發(fā)育毒性和致畸作用優(yōu)選ppt資料

發(fā)育(fāyù)毒性和致畸作用第一頁，共130頁。【目的(mùdì)要求】掌握外源化學(xué)(huàxué)物對生殖系統(tǒng)毒作用過程、特點(diǎn)及評價(jià)方法。掌握外源化學(xué)(huàxué)物對機(jī)體致畸作用（發(fā)育毒性）過程、特點(diǎn)、影響因素及評價(jià)方法。第二頁，共130頁。2【內(nèi)容】第一節(jié)概述第二節(jié)發(fā)育毒性與致畸性第三節(jié)致畸（發(fā)育毒性）作用機(jī)制(jīzhì)第四節(jié)發(fā)育毒性和致畸作用的試驗(yàn)與評價(jià)第三頁，共130頁。3反應(yīng)停(thalidomide)事件孕婦的理想選擇？1953年，聯(lián)邦德國一家名為ChemieGruenenthal的制藥公司研究人員發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)停（沙立度胺）具有一定(yīdìng)的鎮(zhèn)靜安眠作用，而且對孕婦懷孕早期的妊娠嘔吐療效極佳。1957年10月1日該公司將反應(yīng)停正式推向市場。第四頁，共130頁。4當(dāng)時(shí)反應(yīng)停成了“孕婦(yùnfù)的理想選擇”，在歐洲、亞洲、非洲和南美洲被醫(yī)生大量處方給孕婦(yùnfù)以治療妊娠嘔吐。科學(xué)家們在研制反應(yīng)停時(shí)，并沒有料到這種藥物會(huì)產(chǎn)生(chǎnshēng)如此可怕的副作用。第五頁，共130頁。5令人恐怖的副作用到了1960年，歐洲的醫(yī)生們開始發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)畸形嬰兒的出生率明顯上升(shàngshēng)。這些嬰兒有的是四肢畸形(主要是雙上肢的短肢畸形)，有的是腭裂，有的是盲兒或聾兒，還有的是內(nèi)臟畸形。第六頁，共130頁。6調(diào)查顯示，孕婦在末次月經(jīng)后第34～50天是反應(yīng)停作用的敏感期。在此時(shí)間段以外服用反應(yīng)停，一般不會(huì)導(dǎo)致胎兒的出生缺陷。1970年4月10日，案件的控辯雙方于法庭外達(dá)成了和解，ChemieGruenenthal公司同意向控方支付(zhīfù)總額1.1億德國馬克的賠償金。第七頁，共130頁。71960年，歐洲的醫(yī)生們開始發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)(dìqū)畸形嬰兒的出生率明顯上升。這些嬰兒以四肢畸形為主，還有的是腭裂、盲兒或聾兒，或內(nèi)臟畸形。1961年11月，聯(lián)邦德國漢堡大學(xué)的遺傳學(xué)家蘭茲博士根據(jù)自己的臨床觀察(guānchá)提示反應(yīng)停可能具有致畸胎性。1961年底(niándǐ)Thalidomide退出市場1962:FDAinspectorFrancesOldhamKelseyreceivesanawardfromPresidentJohnF.KennedyforblockingsaleofThalidomideintheUnitedStates梅里爾公司在申請前研究過“反應(yīng)?！睂言写笫蠛驮袐D的影響，但沒有出現(xiàn)畸形大鼠和畸形兒。Kelsey以數(shù)據(jù)不全為由，第八頁，共130頁。8Thalidomide為什么導(dǎo)致畸形兒的出生？為什么畸形大都是四肢短?。繛槭裁创笫鬀]有出現(xiàn)畸形？為什么在梅里(méilǐ)爾公司的研究中，halidomide沒有導(dǎo)致畸形兒的出生？第九頁，共130頁。9胚胎(pēitāi)早期發(fā)生第十頁，共130頁。10一、受精(shòujīng)1．精、卵膜的接觸并融合。

2．精核(jīnɡhé)與其胞質(zhì)進(jìn)入卵細(xì)胞。

3．雌原核、雄原核形成。

4．雌、雄原核的靠攏、融合第十一頁，共130頁。11桑椹胚（morula）：受精后第3天，形成了12~16個(gè)卵裂球組成的實(shí)心胚。胚泡：受精后第4~6天桑椹胚細(xì)胞繼續(xù)(jìxù)分裂，細(xì)胞間開始出現(xiàn)小腔隙，并逐漸匯合成一個(gè)大腔，桑椹胚轉(zhuǎn)變?yōu)橹锌盏呐轄?。著床：胚泡埋入子宮內(nèi)膜的過程；開始于受精后第5~6天，完成于第11~12天二、卵裂(luǎnliè)和胚泡形成第十二頁，共130頁。12三、植入著床：胚泡埋入子宮內(nèi)膜的過程；開始(kāishǐ)于受精后第5~6天，完成于第11~12天第十三頁，共130頁。13四、胚層形成(xíngchéng)和分化（一）二胚層胚盤及相關(guān)結(jié)構(gòu)的形成1.下胚層:面向(miànxiànɡ)胚泡腔內(nèi)細(xì)胞群細(xì)胞形成的單層細(xì)胞。2.上胚層:其余內(nèi)細(xì)胞群細(xì)胞排列規(guī)則形成的細(xì)胞層。3.二胚層胚盤:上下胚層緊密相貼，形成橢圓形盤狀結(jié)構(gòu)。形成的時(shí)間第2周第十四頁，共130頁。14（二）三胚層(pēicéng)形成胚胎第3周初，胚盤(pēipán)尾端中線處的上胚層增生形成原條。第十五頁，共130頁。15外胚層背側(cè)中線增厚神經(jīng)板溝緣愈合神經(jīng)管(neuraltube)：中樞神經(jīng)系統(tǒng)、神經(jīng)垂體、視網(wǎng)膜、松果體等神經(jīng)褶神經(jīng)溝神經(jīng)嵴(neuralcrest)：周圍神經(jīng)系統(tǒng)、腎上腺髓質(zhì)等表面外胚層：表皮及其附屬器、內(nèi)耳膜迷路、角膜上皮等畸形：前神經(jīng)孔不閉——無腦兒后神經(jīng)孔不閉——脊髓裂（三）三胚層(pēicéng)的分化第十六頁，共130頁。軸旁中胚層體節(jié)(tǐjié)生皮節(jié)：真皮生骨節(jié)：中軸骨(脊柱、肋骨(lèigǔ)）生肌節(jié)：軀干肌間介中胚層：泌尿生殖系統(tǒng)(shēnɡzhíxìtǒnɡ)的原基側(cè)中胚層體壁中胚層：體壁的骨骼、肌肉、血管、結(jié)締組織等原始體腔：心包腔、胸膜腔、腹膜腔臟壁中胚層：消化和呼吸系統(tǒng)的肌組織、血管、結(jié)締組織等生心區(qū)心臟的原基間充質(zhì)結(jié)締組織、肌組織、血管第十七頁，共130頁。