膜片鉗之儀器操作與維護(hù)篇

膜片鉗之儀器操作與維護(hù)篇膜片鉗之儀器操作與維護(hù)篇膜片鉗之儀器操作與維護(hù)篇xxx公司膜片鉗之儀器操作與維護(hù)篇文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度膜片鉗之儀器操作與維護(hù)篇1、電極一旦拉制成功后，其尖端必須作進(jìn)一步的處理。目的之一是為了減小電極內(nèi)部與溶液之間的電容，即在電極末梢前數(shù)微米處，涂敷一層疏水材料，如硅酮樹脂（Sylgard）。這種物質(zhì)能夠防止液膜爬上電極。另一目的是為了對電極尖端作優(yōu)化處理，如同熱拋光的方法使電極尖端光滑、周圍均勻，以提高實(shí)驗(yàn)過程中的封接成功率。2、關(guān)于電極的問題

a.潔凈的電極是封接的關(guān)鍵。電極需要在使用前拉制完成放在密閉容器中，通常在12小時(shí)內(nèi)用掉比較好；

b.內(nèi)液（確切的說是電極液）需要過濾；

c.在電極入水之前可以加一個(gè)正壓，可以吹開電極尖端的液體及灰塵；

d.如果不用灌流的話，最好bathsolution也要過濾。e、電極拉制成功以后，常置于一有蓋的容器內(nèi)，2-3小時(shí)內(nèi)必須使用，電極使用前要進(jìn)行充灌。在充灌前，電極內(nèi)液要用的濾膜或?yàn)V紙進(jìn)行過濾。利用玻璃管的虹吸作用，溶液可從電極尖端吸入，也可利用5ml注射器在尾端加負(fù)壓以實(shí)現(xiàn)充灌，隨后電極從尾端充灌。電極內(nèi)液不能漏到夾持器，會使其內(nèi)表面變濕形成薄膜從而產(chǎn)生熱噪聲，在充灌時(shí)，電極內(nèi)出現(xiàn)的氣泡可以通過輕敲電極而消失。3、降低噪聲的關(guān)鍵是地線和屏蔽，第一地線接地要好；第二要注意將一些容易產(chǎn)生噪聲的設(shè)備屏蔽好，比如顯微鏡燈光的電源、電動(dòng)微超的馬達(dá)、監(jiān)視和記錄的電腦以及一些可能產(chǎn)生噪聲的電源線，總之你可以用排除法一一試驗(yàn)，肯定會降低噪聲的，一般降低到幾個(gè)pA/fA級即可。另外，你的負(fù)壓也可以用一個(gè)“U”形管通過3通管加上。我認(rèn)為屏蔽很重要哦，以前我在實(shí)驗(yàn)中，常遇到電極入水后方波有50HZ干擾，有時(shí)還跳動(dòng)，很是心煩，想了很多辦法就是去不掉，包括接地線，鍍銀絲、參比電極，清洗Holder等等，甚至懷疑儀器有問題，感到有些絕望了！

后來發(fā)現(xiàn)灌流時(shí)干擾明顯，把灌流裝置控制電源搬到法拉第籠子外，一切就ok了！而且發(fā)現(xiàn)只要有電源線進(jìn)入屏蔽籠，即使沒有通電，也有交流干擾，所以所有進(jìn)入屏蔽籠的電源線都應(yīng)該用屏蔽線（而不是一般電線）。

我體會到在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中一定要“消滅”各種干擾，這樣結(jié)果才可靠，而消除干擾靠什么Itis屏蔽！你可以用做鐵籠子的鐵絲網(wǎng)罩住顯微鏡電源，若沒有屏蔽線，可以用保鮮用的錫紙包裹導(dǎo)線，只要是pA/fA就可以做了！

4、關(guān)于干擾的問題我有以下幾點(diǎn)看法：

a、屏蔽室是必要的，盡管有時(shí)候看起來作用不大，但是如果外界的電磁干擾很大，這時(shí)候它的作用就顯示出來了。

b、避免干擾的一個(gè)原則就是要將屏蔽室內(nèi)外的各個(gè)可能產(chǎn)生電磁干擾的儀器一定要接地，有時(shí)候一個(gè)儀器有好幾個(gè)零部件，有些部件之間是絕緣的，此時(shí)就要將絕緣的部分分別都接地。

