《生物化學(xué)實驗》教學(xué)大綱

《生物化學(xué)實驗》教學(xué)大綱四．考試方法五．參考教材一．實驗?zāi)康纳锘瘜W(xué)是一門實驗性學(xué)科，其所有知識均來自于實驗。本課程著眼于學(xué)生學(xué)習(xí)和掌握生物化學(xué)課程的基本理論、基本知識以及實驗技能，培養(yǎng)學(xué)生具有初步分析問題和解決問題的能力。生物化學(xué)實驗課通過學(xué)習(xí)滴定、比色、紙層析、電泳、生化制備等基本實驗技術(shù)，分析研究糖、脂、蛋白質(zhì)、核酸、酶、維生素等生化物質(zhì)及某些代謝過程，培養(yǎng)學(xué)生具有初步的科學(xué)實驗?zāi)芰皣?yán)格的科學(xué)作風(fēng)，同時驗證生物化學(xué)的某些基本理論知識，加深感性認識，并鍛煉初步的綜合實驗?zāi)芰?。返回頂部二．實驗?nèi)容實驗一 糖的呈色反應(yīng)及還原糖的檢一．實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)鑒定糖類及區(qū)分酮糖和醛糖的方法；了解鑒定還原糖的方法及其原理。二．實驗內(nèi)容MolishSeliwanoffBialFehling應(yīng)。三.實驗過程呈色反應(yīng)Molish反應(yīng)蒽酮反應(yīng)SeliwanoffBial還原糖的檢驗FehlingBenedictBarfoed四.作業(yè)與思考7MolishSeliwanoff么問題？舉例說明那些糖屬于還原糖.實驗二 脂類組成對脂類單分子層通透性的影一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)制作脂類單分子層和鑒定它的原理及方法，比較不同脂類所形成的脂類單分子層通透性的差異。二、實驗內(nèi)容以脂類單分子層作為模式膜，用甲烯藍為指示劑，觀察不同脂類單分子層通透性的影響。三.實驗過程溶液準(zhǔn)備四.作業(yè)與思考試述生物膜的基本結(jié)構(gòu)與功能內(nèi)在蛋白質(zhì)和外在蛋白質(zhì).實驗三 蛋白質(zhì)濃度的測定（1）——Folin-酚一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)Folin-酚法的原理及方法，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知樣品中蛋白質(zhì)含量。二、實驗內(nèi)容Folin三.實驗過程Folin-酚法標(biāo)準(zhǔn)曲線測定未知樣品蛋白質(zhì)濃度計算四.作業(yè)與思考Folin-酚法測定蛋白的原理是什么？Folin-酚測定蛋白含量？作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白的牛血清清蛋白或酪蛋白在應(yīng)用時有何要求？實驗四 蛋白質(zhì)濃度測定（2）——紫外線吸收一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)紫外線（UV）吸收法測定蛋白質(zhì)含量的原理，了解紫外分光光度計的構(gòu)造原理，掌握它的使用方法。二、實驗內(nèi)容三.實驗過程標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制樣品測定本法與其它測定蛋白質(zhì)含量法相比，有哪些優(yōu)點？若樣品中含有干擾測定的雜質(zhì)，應(yīng)如何校正實驗結(jié)果？實驗五 氨基酸的分離與鑒定——濾紙層析一、實驗?zāi)康亩?、實驗?nèi)容三.實驗過程濾紙的剪裁點樣展層定性鑒定定量測定四.作業(yè)與思考做好本實驗的關(guān)鍵是什么？實驗操作過程，為何不能用手接觸濾紙？R制的因素有哪些？f實驗六 血清蛋白醋酸纖維素薄膜電一、實驗?zāi)康牧私怆娪镜囊话阍恚莆沾姿崂w維素薄膜電泳操作技術(shù)，測定人血清中各種蛋白質(zhì)的相對百分含量。二、實驗內(nèi)容三.實驗過程儀器與薄膜的準(zhǔn)備點樣電泳染色與漂洗透明四.作業(yè)與思考根據(jù)人血清中血清蛋白各組分等電點，如何估計它們在pH8.6的巴比妥—巴比妥鈉電解緩沖液中移動的相對位置簡述醋酸纖維素薄膜電泳原理及優(yōu)點實驗七 蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)常用的鑒定蛋白質(zhì)氨基酸的方法及其原理；學(xué)習(xí)幾種特定氨基酸的特殊顏色反應(yīng)及其原理。二、實驗內(nèi)容三.實驗過程加樣觀察四.作業(yè)與思考綜合分析、對比蛋白質(zhì)和氨基酸各種鑒定方法的特點和用途？結(jié)論？茚三酮反應(yīng)的陽性結(jié)果是否是同一色調(diào)？若不是，為什么？實驗八 蛋白質(zhì)的沉淀、變性反一、實驗?zāi)康牧私獾鞍踪|(zhì)的沉淀反應(yīng)、變性作用和凝固作用的原理及它們的相互關(guān)系；學(xué)習(xí)鹽析和透析等生物化學(xué)的操作技術(shù)。二、實驗內(nèi)容三.實驗過程蛋白質(zhì)的可逆沉淀反應(yīng)—蛋白質(zhì)的鹽析作用蛋白質(zhì)的不可逆沉淀反應(yīng)重金屬沉淀蛋白質(zhì)有機酸沉淀蛋白質(zhì)無機酸沉淀蛋白質(zhì)加熱沉淀蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)可逆沉淀與不可逆沉淀的比較四.作業(yè)與思考為什么雞蛋清蛋白可用作鉛中毒或汞中毒的解毒劑？蛋白質(zhì)分子中的那些集團可以與重金屬離子作用而使蛋白質(zhì)沉淀？有機酸、無機酸作用而使蛋白質(zhì)沉淀？高濃度的硫酸銨對蛋白質(zhì)溶解度有何影響，為什么？在蛋白質(zhì)可逆沉淀反應(yīng)的實驗中，為何要用蛋白質(zhì)氯化鈉溶液？實驗九 酵母RNA的提取與地衣酚顯色測定一、實驗?zāi)康腞NARNA理及具體方法。二、實驗內(nèi)容RNA三.實驗過程RNARNA標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作樣品的測定RNA四.作業(yè)與思考用你所學(xué)過的化學(xué)知識，分析三種催化劑：FeCl·6HO,CuCl·HO3 2 2 2和CuO,哪種催化劑的催化效果更好？RNA實驗十 動物組織DNA的制一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)鹽溶液法從動物組織中提取脫氧核糖核酸的原理及操作方法。二、實驗內(nèi)容以豬肝為原料用不同濃度的鹽溶液提取其中的脫氧核糖核酸。三.實驗過程DNADNA標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定樣品的測定DNA四.作業(yè)與思考DNA的降解和斷裂。DNA等方面加以比較。實驗十一 核酸濃度測定（1）——定磷一、實驗?zāi)康亩?、實驗?nèi)容三.實驗過程定磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定測定總磷量RNA樣品的消化、總磷量和回收率測定無機磷的測定測定磷的回收率有何意義？響較大？實驗十二 核酸濃度測定（2）——紫外線吸收一、實驗?zāi)康牧私庾贤饩€（UV）吸收法測定核酸濃度的原理，并進一步了解紫外分光光度計的使用方法。二、實驗內(nèi)容三.實驗過程標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制四.作業(yè)與思考干擾本實驗的物質(zhì)有哪些？設(shè)計排除這些干擾物的實驗。實驗十三 維生素A、B1、B2的定性鑒一、實驗?zāi)康腁、B1、B2二、實驗內(nèi)容維生素A的定性鑒定以及維生素B1、B2的定性鑒定。三.實驗過程AB（重氮試劑法）1B（熒光法）1B2四.作業(yè)與思考A、BB1 2