前腸(前端口咽膜)內(nèi)胚層(pēicéng)(原腸)中腸(連卵黃囊)消化、呼吸后腸(末端泄殖腔膜)系統(tǒng)上皮另:甲狀腺甲狀旁腺胸腺上皮中耳膀胱陰道第十八頁，共130頁。18五、胚體外形(wàixínɡ)建立第5周后，胚胎外形發(fā)生(fāshēng)了一系列的變化。胚體顏面已形成，眼、耳和鼻已出現(xiàn)，肢芽形成四肢，外生殖器已發(fā)生(fāshēng)，頸部出現(xiàn)，頭已伸直，臍帶形成，胎兒懸浮于羊膜腔中。第8周末，胚體已成人形外形建立。第十九頁，共130頁。19胎盤功能(1)物質(zhì)(wùzhì)交換：母體和胎兒物質(zhì)(wùzhì)交換。(2)屏障作用胎盤膜：由合體(hétǐ)滋養(yǎng)層、細(xì)胞滋養(yǎng)層和基膜、絨毛內(nèi)結(jié)締組織、絨毛內(nèi)毛細(xì)血管的基膜及內(nèi)皮細(xì)胞組成。⑵內(nèi)分泌功能HCG：受精后第2周開始分泌，第8周達(dá)高峰；HCS：受精后第2月開始分泌，第8月達(dá)高峰；孕激素及雌激素：受精后第4月開始分泌

第二十頁，共130頁。20胚胎(pēitāi)發(fā)育分期精子＋卵子→受精卵人胚胎(pēitāi)在母體內(nèi)發(fā)育經(jīng)歷38周(38周×7天/周=266天)，可分為二個(gè)時(shí)期：1.胚期(embryo)受精后1~8周致畸敏感期2.胎期(fetus)受精后9~38周對致畸因子不敏感3.圍生期（圍產(chǎn)期）第26周至出生后4周，此時(shí)期母嬰保健(bǎojiàn)和護(hù)理應(yīng)特別注意，“圍生期醫(yī)學(xué)”因此誕生。第二十一頁，共130頁。21人類(rénlèi)胚胎的致畸敏感期第二十二頁，共130頁。22第一節(jié)概述(ɡàishù)第二十三頁，共130頁。23畸胎學(xué)（Teratology,古代(gǔdài)）現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)畸胎學(xué)（十九世紀(jì)）發(fā)育毒理學(xué)（Developmentaltoxicology,二十世紀(jì)）第二十四頁，共130頁。24Teratology(畸胎學(xué))來自于希臘語monster(怪胎(ɡuàitāi))，即teras(畸胎)。1651年，WilliamHarvey提出發(fā)育障礙學(xué)說：畸形起因于器官或結(jié)構(gòu)的不完全發(fā)育。一、畸胎(jītāi)學(xué)第二十五頁，共130頁。25物理、化學(xué)(huàxué)因素雞蛋畸形(jīxíng)小雞：神經(jīng)管缺陷、無腦畸形(jīxíng)、脊柱裂、獨(dú)眼畸形(jīxíng)、心臟缺陷等作用時(shí)間在決定畸形類型方面比損傷性質(zhì)(xìngzhì)更重要。二、現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)畸胎學(xué)第二十六頁，共130頁。2620世紀(jì)早期，環(huán)境因素（溫度、微生物毒素和藥物）可干擾鳥類、爬行類、魚類和兩棲類的發(fā)育。1935年，Hale報(bào)道維生素A缺乏可誘導(dǎo)母豬產(chǎn)下突眼和腭裂的畸形后代。后來，發(fā)現(xiàn)氮芥、錐藍(lán)、激素、抗代謝藥、烷化劑和缺氧等，均可引起(yǐnqǐ)哺乳動(dòng)物畸形。1940年澳大利亞風(fēng)疹大流行，次年流行嬰兒先天性白內(nèi)障、耳聾、智力不全、先天性心臟病1945年廣島長崎原子彈爆炸，受輻射兒童出現(xiàn)小頭畸形、智力低下，一年內(nèi)死亡率25%三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)第二十七頁，共130頁。27三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)第二十八頁，共130頁。281950年，日本，先天性水俁病患者。手足協(xié)調(diào)失常，甚至步行困難(kùnnɑn)、運(yùn)動(dòng)障礙、弱智、聽力及言語障礙、肢端麻木、感覺障礙、視野縮??；重者例如神經(jīng)錯(cuò)亂、思覺失調(diào)、痙攣，最后死亡。三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)第二十九頁，共130頁。2920世紀(jì)70年代，Jones描述了酒精綜合征（FAS），包括面部(miànbù)畸形、宮內(nèi)和產(chǎn)后生長遲緩、精神運(yùn)動(dòng)和智力發(fā)育障礙等。三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)胎兒酒精綜合癥（英文：Fetalalcoholsyndrome，簡稱FAS）又稱胎兒酒精癥候群，是母親在妊娠期間酗酒對胎兒所造成(zàochénɡ)的永久出生缺陷，程度會(huì)按母親喝酒的份量、頻率及時(shí)間所影響。酒精會(huì)進(jìn)入胎盤，并阻礙胎兒的成長及體重，造成(zàochénɡ)獨(dú)特的臉部小斑，破壞神經(jīng)元及腦部結(jié)構(gòu)，并引起體質(zhì)、心智或行為等問題第三十頁，共130頁。30孕婦吸煙也引起不良妊娠結(jié)局，包括流產(chǎn)、圍生期死亡、嬰兒猝死綜合征等。可卡因暴露也可引起多種不良發(fā)育效應(yīng)，如胎盤早期剝離、早產(chǎn)和流產(chǎn)、小腦(xiǎonǎo)畸形等三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)第三十一頁，共130頁。31上述事件讓人們認(rèn)識(shí)到生物、物理、化學(xué)和不良生活嗜好都可引起人類畸形。1966年，F(xiàn)DA提出三段生殖(shēngzhí)毒性試驗(yàn)指南，包括對致畸等發(fā)育毒性的評價(jià)。