c、同一個(gè)部件不要重復(fù)接地，有時(shí)候也可能產(chǎn)生干擾的。

d、關(guān)于顯微鏡的問題：

屏蔽到是沒有必要，只要兩根線就解決了

1）將顯微鏡的燈罩打開，在內(nèi)部的螺絲上接出一根線

2）在顯微鏡的臂上的螺絲上接一根線

e、此外，浴槽電極與灌流液一定要接觸良好，否則的話也會出現(xiàn)干擾的，有時(shí)候開始還挺好，幾乎沒有干擾，但是在記錄的過程中自己什么也沒有動(dòng)，就突然出現(xiàn)干擾了，很大的一部分原因就在此。這個(gè)問題曾經(jīng)也是困擾了我好長時(shí)間，體會很深的。

f、接地線到是沒有特殊的要求，只要一般的電線就可以了

g、不要讓液體流出來（包括灌流和引流的液體），淌到實(shí)驗(yàn)臺上或是地面上，這也是產(chǎn)生干擾的一個(gè)重要的原因。

h、我也很贊成開心果果的意見，實(shí)驗(yàn)臺和實(shí)驗(yàn)儀器一定要整齊有序，恐怕每個(gè)實(shí)驗(yàn)室也都是這樣要求的吧

5、屏蔽線就是用銅網(wǎng)屏蔽電源線，電子市場有賣的。一般用兩相線，外面包有一層銅網(wǎng)，需要注意的是：

（1）電線規(guī)格，我們用的電線直徑，這對220V足夠了，太細(xì)滿足不了儀器負(fù)荷。

（2）屏蔽線的連接，一端接插頭的零線，另一端接儀器的外殼（零線），且插座零線要接地（不能虛設(shè)）。

（3）電線接頭處要連接緊密，并用熱縮管套牢。

6、只要灌流裝置電源線沒有很好屏蔽，即使拔掉插頭，仍然有干擾，不信你試著在有干擾時(shí)把灌流裝置搬離法拉第籠子，看看有什么效果這種方法就叫排除法（把法拉第籠里的有可能產(chǎn)生干擾的東西一件一件地搬出來，逐漸排除）。浴槽電極與灌流液一定要接觸良好，否則的話也會出現(xiàn)干擾的，我也遇到過這種情況，建議大家在實(shí)驗(yàn)前把浴槽電極固定好。7、我認(rèn)識美國KANSAS大學(xué)的一位做膜片鉗的教授，他說他的實(shí)驗(yàn)室就不用屏蔽，已經(jīng)運(yùn)轉(zhuǎn)了十多年了，也沒有什么問題。他建議我們也不要用屏蔽，我不知道這樣做是否可行，或者國外的實(shí)驗(yàn)室本身就與國內(nèi)不同，他們能不用屏蔽，但我們就不行。說實(shí)話，我也認(rèn)為沒有屏蔽怎么可能，但的確開始的時(shí)候是沒有噪音干擾的，后來也出現(xiàn)了一些噪音，我想屏蔽的作用應(yīng)該是不可忽視的！8、硫酸鎂和氯化鈣其實(shí)都是ACSF中的成分，只是我們先把他們配成水溶液，因?yàn)槿绻怨腆w形式和ACSF中的其他成分一起配制，會產(chǎn)生碳酸鎂和碳酸鈣沉淀。9、前兩天在安裝HOLDER的時(shí)候，把銀絲弄斷了，我去外面的金銀商店做了一根，好象比以前的粗一些，彈性不是很好，鍍銀以后裝上去使用，想問問各位，這樣是不是回對實(shí)驗(yàn)本身產(chǎn)生影響呢膜片鉗的每一部分最好都是廠家的原裝產(chǎn)品，盡管銀絲是很普通的東西，但在作工和規(guī)格上應(yīng)該還是有差異的。你可以向廠家說明一下情況，向他們索要或購買比較好。10、玻璃微電極：

常用尖端μm，向細(xì)胞內(nèi)插入時(shí)，需小于μm（細(xì)胞直徑的1/10~1/100），且尖端的傾斜度應(yīng)相當(dāng)緩和，一般微電極可分為金屬微電極和玻璃微電極兩類。

金屬微電極，現(xiàn)多用鍍鉑鎢絲電極（platinum-platedtungstenelectrode），在鎢絲上鍍鉑，可極大改善電極的電學(xué)特性，噪聲可大大降低，加之機(jī)械強(qiáng)度大，適合長期體外記錄（paréD，GaudreauH.Projectioncellsandinterneuronsofthelateralandbasolateralamygdala:distinctfiringpatternsanddifferentialrelationtothetheraanddeltarhythmsinconsciouscats.JNeursci,1996,16(10):3334-3350

