2022年醫(yī)學(xué)專題-大腸菌群檢驗(yàn)重點(diǎn)

大腸菌群檢測(cè)(jiǎncè)第一頁，共二十四頁。檢

驗(yàn)

程

序

檢樣25g(mL)樣品(yàngpǐn)+225mL稀釋液，均質(zhì)10倍系列(xìliè)稀釋選擇適宜3個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品(yàngpǐn)勻液，接種至月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯管不產(chǎn)氣產(chǎn)氣煌綠乳糖膽鹽（BGLB)肉湯不產(chǎn)氣產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陽性查MPN表報(bào)告結(jié)果36℃±1℃48h±2h36℃±1℃48h±2h檢樣初發(fā)酵復(fù)發(fā)酵報(bào)告第二頁，共二十四頁。檢樣固體(gùtǐ)樣品：在電子天平上稱取25g+225mL0.85%滅菌生理鹽水液體樣品：直接取用固體樣品存放罐第三頁，共二十四頁。固體樣品(yàngpǐn)稱量用鑷子取酒精棉擦手，點(diǎn)燃(diǎnrán)酒精燈；打開稀釋瓶蓋，放在天平上，等顯示屏上的數(shù)字穩(wěn)定后，按“去皮”鍵，當(dāng)顯示屏上的數(shù)字顯示為“0”時(shí)，可開始稱量。去皮鍵第四頁，共二十四頁。初發(fā)酵?。◣显嚬芗埽簡瘟瞎?支裝有0.85%滅菌生理鹽水(shēnglǐyánshuǐ)的生理鹽水(shēnglǐyánshuǐ)灌1個(gè)裝有9mL0.85%滅菌生理鹽水的試管3支第五頁，共二十四頁。操作步驟1.用酒精(jiǔjīng)棉消毒操作臺(tái)第六頁，共二十四頁。操作步驟2.用酒精(jiǔjīng)棉消毒雙手第七頁，共二十四頁。操作步驟3.點(diǎn)燃(diǎnrán)酒精燈第八頁，共二十四頁。操作步驟4.為裝有培養(yǎng)基的試管(shìguǎn)編號(hào)第九頁，共二十四頁。為試管(shìguǎn)編號(hào)編號(hào)原則：固體樣品：1、0.1、0.01（表示(biǎoshì)加入的固體樣品為1g、0.1g、0.01g）液體樣品：10、1、0.1（表示加入的液體樣品為10mL、1mL、0.1mL）雙料單料1110.10.10.10.010.010.011010101110.10.10.1第十頁，共二十四頁。用量筒(liángtǒng)量取225mL0.85%滅菌生理鹽水至稀釋瓶中。（注意：稀釋瓶、帶塞錐形瓶開蓋前要過火，量筒、裝有0.85%滅菌生理鹽水的錐形瓶及其塞子應(yīng)放在酒精燈周圍15cm的范圍內(nèi)）固體樣品(yàngpǐn)稱量后處理第十一頁，共二十四頁。液體樣品液體(yètǐ)樣品：直接吸取1mL樣液至單料管中1110.10.10.11mL1mL1mL注意(zhùyì)：加樣液后不能振搖試管。第十二頁，共二十四頁。液體樣品：吸取25mL液體樣品至稀釋瓶中，加入225mL0.85%滅菌生理鹽水，蓋上蓋子(gàizi)，混勻；從稀釋瓶中分別吸取1mL被稀釋10倍的飲用水至最后三支單料管中。液體樣品0.10.10.125mL1mL1mL1mL注意(zhùyì)：加樣液后不能振搖試管。第十三頁，共二十四頁。固體樣品：從稀釋瓶中吸取1mL樣液至裝有9mL0.85%滅菌(mièjūn)生理鹽水的試管中，蓋上蓋子，混勻；從該試管中分別吸取1mL樣液至最后三支單料管中。0.010.010.011mL1mL1mL1mL注意(zhùyì)：將樣液加入裝有稀釋液的試管后，振搖試管，混勻。樣液加入培養(yǎng)基后不能振搖試管。第十四頁，共二十四頁。觀察初發(fā)酵(fājiào)結(jié)果取回初發(fā)酵結(jié)果(jiēguǒ)，觀察。確定有幾支初發(fā)酵管內(nèi)的小倒管中有氣泡產(chǎn)生。第十五頁，共二十四頁。根據(jù)對(duì)初發(fā)酵結(jié)果(jiēguǒ)的觀察，有幾支小倒管中有氣泡，則取幾支煌綠乳糖膽鹽復(fù)發(fā)酵管。內(nèi)有小倒管復(fù)發(fā)酵第十六頁，共二十四頁。在有氣泡的初發(fā)酵管后的相應(yīng)(xiāngyīng)位置放上復(fù)發(fā)酵管用接種環(huán)移取有氣泡初發(fā)酵管中液體一環(huán)至相對(duì)(xiāngduì)應(yīng)的復(fù)發(fā)酵管中。（注意接種環(huán)的灼燒、冷卻）第十七頁，共二十四頁。將接種(jiēzhòng)好的初發(fā)酵管和復(fù)發(fā)酵管放入恒溫培養(yǎng)箱。注意選擇設(shè)置為36℃±1℃的培養(yǎng)箱。36℃±1℃48h±2h