1986年，美國環(huán)境保護(hù)局（EPA）提出可疑發(fā)育毒性危險(xiǎn)度評價(jià)指南，第一次提出要對化合物進(jìn)行發(fā)育毒性評價(jià)。三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)第三十二頁，共130頁。32人類成功妊娠結(jié)局（pregnancyoutcomes）的比例非常低。美國統(tǒng)計(jì)，著床(zhechuánɡ)前丟失（早早孕丟失）超過50%，著床(zhechuánɡ)后丟失（流產(chǎn)、死胎）約占31%；新生兒嚴(yán)重畸形率約2-3%，1歲嬰兒6~7%，輕微畸形約14%；低出生體重占7%。1歲嬰兒死亡率1.4%，神經(jīng)功能異常占16-17%。我國衛(wèi)生部（1988）：29個(gè)省市1986~1987年1243284例圍產(chǎn)兒，先天畸形率1.3%，推算我國每年有30~40萬嚴(yán)重的先天畸形兒出生，其中很大比例在一年內(nèi)死亡。全球確認(rèn)的先天缺陷有7000多種，前五位為先天性心臟病、神經(jīng)管缺陷、血紅蛋白病、唐氏綜合征、蠶豆病。三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)第三十三頁，共130頁。33出生缺陷原因尚未明了，估計(jì)15-25%為遺傳因素，4%歸因于母體狀況，3%為母體感染，1-2%由于臍帶阻斷等功能機(jī)械因素；與化學(xué)物或其他因素有明確關(guān)系的不到1%。其他不明出生缺陷可能與環(huán)境因子暴露(bàolù)有關(guān)。發(fā)育毒理學(xué)(developmentaltoxicology)：是研究出生前暴露(bàolù)于環(huán)境有害因子導(dǎo)致的異常發(fā)育結(jié)局及有關(guān)的作用機(jī)制、發(fā)病原理、影響因素和毒代動(dòng)力學(xué)等。包括受精卵、妊娠期、出生后、直到性成熟的發(fā)育過程。三、發(fā)育(fāyù)毒理學(xué)第三十四頁，共130頁。34第三十五頁，共130頁。35第二節(jié)發(fā)育(fāyù)毒性與致畸性第三十六頁，共130頁。36畸形：指發(fā)育生物體解剖學(xué)上的形態(tài)結(jié)構(gòu)的缺陷。分為嚴(yán)重畸形(major)和輕微(minor)畸形。前者對外觀、生理功能和(或)壽命有明顯(míngxiǎn)影響，后者則只有輕微影響。致畸物或致畸原(teratogen)：能引起畸形的環(huán)境因子。致畸性(teratogeniceffectorteratogenesis)和致畸作用(teratogenicity)：致畸物引起畸形的過程和能力。1.畸形(jīxíng)(malformation)一、基本概念第三十七頁，共130頁。37變異：是由遺傳和遺傳外因素控制的外觀變化，或由于分化改變而引起的差異。指同一種屬的子代與親代之間或子代的個(gè)體之間，有時(shí)出現(xiàn)(chūxiàn)不完全相同的現(xiàn)象，是小的或次要的改變。一般認(rèn)為變異不影響正常生理功能，更不危及生命。2.變異(biànyì)(variation)一、基本概念第三十八頁，共130頁。38胚體毒性(embryotoxicity)：指外源性理化因素對孕體著床前后直到器官形成期結(jié)束時(shí)的有害影響。表現(xiàn)：胚體期染毒而出現(xiàn)畸胎、生長遲緩、著床數(shù)減少和吸收胎，也偶有死胎。胎體毒性或胎兒毒性(fetoxicity)：對孕體器官形成期結(jié)束后的有害影響。表現(xiàn)：胎兒死亡、體重降低、骨化遲緩、功能缺陷(quēxiàn)以及結(jié)構(gòu)異常，甚至腫瘤。3.胚體-胎體毒性(dúxìnɡ)一、基本概念孕體是指胎兒(tāiér)、胎膜和胎水構(gòu)成的復(fù)合體，孕體在整個(gè)妊娠期起著主導(dǎo)作用第三十九頁，共130頁。39在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)中，通常不去區(qū)分胎兒與胚體，所以(suǒyǐ)使用胚胎毒性（embryo-fetaltoxicity）更恰當(dāng)。廣義的說胚胎毒性包括孕體結(jié)構(gòu)和功能方面的各種損害，一般情況下，胚胎毒性是指孕體的死亡和生長發(fā)育遲緩，而不包括結(jié)構(gòu)畸形。3.胚體-胎體毒性(dúxìnɡ)一、基本概念第四十頁，共130頁。40一、基本概念發(fā)育生物體死亡(deathofthedevelopingorganism)：包括受精卵未發(fā)育即死亡或胚泡未著床即死亡(早早孕丟失(diūsī))，或著床后發(fā)育到某一階段死亡。早期死亡被吸收或自子宮排出，晚期死亡成為死胎。生長改變(alteredgrowth)：一般指生長遲緩。當(dāng)胎兒生長發(fā)育指標(biāo)低于正常對照的均值2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)為生長遲緩。4.發(fā)育毒性(developmentaltoxicity):出生前后接觸有害因素(yīnsù)，子代個(gè)體發(fā)育成體之前誘發(fā)的任何有害影響。第四十一頁，共130頁。41一、基本概念結(jié)構(gòu)異常(structuralabnormality)：指胎兒形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，即畸形，包括外觀畸形、內(nèi)臟畸形和骨骼畸形。功能缺陷(functionaldeficiency)：包括生理、生化、免疫、行為、智力等方面的異常。經(jīng)常在出生后，聽力(tīnglì)或視力障礙、生殖功能障礙、智力障礙等。4.發(fā)育(fāyù)毒性第四十二頁，共130頁。42一、基本概念5.出生缺陷(birthdefect)：指嬰兒出生前即已形成的發(fā)育障礙，包括畸形和功能缺陷。與營養(yǎng)缺乏和環(huán)境有害因子有關(guān)的出生缺陷：先天性心臟病(congenitalheartdisease):在胚胎發(fā)育時(shí)期，由于心臟及大血管的形成障礙而引起的局部解剖結(jié)構(gòu)異常，或出生后心臟應(yīng)自動(dòng)關(guān)閉(guānbì)的通道未能閉合。