現(xiàn)要也常用鍍銀碳纖維電極。玻璃微電極記錄易受機(jī)械位移的影響，加之尖端的電解質(zhì)會漏出或堵塞，不適合半小時(shí)以上的長時(shí)間記錄，玻璃微電極可分單管和多管微電極。

11、毛坯管在國外多用Pyrex管，國內(nèi)多用GG-17和95料玻管。細(xì)胞外記錄多采用外徑-2mm玻璃，細(xì)胞內(nèi)記錄則采用外徑1mm細(xì)玻管，內(nèi)外徑之比約為2：3或5：6，長6-8cm。拉制前必須經(jīng)過清潔處理。

玻璃毛坯管分為兩類：軟玻璃（蘇打玻璃、電石玻璃）和硬玻璃（硼酸玻璃、鋁硅玻璃、石英玻璃）。軟玻璃熔點(diǎn)低，易于拋光處理，拉制成功后，有1-2MΩ的電阻，這種電極常用于作全細(xì)胞記錄，其串聯(lián)電阻或說得確切一點(diǎn)，噪聲高低是一個(gè)限制因素。軟玻璃較大的介電松弛特性，有時(shí)也產(chǎn)生電容瞬態(tài)分量，從而影響電容補(bǔ)償?shù)男Ч?。硬質(zhì)玻璃微電極拉制成具有較窄的末梢，因而具有較高的電阻。硬質(zhì)玻璃具有較好的噪聲和介電松弛特性；介電損失參數(shù)，這個(gè)參數(shù)描述玻璃的交流電導(dǎo)率。軟玻璃在1KHZ的電導(dǎo)率，足以構(gòu)成膜片記錄中的主要熱噪聲源。硅硼和鋁硅玻璃的介質(zhì)損失低，是低噪聲記錄的理想電極玻璃。石英玻璃特別適用于作低噪聲記錄，但需要激光源進(jìn)行拉制。

12、清潔液：用等量的（250ml）王水（可反復(fù)應(yīng)用）。一般毛坯管捆成把放入清潔液中1-2h，取出自來水沖洗20-30min，再放入無水酒精中洗滌，再放入盛滿蒸餾水燒杯中加熱煮沸10min，倒去蒸餾水，再換新蒸餾水反復(fù)3次，再放入烤箱中烤干，備用，切不可用市售的洗滌劑，以防降低電極充灌液的表面張力而影響沖灌。13、充灌液常用3mol/LKCl，為避免Cl-擴(kuò)散，也可用2mol/L醋酸鉀或檸檬酸鉀充灌，也有人用LNaCl（低濃度）充灌可降低噪音。細(xì)胞外記錄時(shí)，最后再用3-4mol/LNaCl+2%旁胺天藍(lán)溶液定位。在膜片鉗中還常加鈣螯合劑，如EGTA。阻抗與不同組織相關(guān)。注：微電極中高濃度充灌液易蒸發(fā)，造成電極回路的開路，因此常在微電極插入Ag-AgCl絲或鉑金絲后，在微電極尾部開口處涂上一層凡士林，防止水分蒸發(fā)。離體標(biāo)本的灌流注，如ACSF。其中緩沖液成分有兩種，一是重碳酸鹽（bicarbonate）：溫度低（4℃14、電生理實(shí)驗(yàn)中噪聲和干擾的形成和排除。

（一）來源。

1．干擾信號與生物電生理信號的鑒別。準(zhǔn)確區(qū)分生物電信號與干擾的偽跡是電生理實(shí)驗(yàn)的先決條件。

2．來源。主要有三個(gè)方面：

其一。物理性干擾。1）靜電和電磁的干擾：實(shí)驗(yàn)室附近高壓電，室內(nèi)日光燈可產(chǎn)生50Hz的靜電干擾，尤其是交流電，尤其是50Hz頻率干擾最大（電子設(shè)備為50Hz）。其特點(diǎn)是幅度大，波形規(guī)則。2）噪聲干擾：電子元件本身產(chǎn)生雜亂無章電壓和電流稱噪聲，一般與放大器內(nèi)部元件的質(zhì)量與性能有關(guān)。

其二。接地不良。1）地線電阻應(yīng)小。2）儀器故障。產(chǎn)生漏電電流，在地線上形成電位差，產(chǎn)生干擾。3）地線行走過程中打圈，形成線圈，易接受電場和磁場的干擾。4）各儀器設(shè)備應(yīng)采用一點(diǎn)接地的方式，若采用多點(diǎn)接地，形成大地回路，也會引起干擾。5）地線過長與電源線形成交流環(huán)路。6）誤用市電三孔中性線作為大地線（中性線上有4-5A電流）。

