微生物數(shù)量的測定方法

微生物數(shù)量的測定方法微生物數(shù)量的測定方法微生物數(shù)量的測定方法V:1.0精細(xì)整理，僅供參考微生物數(shù)量的測定方法日期：20xx年X月微生物數(shù)量的測定1.計(jì)數(shù)器測定法：即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的(O.1mm3)，因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡便易行，可立即得出結(jié)果。本法不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)。2、電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法:電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。該法測定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識(shí)別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。3、活細(xì)胞計(jì)數(shù)法常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法，是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測污染活菌數(shù)的方法，也是目前國際上許多國家所采用的方法。使用該法應(yīng)注意：①一般選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，過多或過少均不準(zhǔn)確；②為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗(yàn)，是最常用的活菌計(jì)數(shù)法。4、比濁法比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計(jì)測定菌液，用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。此法簡便快捷，但只能檢測含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對的細(xì)菌數(shù)目，對顏色太深的樣品，不能用此法測定。5、測定細(xì)胞重量法此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。此法適于菌體濃度較高的樣品，是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。6、測定細(xì)胞總氮量或總碳量氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。7、顏色改變單位法（colourchangeunit,簡稱CCU）通常用于很小，用一般的比濁法無法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計(jì)數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，因此需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，來計(jì)數(shù)微生物的相對含量的，下面以解脲脲原體為例單介紹其操作：，簡（1）取12只無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養(yǎng)基。（2）在第一管加入0.2ml待測解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2ml加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到最末一管（3）于37度培養(yǎng)，以培養(yǎng)基顏色改變的最末一管作為待測菌液的CCU，也就是支原體的最大代謝活力，比如第六管出現(xiàn)顏色改變，他的相對濃度就是10的6次方CCU/ml.取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)或做片在顯微鏡下數(shù)，均稱為顯微鏡直接計(jì)