唇腭裂：最常見口腔頜面部畸形，分唇裂和腭裂第四十三頁，共130頁。43一、基本概念5.出生缺陷神經(jīng)管畸形：中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育畸形，包括無腦畸形和脊柱裂。母體懷孕初期葉酸缺乏是主要原因。尿道下裂(hypospadia):男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的先天畸形，尿道開口于正常位置的下方。環(huán)境內(nèi)分泌干擾物。隱睪癥：睪丸下降不全，男性常見。低出生體重：子代出生時(shí)體重明顯(míngxiǎn)低于正常值范圍。出生后1小時(shí)內(nèi)體重<2500g。第四十四頁，共130頁。44一、基本概念6.不良妊娠結(jié)局(adversepregnancyoutcomes)指妊娠后不能產(chǎn)生外觀和功能正常的子代，包括所有的不良反應(yīng)，如流產(chǎn)(liúchǎn)、死胎、死產(chǎn)、功能生長延緩、發(fā)育異常、新生兒和嬰幼兒期死亡等。第四十五頁，共130頁。451.發(fā)育各階段發(fā)育毒性作用的特點(diǎn)和致畸敏感期不同發(fā)育毒物可作用于不同發(fā)育階段，產(chǎn)生不同效應(yīng)。因此(yīncǐ)，孕體發(fā)育不同階段接觸各種發(fā)育毒物所引發(fā)的發(fā)育毒性反應(yīng)也不一樣。最易引起畸形的階段為器官形成期。二、發(fā)育毒性(dúxìnɡ)作用的特點(diǎn)和影響因素第四十六頁，共130頁。465、胎仔檢查(jiǎnchá)前腸(前端口咽膜)第五十二頁，共130頁。四、干擾(gānrǎo)細(xì)胞-細(xì)胞交互作用僅具有母體毒性，但不具有致畸第五十六頁，共130頁。胎兒期接觸外源性理化物質(zhì)，很可能對生長和功能成熟產(chǎn)生效應(yīng)，如免疫系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和生殖器官功能異常，主要表現(xiàn)為：全身生長遲緩、特異的功能障礙、經(jīng)胎盤致癌和偶見死胎。任何環(huán)境有害因素的損害效應(yīng)都存在物種品系及個(gè)體差異，在致畸作用中較突出。甲基汞極易通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，在胎、幼兒體內(nèi)大量蓄積。開始于受精后第5~6天，完成于第11~12天目前出現(xiàn)最多的是白血病和腦腫瘤。著床：胚泡埋入子宮內(nèi)膜的過程；awardfromPresidentJohnF.第七十九頁，共130頁。感染：風(fēng)疹(fēnɡzhěn)、巨細(xì)胞病毒、單純性皰疹、梅毒、弓形體病毒試驗(yàn)期間每天稱取母鼠體重。第四十七頁，共130頁。47（1）著床(zhechuánɡ)前期又稱分化前期，從受精時(shí)算起，到完全著床之前。人類為受精后的第11－12天；嚙齒類動(dòng)物為最初的６天。特點(diǎn)：受損的是早期(zǎoqī)胚胎的相對未分化細(xì)胞?？赏ㄟ^代償性細(xì)胞增生加以修補(bǔ)，很少發(fā)生特異的致畸效應(yīng)，通常是未分化細(xì)胞受化學(xué)毒物損傷而致胚泡死亡，稱為著床前丟失。也有例外，如小鼠妊娠第2.5天、3.5天和4.5天用甲基亞硝脲處理可造成子代神經(jīng)管缺陷和腭裂。第四十八頁，共130頁。48（2）器官(qìguān)形成期著床后孕體即進(jìn)入器官形成期，直到硬腭閉合；事件：細(xì)胞增殖、移動(dòng)和組合形成器官原基，即細(xì)胞結(jié)構(gòu)開始分化，并逐漸形成不同的器官和組織。時(shí)間：人類為第3-8周；大小鼠為第6-15天，家兔為6-18天；特點(diǎn)：細(xì)胞增殖分裂(fēnliè)速度很快，組織器官生長旺盛，胚胎對致畸物特別敏感，細(xì)胞受損可導(dǎo)致結(jié)構(gòu)畸形、生長遲緩或胚胎死亡。這一發(fā)育階段被稱為致畸敏感期或致畸作用危險(xiǎn)期（criticalperiod）。第四十九頁，共130頁。49大多數(shù)器官對致畸作用(zuòyòng)有特殊的敏感期，及所謂的時(shí)間“靶窗”(targetwindows)；不同器官敏感期不同，且有交叉重疊。表現(xiàn)為：不同器官致畸高峰時(shí)間不同，此期內(nèi)不同時(shí)間給予致畸物會(huì)誘發(fā)不同器官畸形，同一天染毒可引起多個(gè)器官受損。（2）器官(qìguān)形成期第五十頁，共130頁。50人類(rénlèi)胚胎的致畸敏感期（2）器官(qìguān)形成期第五十一頁，共130頁。51人、大鼠和家兔致畸敏感期及不同(bùtónɡ)器官誘發(fā)畸形的“靶窗”（2）器官(qìguān)形成期第五十二頁，共130頁。52致畸試驗(yàn)的染毒時(shí)間都包括整個(gè)敏感期，利于發(fā)現(xiàn)致畸效應(yīng)。同一致畸物，給予時(shí)間不同，會(huì)產(chǎn)生不同的畸形。即同一劑量同種致畸物在敏感期中與胚胎接觸，可因胚胎所處發(fā)育階段不同而出現(xiàn)不同的畸形。另外，器官形成期暴露也可以引起(yǐnqǐ)胚胎死亡。一胎多仔動(dòng)物(如嚙齒類)胚胎死亡后被吸收，稱吸收胎(resorption),在人和靈長類表現(xiàn)為流產(chǎn)(abortion)。（2）器官(qìguān)形成期第五十三頁，共130頁。53器官形成結(jié)束（以硬腭閉合為標(biāo)志）后即進(jìn)入胎兒期。事件：主要是組織分化、生長和生理學(xué)成熟。時(shí)間：人類是從第56-58天起，直到分娩。特點(diǎn)：胚胎的器官、系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)(jiégòu)形成后，致畸物難以使之發(fā)生結(jié)構(gòu)(jiégòu)缺陷，通常是變形或異常而非畸形。