其三。生理性干擾。1）大腦電活動(dòng)時(shí)，眨眼、眼球運(yùn)動(dòng)均對腦電具有干擾作用。2）實(shí)驗(yàn)中環(huán)境溫度過低，動(dòng)物寒戰(zhàn)、抖動(dòng)，引起肌電的發(fā)放而干擾記錄，或因呼吸運(yùn)動(dòng)引起記錄部位機(jī)械位移引起干擾信號。3）心電干擾，頻率與心電一致。

（二）排除。

1．物理性干擾。1）屏蔽法：用于低頻電和靜電干擾，屏蔽線分布電容較大，線與線之間不可平行排列，更不可為了美觀而將多線扎在一起，這會加大分布電容，易偶合高頻干擾噪聲。2）遠(yuǎn)離法。3）改變位置法。依電流方向相反，產(chǎn)生反向磁場的原理，改變各個(gè)儀器的位置或放大器輸入的方位，會使干擾磁場抵消，微電極放大器探頭阻抗高，易引入干擾，實(shí)驗(yàn)前可反復(fù)調(diào)整其方向和位置。4）微電極記錄時(shí)盡量減少微電極本身的阻抗，減少輸入阻抗及干擾信號在這個(gè)阻抗上形成干擾電壓降，微電極到探頭的連線<5cm。5）用監(jiān)聽器監(jiān)聽噪聲，以便及時(shí)排除。

2．儀器質(zhì)量，盡量改進(jìn)。

3．接地不良。地線應(yīng)盡量短粗，不能與電源線平行或打圈，不要接在電源線的中性線上，地線單獨(dú)埋設(shè)，埋置處應(yīng)較潮濕，附近無大型變壓電動(dòng)機(jī)，并在坑內(nèi)加些食鹽。

4．檢查各儀器是否漏電。

5．慢生物電變化時(shí)用乏極化電極，實(shí)驗(yàn)對象宜安靜，勿受振動(dòng)。

15、細(xì)胞內(nèi)微電極記錄

多用幼年離體標(biāo)本，其原因：1）幼年動(dòng)物骨骼骨化不完全，結(jié)締組織少，神經(jīng)組織易于分離，標(biāo)本耐缺氧能力強(qiáng)，有的標(biāo)本可存活數(shù)小時(shí)至數(shù)天，但標(biāo)本也可能發(fā)育不完全，如背根和腦干到脊髓的投射纖維要到三周動(dòng)物才完全。神經(jīng)纖維髓鞘化不全，其藥理作用與成年動(dòng)物也不同。從實(shí)驗(yàn)角度上講，脊髓背腹根短，不利于電生理刺激記錄。小鼠一般應(yīng)小于15g，制備標(biāo)本才有可能成功，而這樣小鼠背腹根神經(jīng)節(jié)不利于電生理實(shí)驗(yàn)。最適合的動(dòng)物是金黃地鼠（hamster），介于大小鼠之間，制備標(biāo)本活性很好，可能與其冬眠習(xí)性有關(guān)，而且其脊髓背腹根長達(dá)20-25mm，利于電生理記錄。動(dòng)物選擇仍依實(shí)驗(yàn)而定，同一標(biāo)本，不同中樞結(jié)構(gòu)對缺氧耐受力也不同。金黃地鼠，若觀察脊髓背角神經(jīng)元活動(dòng)，可用150-160g體重的鼠均可，但要研究腹角神經(jīng)元，則體重不宜超過30g。

16、膜片鉗實(shí)驗(yàn)封接過程中，防震臺非常重要，電極抖動(dòng)主要與臺子有關(guān)，而與橡皮管關(guān)系不大。橡皮管的長度與粗細(xì)和封接的難易有較大關(guān)系，應(yīng)該是越近holder時(shí)，管徑越細(xì)，且管子不應(yīng)該太長。如果太長，給的負(fù)壓就更易分散（相當(dāng)于表面積大，單位負(fù)壓就很小）。我們實(shí)驗(yàn)室用的是一種硅膠管，從老師德國帶回來的，不過我見過其它實(shí)驗(yàn)室用一般的硅膠管做DRG細(xì)胞，也挺好的。17、我們這個(gè)軟件是華中隨機(jī)器送的呀。每次電壓鉗轉(zhuǎn)成電流鉗都需要面板和軟件一起調(diào)，protocol的holding電壓要手動(dòng)調(diào)節(jié)，加了一個(gè)searcih模式，還好，省著每次用offset找基線了。不過，我感覺最大的優(yōu)點(diǎn)是干擾好像和axon差不多，平時(shí)好像還要好一點(diǎn)。pc2c剛拿到手，用的還不熟。只是覺得沒有表顯示電流很不方便。電壓表始終顯示holding電壓，與設(shè)置的電壓一致，意義不大呀。18、我想做膜片鉗實(shí)驗(yàn)，要買試劑不知道西安哪個(gè)公司的好，還便宜，另外我要買CsOH和玻璃微電極，西安有嗎怎么查不到呢

