NQO1蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義

NQO1蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義〔〕:

摘要：目的觀察并分析在結(jié)直腸癌組織中NQO1蛋白的表達(dá)和意義。方法選取本院2022年1月至2022年1月收治的結(jié)直腸癌患者100例，對NQO1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)進(jìn)展觀察。結(jié)果siRNAi組與正常組在24h、48h、72h時(shí)相比細(xì)胞活性顯著降低〔P

1資料和方法

1.1臨床資料。以2022年1月至2022年1月收治的100例結(jié)直腸癌患者為研究對象，男性50例，女性50例，最小年齡27歲，最大年齡85歲，平均〔59.98.9〕歲，腫瘤直徑為1.8-16.0cm，平均〔6.71.8〕cm；其中右半結(jié)腸癌、直腸癌、左半結(jié)腸癌分別為30例、35例、35例。

1.2方法。NQO1mRNA表達(dá)情況采取實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)展檢測，NQO1蛋白表達(dá)情況采取Westernblotting和免疫組化方法進(jìn)展檢測，采取siRNA技術(shù)來干擾結(jié)直腸癌細(xì)胞系思維8NQO1表達(dá)。所需設(shè)備：上海普迪生物技術(shù)消費(fèi)的ABI7300熒光定量PCR儀；鄭州南北儀器消費(fèi)的EL204梅特勒電子天平；NQO1和GAPDH一抗來自CellSignalingTechnology公司；爾康來自碧天公司；選用南京建成生物工程研究所制定的免疫組化檢測試劑。

1.3細(xì)胞和siRNA試驗(yàn)。從美國形式培養(yǎng)物保藏所選購人結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480，正常培養(yǎng)，將HepG2，2x105cell在干擾前孔鋪6孔板，改進(jìn)培養(yǎng)基使用無血清，干擾時(shí)間為細(xì)胞聚集度為40%。S干擾W480細(xì)胞中NQO1表達(dá)使用siRNA技術(shù)，在siRNAduplex-LipofectamineTMRNAiMAX按照LipofectamineTM商品說明書參加培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)過4h孵育后，更換為10%FBS培養(yǎng)基。測定細(xì)胞活力在干擾后，選購上?；蛑委熡行Ч镜膕iRNA細(xì)胞和正常組Contactin1靶標(biāo)。

1.4定量PCR檢測。提取組織總RNA用Trizol法，測定RNA純度和濃度采取紫外分光光度計(jì)，后取2g進(jìn)展逆轉(zhuǎn)錄，生成cDNA。采取SYBRgreen染料法進(jìn)展定量檢測。

1.5Westernbiot檢測。提取總蛋白，二奎琳甲酸測定蛋白質(zhì)含量后進(jìn)展凝膠電泳，樣本為20g，電轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯薄膜后，封閉2h使用3%的脫脂奶，孵育抗人NQO1和GAPDH一抗，4℃孵育過夜，TBST洗膜，孵育二抗后顯影。對條帶亮度分析。

1.6免疫組化。對5m石蠟切片染色，在10mmol/L檸檬鹽緩沖液〔pH6.0〕的熱激30min介導(dǎo)抗原復(fù)性，采取抗NQO1單克隆抗體孵育，4℃過夜，洗滌后孵育二抗，曝光使用顯色液。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)展分析，其中計(jì)數(shù)進(jìn)展chi;2〔%〕檢驗(yàn)，計(jì)量進(jìn)展t檢測〔s〕檢驗(yàn)，P

2.2新穎樣本NQO1mRNA、NQO1蛋白。結(jié)直腸癌組與非腫瘤組織相比NQO1mRNA、NQO1蛋白的表達(dá)量比照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P

2.3NQO1表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理學(xué)特征關(guān)系。結(jié)直腸癌患者樣本為腫瘤組織NQO1陽性率為58.00%〔58/100〕明顯高于臨近腫瘤組織NQO1陽性率16.00%〔16/100〕〔P

3討論

結(jié)直腸癌是臨床常見惡性疾病，具有較高的發(fā)病率。一般情況下，通過外科手術(shù)就可治療，但是當(dāng)癌細(xì)胞出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時(shí)，手術(shù)治療不可根治，且效果降低【3】。為盡早對疾病作出評估，找到結(jié)直腸癌預(yù)后生物標(biāo)志物非常重要，既可進(jìn)步治療效果，也可改善生活質(zhì)量【4】。

NQO1蛋白在很多癌癥中出現(xiàn)高表達(dá)的情況，如肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌等，有關(guān)研究認(rèn)為【5】NQO1可作為標(biāo)志物在腫瘤的檢測中。本次研究結(jié)果顯示，siRNAi組與正常組在24h、48h、72h時(shí)相比細(xì)胞活性顯著降低，說明NQO1會改變結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長和增殖才能改變。結(jié)直腸癌組NQO1mRNA和蛋白的表達(dá)量較非腫瘤組織相比明顯升高，結(jié)直腸癌患者臨近非腫瘤組織NQO1陽性率顯著低于腫瘤組織。NQO1表達(dá)與腫瘤直徑、TNM、結(jié)直腸癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系親密。從而說明NQO1可作為結(jié)直腸癌患者生物學(xué)標(biāo)志物。

參考文獻(xiàn)

【1】馬躍,林黎娟,樸豪杰,等.結(jié)直腸癌中NQO1蛋白表達(dá)的臨床病理及預(yù)后意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2022(4):366-370.

【2】周嬌嬌.表觀遺傳學(xué)對調(diào)控轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究miR-320a/b及ALDH1a3和NQO1甲基化對轉(zhuǎn)移調(diào)控作用研究[D].浙江大學(xué),2022.

【3】謝慧君,袁明明,王偉偉,等.結(jié)直腸癌患者NQO1蛋白檢測的臨床意義及疾病預(yù)后價(jià)值分析[J].醫(yī)學(xué)理論與理論,2022,30(17):2513-2516.

【4】孫立園,趙楊,劉莎莎,等.結(jié)直腸癌組織中IGFBP-3、u-PA蛋白的表達(dá)變化及其意義[J].山東醫(yī)藥,2022,58(23):51-53.

/r/