胎兒期接觸外源性理化物質(zhì)，很可能對生長和功能成熟產(chǎn)生效應(yīng)，如免疫系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和生殖器官功能異常，主要表現(xiàn)為：全身生長遲緩、特異的功能障礙、經(jīng)胎盤致癌和偶見死胎。（3）胎兒(tāiér)期第五十四頁，共130頁。54（3）胎兒(tāiér)期第五十五頁，共130頁。55此期接觸外源性化學(xué)物質(zhì)，主要表現(xiàn)在發(fā)育免疫毒性、神經(jīng)行為發(fā)育異常和兒童期腫瘤(zhǒngliú)。圍生期接觸外源化學(xué)物，會(huì)嚴(yán)重影響胎兒T細(xì)胞、B細(xì)胞和吞噬細(xì)胞的發(fā)育、遷移、歸巢及功能，可能暫時(shí)甚至永久性地?fù)p傷機(jī)體的免疫系統(tǒng)。許多化學(xué)物質(zhì)具有發(fā)育神經(jīng)毒性，表現(xiàn)為對感覺、運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶等方面的影響。圍生期是一生中對致癌物最敏感的時(shí)期。因?yàn)榧?xì)胞增殖快、藥物代謝酶發(fā)育不全、免疫監(jiān)視功能低下，許多兒童高發(fā)腫瘤(zhǒngliú)可能與出生前后暴露某些環(huán)境因素有關(guān)。（4）圍生期和出生(chūshēng)后的發(fā)育期第五十六頁，共130頁。562.發(fā)育毒性的劑量反應(yīng)關(guān)系模式和閾值(yùzhí)問題較常見(chánɡjiàn)高度(gāodù)致畸作用，較少見在開始生長遲緩到致死劑量之間，多設(shè)實(shí)驗(yàn)組，以確證無致畸作用第五十七頁，共130頁。572.發(fā)育毒性的劑量反應(yīng)關(guān)系模式(móshì)和閾值問題正常胎、生長遲緩、結(jié)構(gòu)畸形和胚胎死亡同時(shí)存在。低劑量主要導(dǎo)致生長遲緩、胚胎吸收和畸形，劑量增加(zēngjiā)，胚胎死亡占優(yōu)勢，直至整窩胚胎死亡。多為細(xì)胞毒性致畸物，包括烷化劑、抗癌藥及很多致突變物。第五十八頁，共130頁。58在遠(yuǎn)低于胚胎致死劑量下即可出現(xiàn)致畸，甚至全窩致畸，致畸胎兒常常有生長遲緩。劑量增加到遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過全窩畸形時(shí)才出現(xiàn)胚胎死亡，常伴有明顯的母體(mǔtǐ)毒性。這種模式表示受試物有高度致畸作用，較少見，如沙立度胺、糖皮質(zhì)類固醇等。2.發(fā)育毒性的劑量反應(yīng)關(guān)系模式和閾值(yùzhí)問題第五十九頁，共130頁。59只有生長遲緩和胚胎致死但沒有畸形發(fā)生。往往生長遲緩先出現(xiàn)，曲線較平緩。較大劑量時(shí)才出現(xiàn)胚胎死亡，其曲線較陡，接近于“全或無”。被認(rèn)為(rènwéi)是有胚胎毒性（包括胚胎致死性）的，但不具有致畸作用。2.發(fā)育毒性(dúxìnɡ)的劑量反應(yīng)關(guān)系模式和閾值問題第六十頁，共130頁。602.發(fā)育(fāyù)毒性的劑量反應(yīng)關(guān)系模式和閾值問題典型致畸作用的劑量-反應(yīng)曲線(qūxiàn)的斜率比較大，從致畸NOAEL到胚胎100%死亡的劑量往往只差2-4倍。從NOAEL到胚胎死亡劑量之間的劑量范圍叫致畸帶。致畸帶越寬的致畸物，致畸危險(xiǎn)度越大。第六十一頁，共130頁。61通常認(rèn)為哺乳動(dòng)物的發(fā)育毒性是一種有閾值的效應(yīng)；假定的閾值是低于它就不出現(xiàn)發(fā)育毒性的母體劑量。但是，發(fā)育毒性是否有閾值尚存在爭論很難用實(shí)驗(yàn)找出一個(gè)發(fā)生率很低的劑量-反應(yīng)關(guān)系，因?yàn)槟切枰獦O大的樣本數(shù)量，如每劑量組幾百到幾千窩的動(dòng)物；多數(shù)發(fā)育毒性機(jī)制(jīzhì)還不了解，有的已知機(jī)制(jīzhì)支持閾值的存在，而有些機(jī)制(jīzhì)則不支持。2.發(fā)育(fāyù)毒性的劑量反應(yīng)關(guān)系模式和閾值問題第六十二頁，共130頁。623.發(fā)育毒性的物種(wùzhǒng)差異發(fā)育毒性尤其是致畸作用與遺傳類型有關(guān)，存在明顯的物種差異。這種差異是因?yàn)椴煌锓N之間因代謝變化、胎盤類型、胚胎發(fā)育的速度和方式的差異引起的。化學(xué)(huàxué)致畸物往往有各自的物種和品系，易感性主要取決于機(jī)體的基因型?；瘜W(xué)(huàxué)物生物轉(zhuǎn)化為活性中間代謝產(chǎn)物或終產(chǎn)物的速度和途徑與遺傳有關(guān)，而畸形僅發(fā)生在能形成活性代謝產(chǎn)物的物種。例如：反應(yīng)停4000mg/kg大鼠、小鼠無致畸作用；0.5~1mg/kg人類極強(qiáng)致畸作用。第六十三頁，共130頁。63致畸的物種差異：任何環(huán)境有害因素的損害效應(yīng)都存在物種品系及個(gè)體差異，在致畸作用中較突出。例如，殺蟲劑西維因?qū)﹄嗍缶哂兄禄饔?，對家免和倉鼠并不致畸。農(nóng)藥(nóngyào)敵枯雙對大鼠致畸作用明顯，但未得到人群調(diào)查的證實(shí)資料。3.發(fā)育(fāyù)毒性的物種差異目前(mùqián)致畸試驗(yàn)要求用兩種以上動(dòng)物，一般用一種嚙齒類和一種非嚙齒類，首選大鼠和家兔。第六十四頁，共130頁。64母體毒性：化學(xué)毒物對受孕母體產(chǎn)生的損傷效應(yīng)。表現(xiàn)為增重減慢、功能異常、臨床癥狀、甚至死亡。母體毒性可直接或間接(jiànjiē)影響發(fā)育過程，導(dǎo)致發(fā)育毒性。影響發(fā)育的母體因素包括遺傳、疾病、營養(yǎng)、應(yīng)激等，也可通過胎盤毒性影響發(fā)育。三、母體毒性(dúxìnɡ)與發(fā)育毒性(dúxìnɡ)1.母體因素對發(fā)育毒性(dúxìnɡ)的影響第六十五頁，共130頁。