CsOH最好買Sigma公司的，可以從華美等公司訂，但價(jià)格確實(shí)比較高，1200/50g。玻璃電極一般要到上海買，可以從網(wǎng)絡(luò)上查找，然后郵購。

19、CsOH與CsCl均購自美國Sigma公司，其代碼是多少？

不好意思，查了半日也沒查到，而且發(fā)現(xiàn)sigma的同一個(gè)產(chǎn)品常有好幾個(gè)代碼，由于以前實(shí)驗(yàn)室沒做過這方面的工作，而且本人也沒做過patch，所以總擔(dān)心買到的試劑不好用。同一個(gè)藥，不同的代碼有什么區(qū)別嗎FW代碼包裝

CsCl

氯化銫

Sigma

C-3011

50g

CsOH

氫氧化銫

Sigma

C-8518

50g

一般不同的代碼是適用于不同的純度，或用于不同的實(shí)驗(yàn)如：細(xì)胞培養(yǎng)等。我實(shí)驗(yàn)中用的Sigma代碼：CsOHC851850gFW、CsClC3139FW、BaCl2B075020、請問,各位,我們用的200Ｂ的放大器，為什么總是超載呢是軟件設(shè)置的問題，還是硬件的問題我用的也是200B，以前我也碰到過overload的情況，提供幾個(gè)方面的原因供你參考：

1）.保證電極拉制質(zhì)量，沒有斷頭、過粗現(xiàn)象。

2）.holder和參比電極的銀絲要鍍得均勻，時(shí)間過久則需要重新鍍銀。

3）.接地良好。

4）.細(xì)胞外液、電極內(nèi)液配制合理，滲透壓、PH保證在正常范圍內(nèi)，并用濾膜過濾去除雜質(zhì)細(xì)菌。

5）.入水后適當(dāng)調(diào)節(jié)液接電位（我的offset值就調(diào)在4～5之間），如果是這方面原因，那么肯定會恢復(fù)正常的。

21、請教戰(zhàn)友：做腦片膜片鉗暫時(shí)沒有振動(dòng)切片機(jī)，可以用別的切片機(jī)替代嗎或是有什么救急的辦法另外，請?zhí)峁讉€(gè)常用的切片機(jī)以供選擇。1），對大部分腦組織來說，薄片標(biāo)本必須用振動(dòng)切片機(jī)來切。但是也有例外，比如海馬腦片可以用保險(xiǎn)刀片手工切取。不知道你需要的標(biāo)本部位；

2），振動(dòng)切片機(jī)國產(chǎn)的有浙江象山牌，10年前很多實(shí)驗(yàn)室都用這個(gè)，性能基本可以。但是不知道現(xiàn)在廠家倒閉了沒有。因?yàn)楝F(xiàn)在絕大部分實(shí)驗(yàn)室用的都是進(jìn)口的；

3），進(jìn)口振動(dòng)切片機(jī)產(chǎn)品主要有：美國公司；日本京都的堂坂株式會社（DTK-1500）和德國萊卡公司產(chǎn)品等；

4），振動(dòng)切片機(jī)是成功制備標(biāo)本的關(guān)鍵設(shè)備，對其振動(dòng)幅度，前進(jìn)速度，搖擺幅度等都有嚴(yán)格的要求，基本沒有救急的替代辦法。22、實(shí)驗(yàn)室買了一套腦片膜片鉗設(shè)備，主要的東東都有了，因?yàn)闆]有經(jīng)驗(yàn)，不知是否缺什么外圍設(shè)備（有時(shí)雖不貴卻很重要），比如振動(dòng)切片機(jī)，現(xiàn)把主要設(shè)備貼出來，請各位戰(zhàn)友指點(diǎn)。

1）.膜片鉗放大器EPC-10Double

2）.微操縱器PCS-5400

3）.微電極控制儀

4）.PCS-5000Steep/ShallowHeadstageBracket

5）.腦片灌流設(shè)備

6）.腦片移動(dòng)平臺

7）.IR1000紅外CCD

8）.BX51WI固定載物臺正立顯微鏡

9）.電極拉制儀、拋光儀

10）.防震臺、屏蔽網(wǎng)

23、.我看了幾個(gè)單位的PATCH,他們都沒有要外加的刺激器和示波器.僅有PATCHCLAMP(AXONPATCH200B和A/D(1322A)轉(zhuǎn)換卡.我們想PATCHCLAMP里有方波刺激,電腦顯示屏能代替示波器.于是我們也參照他們的線路聯(lián)接.結(jié)果就是不能正常地測電阻.

