合物。第五法：考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）。靈敏度高，可測(cè)定1-200ug蛋白量。干擾物質(zhì)有去污劑、Triton

X-100、十二烷基硫酸鈉等。樣品緩沖液呈強(qiáng)堿性也會(huì)影響顯色。第六法：紫外分光光度法。干擾因素多，常用于純化蛋白質(zhì)的微量測(cè)定60（2）合成多肽中的醋酸測(cè)定法采用液相色譜法測(cè)定合成多肽中的醋酸或醋酸鹽的含量。

C18柱、210nm檢測(cè)、梯度洗脫。醋酸峰的保留時(shí)間約為3-4分鐘。61（3）增訂了電泳法增訂第六法——等電聚焦水平板