65遺傳學(xué)：孕母的遺傳結(jié)構(gòu)是胚胎發(fā)育的一個(gè)決定因素。如唇腭裂的發(fā)病率白種人明顯高于黑種人，主要原因在于母體，而非胚胎本身的基因結(jié)構(gòu)。疾病(jíbìng)：母體受病毒感染、未控制的糖尿病等疾病(jíbìng)，將會(huì)對胚胎產(chǎn)生影響。如懷孕前三個(gè)月，母體高熱、病毒感染等均可能導(dǎo)致胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形。1.母體因素(yīnsù)對發(fā)育毒性的影響第六十六頁，共130頁。66營養(yǎng)：母體蛋白質(zhì)、熱量、維生素、微量元素及酶的輔助因子缺乏將對胚胎產(chǎn)生影響。應(yīng)激：不同形式的母體毒性可能通過誘導(dǎo)生理學(xué)應(yīng)激反應(yīng)而產(chǎn)生發(fā)育毒性。對胎盤的毒性：胎盤是母體和胚胎進(jìn)行(jìnxíng)物質(zhì)交換的結(jié)構(gòu)，為胚胎提供營養(yǎng)、氣體交換、廢物排出。胎盤可產(chǎn)生維持妊娠的關(guān)鍵激素，而且能代謝和儲(chǔ)存外源化學(xué)物。外源化學(xué)物既可透過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，同時(shí)胎盤也可能是其作用靶點(diǎn)，或作為其儲(chǔ)存庫。1.母體因素對發(fā)育(fāyù)毒性的影響第六十七頁，共130頁。67非共效應(yīng) 致畸物具有致畸作用，但無母體毒性出現(xiàn)，如反應(yīng)停

共效應(yīng) 致畸物母體毒性均無毒性出現(xiàn)致畸作用的同時(shí)也表現(xiàn)母體毒性 僅具有母體毒性，但不具有致畸 作用 在一定劑量下，既無母體毒性， 也不表現(xiàn)胚胎毒性

母體毒性與發(fā)育毒性的關(guān)系2.母體毒性(dúxìnɡ)與發(fā)育毒性(dúxìnɡ)的關(guān)系第六十八頁，共130頁。68父源性出生缺陷（paternalbirthdefect）影響因素：遺傳缺陷、年齡因素和外界暴露因素（職業(yè)和環(huán)境因素，化療和放療，其它藥物，飲酒和吸煙等不良嗜好），這些因素通過父親對發(fā)育個(gè)體產(chǎn)生不良影響，叫父源性發(fā)育毒性（paternal-mediateddevelopmentaltoxicity）;父源性暴露引起子代發(fā)育異常(yìcháng)包括：流產(chǎn)、死胎、低出生體重、畸形、功能障礙等，甚至與兒童期腫瘤相關(guān)。父源性發(fā)育毒性的主要表現(xiàn)：自然流產(chǎn)或出生缺陷、兒童腫瘤、男女出生比例失調(diào)四、父源性發(fā)育(fāyù)毒性第六十九頁，共130頁。69（1）自然流產(chǎn)(liúchǎn)和出生缺陷、心血管畸形第七十頁，共130頁。70（2）兒童(értóng)腫瘤烴類物質(zhì)的父源性暴露，可能(kěnéng)與兒童腫瘤發(fā)生有關(guān)。目前出現(xiàn)最多的是白血病和腦腫瘤。（3）男女(nánnǚ)出生比例失調(diào)父親暴露于TCDD（四氯二苯并-p-二惡英），導(dǎo)致后代“出生性別比（SSR）”明顯下降。第七十一頁，共130頁。71經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)的能引起人類發(fā)育異常的發(fā)育毒物或致畸物有四十多種。藥物/化學(xué)物被認(rèn)為是引起先天畸形的主要(zhǔyào)非遺傳因素。五、已知的人類(rénlèi)發(fā)育毒物或致畸物第七十二頁，共130頁。72五、已知的人類發(fā)育(fāyù)毒物或致畸物第七十三頁，共130頁。73幾種較典型的人類發(fā)育毒物/致畸物：1.乙醇和吸煙：胎兒酒精綜合征：由父母嗜酒引起(yǐnqǐ)的后代缺陷，典型表現(xiàn)為面部畸形、宮內(nèi)和產(chǎn)后生長遲緩、精神運(yùn)動(dòng)和智力發(fā)展障礙等，生長遲緩母親孕期飲酒最敏感和最常見的表現(xiàn)。胎兒煙草綜合征：吸煙孕婦出生的異常嬰兒。孕期吸煙可導(dǎo)致胎兒低出生體重。父親吸煙影響精子發(fā)生，并具發(fā)育毒性。尿道下裂、嬰兒生存能力下降，兒童腫瘤發(fā)病率增加。五、已知的人類發(fā)育(fāyù)毒物或致畸物第七十四頁，共130頁。742.己烯雌酚：既是致畸物又是致癌物己烯雌酚綜合征：己烯雌酚可跨越母親胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，導(dǎo)致后代生殖器官畸形和癌癥(áizhènɡ)。如男性后代尿道下裂、睪丸和附睪異常、精子畸形，前列腺癌等；女性出現(xiàn)輸卵管畸形、子宮纖維以及陰道癌等。五、已知的人類發(fā)育(fāyù)毒物或致畸物第七十五頁，共130頁。753.甲基汞甲基汞極易通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，在胎、幼兒體內(nèi)大量蓄積。水俁病，常見表現(xiàn)為末梢(mòshāo)感覺障礙、中心性視野縮小、高頻域聽力障礙和運(yùn)動(dòng)失調(diào)，統(tǒng)稱Hunter-Russel綜合征。五、已知的人類(rénlèi)發(fā)育毒物或致畸物第七十六頁，共130頁。764.鉛鉛能引起多系統(tǒng)毒性；神經(jīng)系統(tǒng)對鉛的毒性非常敏感，尤其是對兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)，由于胎兒及嬰幼兒時(shí)期的血腦屏障發(fā)育不完全，較容易進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。鉛可降低兒童智商、導(dǎo)致注意力缺陷(quēxiàn)多動(dòng)障礙、降低閱讀學(xué)習(xí)能力。五、已知的人類發(fā)育(fāyù)毒物或致畸物第七十七頁，共130頁。775.