誰能告訴我們AXONPATCH200B和A/D1322轉(zhuǎn)換器正確的連接線路嗎？

1,由PATCHCLAMP和A/D組成的如何連接

2.由PATCHCLAMP和A/D以及示波器組成的連線.1），要不要刺激器，取決于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。如果只需要通過電極細(xì)胞內(nèi)刺激，當(dāng)然不需要刺激器。而如果需要在細(xì)胞外產(chǎn)生刺激（例如刺激突觸前遞質(zhì)分泌），則非用不可；

2），示波器顯示變化比電腦快，有的實(shí)驗(yàn)室還用。這是各人習(xí)慣問題，有人說用示波器“太土”，是一種不了解情況的說法；

3），接線方法有二：

（1）徹底搞清法（費(fèi)時(shí)，但對今后有好處）：仔細(xì)對照軟件使用指南，上面有詳細(xì)說明；

（2）囫圇吞棗法（省事，立即可用）：照貓畫虎，看別人的連接方法，然后拷貝別人的程序，保證可以運(yùn)行。是為拋磚引玉。24、PATCH實(shí)驗(yàn)中,用MODELCELL測試儀器時(shí),CONFIGURE有三種,分別是"BATH,CELL,PATCH"三種狀態(tài),它們分別用MEMBRANETESTANDSEALTEST中的那種形式測試,ANDWHY測試后達(dá)不到規(guī)定的大小10M或10G,這又是何因所致呢他們是模擬試驗(yàn)過程用SEALTEST測定，檢驗(yàn)機(jī)器狀態(tài)。

按說明書設(shè)置，仍不能達(dá)正常值，可以聯(lián)系axon公司他們要序列號的25、我想問一下有經(jīng)驗(yàn)的各位老師,電極拉制時(shí)想讓電極尖端后面的肚子胖些,應(yīng)該怎樣調(diào)整參數(shù),兩步拉制儀,當(dāng)尖端大小合適時(shí)是不是應(yīng)該把拉力增大才會讓它胖起來呢