最豐富的天然食物。4A、B1

和B的基本原理。2SbCl3A4實驗十四 維生素C的定量測一、實驗?zāi)康?，6—C二、實驗內(nèi)容2，6—C三.實驗過程提取標(biāo)準(zhǔn)液的滴定樣品滴定計算四.作業(yè)與思考C為什么？C實驗十五 酶的激活劑、抑制劑及溫度對酶的活性的影一、實驗?zāi)康亩嶒瀮?nèi)容三.實驗過程四.作業(yè)與思考激活劑可分哪幾類？本實驗中的氯化鈉、硫酸銅屬于哪種類型？抑制劑與變性劑有何不同？試舉例說明。酶反應(yīng)的最適溫度是酶反應(yīng)的物理常數(shù)嗎？它與哪些因素有關(guān)？實驗十六 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測定（King氏法一、實驗?zāi)康恼莆昭骞缺D(zhuǎn)氨酶（SGPT）活力測定的方法，學(xué)習(xí)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并學(xué)習(xí)如何設(shè)計實驗。二、實驗內(nèi)容King三.實驗過程制備標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品及回收率測定結(jié)果計算標(biāo)準(zhǔn)曲線測定法標(biāo)準(zhǔn)管測定法四.作業(yè)與思考什么叫做轉(zhuǎn)氨基作用？根據(jù)所學(xué)理論闡明轉(zhuǎn)氨基作用在蛋白質(zhì)的合成與分解及糖、脂肪代謝中有何重要作用？回收率測定在實際工作中有何用途？實驗十七 乳酸脫氫酶活力測一、實驗?zāi)康腖DHLDH二、實驗內(nèi)容利用動物肌肉制備乳酸脫氫酶的組織提取液，用紫外分光光度法測定LDH的活力。三.實驗過程制備肌肉勻漿LDH蛋白質(zhì)含量測定數(shù)據(jù)處理1.簡述用紫外分光光度法測定以NAD+為輔酶的各種脫氫酶測定原理。實驗十八聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）PCRPCRPCR（瓊脂糖凝膠電泳法二、實驗內(nèi)容23SRNADNA106～476bpPCR370bp瓊脂糖凝膠電泳的方法對結(jié)果進行分析。返回頂部三．實驗學(xué)時安排（54第一學(xué)期實驗序號實驗名稱周次學(xué)時類型實驗1糖的呈色反應(yīng)及還原糖的檢驗3-43驗證實驗2脂類組成對脂類單分子層通透性的影響5-63驗證實驗37-83綜合實驗49-103綜合法實驗5氨基酸的分離與鑒定——濾紙層析法11-124綜合實驗6血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳13-144綜合實驗7蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)15-162驗證實驗8蛋白質(zhì)的沉淀、變性反應(yīng)15-162驗證實驗9RNA17-184驗證第二學(xué)期實驗序號實驗名稱周次學(xué)時類型實驗10動物組織DNA的制備3-43綜合實驗11核酸濃度測定（1）——定磷法5-63綜合實驗12核酸濃度測定（2）——紫外線吸收法7-83綜合實驗13維生素A、B1、B2的定性鑒定9-103驗證實驗14維生素C的定量測定9-104綜合實驗15酶的激活劑、抑制劑及溫度對酶的活性的影響11-124驗證實驗16血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測定（