視黃醛（維甲酸）是具有維生素A結(jié)構(gòu)或其功能相似的化合物；維生素A衍生物、13-反式-視黃酸和視黃酸可引起人類(rénlèi)胚胎畸形，主要包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)、面部和泌尿生殖系統(tǒng)畸形等。視黃酸受體的配體多為強(qiáng)致畸物。五、已知的人類(rénlèi)發(fā)育毒物或致畸物第七十八頁，共130頁。786.反應(yīng)停1960-1962年，20多國家孕婦服用反應(yīng)停，全世界12000名胎兒出現(xiàn)短肢畸形，即海豹肢畸形。反應(yīng)停主要(zhǔyào)的毒性可能來源于代謝產(chǎn)物4-羥化反應(yīng)停和5-羥化反應(yīng)停；致畸機(jī)制包括：影響DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄；影響生長因子合成和表達(dá)；血管生成抑制；影響軟骨生成；引起胚胎細(xì)胞上黏附因子如整合素的下調(diào)，阻礙細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)間的相互作用；等。五、已知的人類(rénlèi)發(fā)育毒物或致畸物第七十九頁，共130頁。79相加作用：致畸劑量的6-MPr與無明顯效應(yīng)劑量的羥基脲(HU)，同時(shí)給藥未增加畸形；先給6-MPr畸形從0增加到29%，但6-MPr引起的畸形比單獨(dú)給藥減少；先給HU，使6-MPr引起的畸形增加近1/5。超相加作用：咖啡因和HU聯(lián)合給予引起的畸形率大大超過單獨(dú)給藥引起的畸形率之和。產(chǎn)生新的作用：HU和BUdR聯(lián)合給予懷孕(huáiyùn)小鼠產(chǎn)生兩種化合物所沒有的四肢畸形。六、外源化合物的聯(lián)合(liánhé)發(fā)育毒性第八十頁，共130頁。80第三節(jié)致畸（發(fā)育毒性(dúxìnɡ)）作用機(jī)制第八十一頁，共130頁。81基因突變與染色體畸變干擾基因表達(dá)(biǎodá)細(xì)胞損傷與死亡干擾細(xì)胞間的相互作用通過胎盤毒性引起發(fā)育毒性干擾母體穩(wěn)態(tài)發(fā)育免疫毒性機(jī)制發(fā)育神經(jīng)毒性機(jī)制?總的來說還不清楚(qīngchu)！第八十二頁，共130頁。82各種發(fā)育基因都可能成為某些發(fā)育毒物的靶。已知的誘變劑往往有潛在(qiánzài)的致畸性，如電離輻射、烷化劑、亞硝酸鹽、多數(shù)致癌物。一、基因突變(jīyīntūbiàn)與染色體畸變第八十三頁，共130頁。83二、干擾基因(jīyīn)表達(dá)某些基因的表達(dá)受到抑制或異常表達(dá)可能引起畸形。如在培養(yǎng)的小鼠胚胎中用反義寡核苷酸探針抑制或剔除(tīchú)原癌基因Wnt-l或Wnt-3a，都可產(chǎn)生中腦和后腦，或中腦、后腦和脊髓的畸形。近年，非基因序列改變所致基因表達(dá)水平和基因功能的改變，即表觀遺傳學(xué)改變，也影響胚胎發(fā)育。包括DNA甲基化、組蛋白乙?；?。如孕鼠飼料中添加染料木黃酮誘發(fā)DNA甲基化，可改變子代的毛發(fā)。己烯雌酚引起人和嚙齒類動(dòng)物生殖道發(fā)育異常和子代腫瘤易感性增加。第八十四頁，共130頁。84三、細(xì)胞(xìbāo)損傷與死亡細(xì)胞死亡在正常的胚胎發(fā)育尤其形態(tài)發(fā)生中扮演重要角色，包括系統(tǒng)匹配、軀體塑造、殘留結(jié)構(gòu)去除等。程序性細(xì)胞死亡方式有多種，細(xì)胞凋亡研究最為廣泛。高溫、電離輻射、化學(xué)致畸物、病毒感染等可通過不同(bùtónɡ)機(jī)制影響細(xì)胞凋亡。例如：反應(yīng)停誘導(dǎo)胚胎細(xì)胞凋亡，并通過抑制IGF-1和FGF的基因復(fù)制而阻止其表達(dá)，從而抑制血管形成；全反式視黃酸可通過box等凋亡基因編碼的信號通路而誘導(dǎo)凋亡；環(huán)磷酰胺、N-乙酸基-2-乙酰氨基芴、甲基汞等。第八十五頁，共130頁。85三、細(xì)胞(xìbāo)損傷與死亡第八十六頁，共130頁。86三、細(xì)胞(xìbāo)損傷與死亡一些(yīxiē)致畸物可通過氧化損傷和DNA斷裂，引起細(xì)胞周期阻滯；環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)DNA損傷可導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂和特定細(xì)胞群死亡第八十七頁，共130頁。87四、干擾(gānrǎo)細(xì)胞-細(xì)胞交互作用細(xì)胞間相互作用主要通過細(xì)胞通訊實(shí)現(xiàn)，包括縫隙連接通訊、膜表面分子接觸通訊等直接的細(xì)胞間通訊和由受體介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)(xìtǒng)。滅鼠靈、苯巴比妥、氯丙嗪等抑制縫隙連接；反應(yīng)?；罨x產(chǎn)物引起胚胎細(xì)胞的粘連受體下調(diào)。第八十八頁，共130頁。88五、通過胎盤途徑(tújìng)引起發(fā)育毒性對卵黃囊或絨毛膜尿囊胎盤有毒性的毒物有46種，包括鎘、砷、汞、香煙、乙醇、可卡因、內(nèi)毒素、水楊酸納等；如鎘，在妊娠中晚期通過胎盤毒性（壞死(huàisǐ)和血流減少）和抑制對營養(yǎng)物質(zhì)的傳送導(dǎo)致發(fā)育毒性。第八十九頁，共130頁。89六、干擾(gānrǎo)母體穩(wěn)態(tài)二氟苯水楊酸母體貧血、紅細(xì)胞ATP損耗兔中軸骨骼缺陷；二苯乙酰脲母體葉酸代謝致畸；羥基脲子宮血流減少胚胎顱面和心包出血；孕婦缺乏代謝前體或基質(zhì)（如維生素和無機(jī)鹽等）；環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，影響內(nèi)源性激素水平，改變母體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，引起發(fā)育(fāyù)毒性。第九十頁，共130頁。