把第一步拉的長度調(diào)短一些，拉力增大一些。如果口徑大了，再把第二步溫度調(diào)高些。26、做細(xì)胞貼附式單通道記錄電極一定要拋光、一定要用硬玻璃嗎另外硅酮樹脂哪里買。謝謝據(jù)我所知，四軍醫(yī)大生理高天明（長江學(xué)者）那里作貼附式單通道，電極不拋光，也不涂硅酮樹脂。但單通道一般用硬玻璃，因?yàn)檐涃|(zhì)玻璃電導(dǎo)較高，噪聲比硬質(zhì)玻璃大，而單通道電流小，最重要的是干擾要小。27、電極老是堵，有臟東西，很難完全避免，大家有什么好辦法嗎原因大概有兩點(diǎn)：1）浴液太臟；2）.電極液有未溶藥物顆粒解決辦法：1）浴液太臟一般由于將細(xì)胞懸液加入浴槽時(shí)，最好先將細(xì)胞懸液離心去除消化過程中產(chǎn)生的其它組織碎片；如果采用細(xì)胞鋪片，最好預(yù)先用浴液將玻片漂一下，再放入浴槽。建議在電極入水前加1－2cm水柱的正壓，讓電極內(nèi)的電極液有一種要流出的趨勢，可以防止浴液中的異物堵住電極尖端，細(xì)胞封接時(shí)再放掉正壓。2）.可以在電極液灌注時(shí)在注射器前端加用過濾器將電極液中未溶藥物顆粒濾掉。如果做全細(xì)胞膜片鉗時(shí)電極液中需加能量物質(zhì)，則最好是將不含能量電極液先過濾后再加能量物質(zhì)，防止過濾時(shí)能量物質(zhì)丟失。28、請問電極在溶液中通電時(shí)，電極的表面產(chǎn)生氣泡，如何消除這些氣泡我用的是Ag/Agcl電極。當(dāng)我把電極放在溶液中時(shí)，一通電就會產(chǎn)生氣泡，又沒有好的試劑或者方法解除這個(gè)問題呢是不是一定要用膜片鉗才可以避免這個(gè)問題的如果用的Ag/AgCl電極好的話，不應(yīng)該產(chǎn)生氣泡。是你的Ag電極表面的AgCl鍍層不完整了，所以通電時(shí)，電解H2O，產(chǎn)生氣體。把電極用砂紙打磨干凈，重新鍍AgCl。29、我使用SUTTER公司的P-97拉制儀,南京六合生產(chǎn)的外徑是1.6mm的玻璃毛坯管來拉制玻璃微電極,拉制程序如下：1）heat=RAMP+20pull=15velocity=75time=1502）heat=RAMP+20pull=15velocity=75time=1503）heat=RAMPpull=20velocity=80time=100但是玻璃微電極的電阻只有0.2M歐。我想拉制1~2M歐的玻璃微電極進(jìn)行細(xì)胞外記錄，請教各位高手如何設(shè)置P-97拉制儀的拉制程序你好，你所使用的程序是用來拉微電極(Microelectrode)的，不是來拉膜片鉗電極的。拉膜片鉗電極的時(shí)候，要把Pull=0，而后調(diào)節(jié)velocity，一般80左右，loop是1次。一般1次就可以了。但是sutter的說明書上說要3次的最好，照說明書調(diào)就可以了。我用heat=RAMP+15pull=0velocity=80time=200，一般都在3-5之間。30、哪位知道如何讓電極鍍氯化銀買一節(jié)5號電池,找一個(gè)培養(yǎng)皿,放一些NaCl溶液,把電極用一根導(dǎo)線連接到電池的正極,另一根導(dǎo)線連接電池的負(fù)極,將兩根導(dǎo)線的另一端同時(shí)放入NaCl溶液中,1-2分鐘后,電機(jī)的尖端變黑就可以了你用砂紙把銀絲打磨一下再試。負(fù)極用一個(gè)鉑金絲或干電池中的碳棒。我用碳棒效果很好的，用舊電池的原因是為了減小電流，這樣鍍的電極不易脫。電流盡量小，控制在1ma內(nèi)，可以在電路中串聯(lián)一個(gè)電阻和電流表。31、請問各位師兄，我在上海，要做鈣通道，電極內(nèi)液一定要加GTP嗎Tris堿、CsCl、CsOH、TEA(orTEACl)、4-AP、TTX在上海哪個(gè)公司能買到啊，最好是國產(chǎn)的。能不能提供一下聯(lián)系方式或代理一查怎么都是進(jìn)口的啊。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，做鈣通道時(shí)基本都要加能量物質(zhì)如Mg－ATP,Na2ATP,等，防止出現(xiàn)rundown現(xiàn)象，至于其他的那些試劑除了TTX，我都是選用sigma公司的，國產(chǎn)的很難查到，查到了還是代理國外的，所以不如直接從sigma定購，估計(jì)一個(gè)月之內(nèi)都可以到了。不過TTX倒是可以買國產(chǎn)的，河北水產(chǎn)研究所，200元/支，我一次買了五支，你可以和他們聯(lián)系一下！32、我想使用的是南京六合生產(chǎn)的外徑是或1.8mm的玻璃毛坯管來拉制膜片鉗電極,但是我試了很久都沒有找到合適的拉制程序.有哪位高手使用的是SUTTER公司的P-97拉制儀,或者NARISHIGE公司的PC-10拉制儀,可以告知一下拉制程序怎么設(shè)置嗎謝謝!