第十八頁，共二十四頁。觀察復(fù)發(fā)酵結(jié)果，小倒管內(nèi)有氣泡(qìpào)為陽性（+），無氣泡(qìpào)為陰性（-）。+--+---+-注：初發(fā)酵管產(chǎn)氣，復(fù)發(fā)酵結(jié)果(jiēguǒ)可能產(chǎn)氣，也可能不產(chǎn)氣。第十九頁，共二十四頁。查MPN表

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11第二十頁，共二十四頁。檢驗(yàn)結(jié)果記錄檢樣量初發(fā)酵結(jié)果（管）復(fù)發(fā)酵結(jié)果（管）陽性管數(shù)10mL／／／／／／／1g（或mL）+--+--10.1g（或mL）++-+--10.01g（或mL）-+--+-10.001g（或mL）／／／／／／／培養(yǎng)條件溫度：時(shí)間：溫度：時(shí)間：檢驗(yàn)結(jié)果MPN/g=1.1備注標(biāo)準(zhǔn)值：單項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)論：符合（不符合）檢驗(yàn)(jiǎnyàn)人：檢驗(yàn)(jiǎnyàn)日期：固體(gùtǐ)樣品第二十一頁，共二十四頁。檢驗(yàn)結(jié)果記錄檢樣量初發(fā)酵結(jié)果（管）復(fù)發(fā)酵結(jié)果（管）陽性管數(shù)10mL+--+--11g（或mL）++-+--10.1g（或mL）-+--+-10.01g（或mL）／／／／／／／0.001g（或mL）／／／／／／／培養(yǎng)條件溫度：時(shí)間：溫度：時(shí)間：檢驗(yàn)結(jié)果MPN/mL=0.11備注標(biāo)準(zhǔn)值：單項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)論：符合（不符合）檢驗(yàn)(jiǎnyàn)人：檢驗(yàn)(jiǎnyàn)日期：液體(yètǐ)樣品第二十二頁，共二十四頁。小結(jié)本次檢驗(yàn)操作共?。弘p料管3支，單料管6支，裝有滅菌生理鹽水(shēnglǐyánshuǐ)的錐形瓶1個(gè)，裝有9mL滅菌生理鹽水的試管1支（固體樣品），復(fù)發(fā)酵管若干支（根據(jù)初發(fā)酵結(jié)果）本次檢驗(yàn)操作共用：固體樣品：10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接種環(huán)液體樣品：25mL移液管1支，10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接種環(huán)第二十三頁，共二十四頁。內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)大腸菌群檢測(cè)。檢樣。36℃±1℃。裝有0.85%滅菌生理鹽水的生理鹽水灌1個(gè)。（注意：稀釋瓶、帶塞錐形瓶開蓋前要過火，量筒、裝有