我們使用的是PIP5，程序如下A:1899度，即最高溫度B:730度開始，逐漸降低至針尖不斷的最低溫度33、我是一名研究生,今年就要畢業(yè)了.最近導(dǎo)師布置了個(gè)任務(wù),他想建立一個(gè)電生理實(shí)驗(yàn)室,要做摸片鉗實(shí)驗(yàn).要我查找所需儀器.因?qū)﹄娚聿皇?也沒有找著合適的方案.馬上就要畢業(yè)答辯了.時(shí)間很緊張.故求助高手幫忙.開展次實(shí)驗(yàn)所需的主要儀器、生產(chǎn)廠家、型號及大概價(jià)格。哪舉辦此向技術(shù)的學(xué)習(xí)班。其實(shí)你可以找一家代理公司，讓他們給推薦，他們會給你一個(gè)詳細(xì)的配置單及價(jià)格。我們這兒現(xiàn)有的一套是這樣的。HEKApatchclampampilifer:EPC10doublesuttermicromanipulator:MP-285invertedmicroscope:(哈，我們是國產(chǎn)的。重光xds-1b)olympusix71(singlecell)puller:P-97IsoStationvibration:Newprot還有拋光儀，屏蔽籠。對于腦片膜片鉗，需用正置紅外顯微鏡，配震動(dòng)切片機(jī)。34、電極老是堵，有臟東西，很難完全避免，大家有什么好辦法嗎首先，將電極毛坯用濃硝酸和無水乙醇洗干凈，用去離子水沖洗干凈烘干；再把灌注用的毛細(xì)管內(nèi)外用去離子水洗干凈；最后，使用的電極內(nèi)液用22微米的濾膜過濾后使用。這樣一般就可以避免電極內(nèi)部臟了。電極堵很常見，只要不影響電極入水電阻的大小，我認(rèn)為不必要非得一塵不染。還有買來的電極我們只需用甲醇浸泡，不要用任何水沖洗，直接放入50度烘箱中烘烤置干就可。有時(shí)做膜片嵌好象覺得任何步驟中的一步有問題，就是導(dǎo)致鉗制不好，記不出電流的一個(gè)或幾個(gè)原因，其實(shí)我們還是覺得關(guān)鍵在于細(xì)胞的狀態(tài)——至高無上。35、請問！做干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)，想用TTX阻斷逐漸分化的干細(xì)胞的TTX敏感性鈉通道，但如何確定TTX加的量呢若用膜片鉗測不出某個(gè)細(xì)胞的鈉電流，但怎么說明其他細(xì)胞也都被阻斷了請購賣日本光電公司的成套產(chǎn)品及監(jiān)視系統(tǒng)，性能比較穩(wěn)定、價(jià)格大約30萬元左右。36、多管電極拉制儀介紹多管電極拉制儀（PV-4型，日本Narishige）為半自動(dòng)電極拉制儀。需要設(shè)定的參數(shù)有：HEATER：加熱強(qiáng)度（10-15A）MORTOR：鎖套旋轉(zhuǎn)速度（使電極扭曲）37、三管給藥電極制作:選用外徑1.5mm，內(nèi)徑0.88mm，長度120mm的帶芯玻璃電極毛胚，用膠布將3根捆綁在一起，上端固定于鎖套，下端掛重物，調(diào)節(jié)旋紐（上下，前后，左右）使電極位于加熱圈中心點(diǎn)，開電源，調(diào)節(jié)加熱強(qiáng)度和鎖套旋轉(zhuǎn)速度，當(dāng)電極變軟后，稍加固定砝碼，使電極扭成麻花狀，直至斷開，迅速下調(diào)加熱絲，關(guān)閉電源。顯微鏡下觀察，各管開口均勻平齊者用于實(shí)驗(yàn)。每根玻璃管尖端開口8~12μm。其中一管用于固定，其余管折出45度角，用于裝藥液。38、電極老是堵，有臟東西，很難完全避免，大家有什么好辦法嗎有幾個(gè)方法可以避免,第一是下電極要快,早入液面,不要在空氣中停留太久.第二是可以對電極進(jìn)行拋光處理,效果會好一些.我個(gè)人認(rèn)為,還應(yīng)該補(bǔ)充最重要的是:1電極內(nèi)液一定要過濾;2避免在外液中將電極移動(dòng)尋找細(xì)胞,最好先定好細(xì)胞,再下電極!3一般一根電極只用一個(gè)細(xì)胞,如果你接觸上但沒有封接上,最好做下一個(gè)細(xì)胞時(shí)換電極,因?yàn)榭赡苣愕募舛艘呀?jīng)沾上臟東西了,除非你退出時(shí)電極阻抗沒有變化;4可能還于你消化細(xì)胞有關(guān),盡可能消化細(xì)胞干凈,避免細(xì)胞因消化不凈,表面粗糙,不過這樣的細(xì)胞不但電極容易堵,而且也不易被sealed.39、各位高手，本實(shí)驗(yàn)室剛買的一套設(shè)備，膜片鉗放大器是Axopatch200B，采集卡是digitizer1200，軟件是Axon公司的Pclamp，請問各位有沒有使用相似設(shè)備的，能把你們放大器和采集卡interface的線路連接告訴我嗎還有，我們的微操縱器是***的液壓的，那個(gè)架子是怎么安裝到顯微鏡上面去的我們的顯微鏡是Olympus的。其實(shí)那么多接口，用到的并不多。信號線是使用BNC線將放大器的scaledoutput連接信號器的ANALOGIN任意接口，這是