90七、發(fā)育免疫毒性(dúxìnɡ)機(jī)制胚胎期或圍生期暴露于外源化學(xué)物可暫時(shí)或永久地?fù)p傷機(jī)體的免疫反應(yīng)，且較低劑量即可導(dǎo)致胎兒明顯的免疫損傷；如，大鼠孕期GD7-16接觸低劑量氯氰菊酯，可損害子代免疫系統(tǒng)，明顯減少T淋巴細(xì)胞數(shù)量；農(nóng)藥(nóngyào)氯丹孕期，可經(jīng)胎盤作用于胎鼠，使后代免疫力下降；TCDD可能存在遠(yuǎn)期發(fā)育免疫毒性。第九十一頁，共130頁。91八、發(fā)育神經(jīng)(shénjīng)毒性機(jī)制子宮內(nèi)接觸神經(jīng)毒性(dúxìnɡ)化學(xué)物對發(fā)育神經(jīng)系統(tǒng)能產(chǎn)生損傷，如神經(jīng)元、突觸、軸突、髓鞘等，還有信號通路有些化學(xué)物破壞神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和形態(tài)，有些導(dǎo)致功能異常。第九十二頁，共130頁。92第四節(jié)發(fā)育毒性和致畸作用試驗(yàn)(shìyàn)與評價(jià)第九十三頁，共130頁。93外源化學(xué)物發(fā)育毒性評價(jià)需四方面的資料①環(huán)境流行病學(xué)資料②控制下的臨床(línchuánɡ)研究資料③動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)資料④體外試驗(yàn)資料作為一個(gè)新產(chǎn)品的登記與審批，主要根據(jù)前三類資料。在前三類資料中，首先是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資料，因?yàn)榇蠖鄶?shù)情況下新產(chǎn)品在上市前，還沒有流行病學(xué)資料和控制下的臨床(línchuánɡ)資料。第九十四頁，共130頁。94一、動(dòng)物(dòngwù)發(fā)育毒性試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：容易控制接觸條件，控制接觸動(dòng)物的數(shù)量、年齡、狀態(tài)(zhuàngtài)以及選擇檢測效應(yīng)指標(biāo)（終點(diǎn)）。缺點(diǎn)：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人具有不確定性。第九十五頁，共130頁。95對大多數(shù)化學(xué)物質(zhì)來說，三段生殖(shēngzhí)毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)通常是最適當(dāng)?shù)?，關(guān)鍵因素是各個(gè)生殖(shēngzhí)階段之間不得有間隔，即在三個(gè)有關(guān)聯(lián)的階段接觸受試物的時(shí)期至少有一天的重疊，并能直接或間接地評價(jià)生殖(shēngzhí)過程的所有階段。一、動(dòng)物發(fā)育(fāyù)毒性試驗(yàn)第九十六頁，共130頁。96生殖發(fā)育過程可分為(fēnwéi)6個(gè)階段A.從交配前到受孕：檢查成年雄性和雌性生殖功能(gōngnéng)、配子的發(fā)育與成熟、交配行為、受精。B.從受孕到著床：檢查成年雌性生殖功能(gōngnéng)、胚胎著床前發(fā)育、著床。C.從著床到硬腭閉合：檢查成年雌性生殖功能(gōngnéng)、胚體發(fā)育、主要器官形成。一、動(dòng)物發(fā)育(fāyù)毒性試驗(yàn)第九十七頁，共130頁。97D.從硬腭(yìngè)閉合到妊娠結(jié)束：檢查成年雌性生殖功能、胚體的發(fā)育與生長、器官的發(fā)育與生長。E.從出生到斷乳：檢查成年雌性生殖功能、新生仔對宮外生活的適應(yīng)性、斷乳前的發(fā)育與生長。F.從斷乳到性成熟：檢查斷乳后的發(fā)育與生長，對獨(dú)立生活的適應(yīng)、達(dá)到完全的性功能。生殖發(fā)育過程(guòchéng)可分為6個(gè)階段一、動(dòng)物(dòngwù)發(fā)育毒性試驗(yàn)第九十八頁，共130頁。98三段生殖毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)I段：生育力和早期胚胎發(fā)育毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)（一般生殖毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)）II段：胚體-胎體毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)(致畸試驗(yàn))III段：出生前后發(fā)育毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)(圍生期毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn))第九十九頁，共130頁。99第一百頁，共130頁。100第一百零一頁，共130頁。101第一百零二頁，共130頁。第一百零三頁，共130頁。103第一百零四頁，共130頁。104第一百零五頁，共130頁。1051.發(fā)育毒性的流行病學(xué)生殖流行病學(xué)研究是父體和母體、孕體特定的暴露(bàolù)與生育結(jié)局之間統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)的科學(xué)；出生缺陷少見、人群暴露(bàolù)少見、人群樣本量小、研究周期短以及與生物學(xué)上關(guān)聯(lián)越大，越易建立特定暴露(bàolù)與不良生育結(jié)局之間的關(guān)系；如反應(yīng)停；其它，利用病例對照研究或隊(duì)列研究尋找關(guān)聯(lián)。面臨很大困難，樣本需求量很大，妊娠失敗率高，研究同質(zhì)性，記錄的專業(yè)性及混雜因素等。二、人群(rénqún)流行病學(xué)研究第一百零六頁，共130頁。1062.人類發(fā)育毒物的確定經(jīng)動(dòng)物致畸試驗(yàn)的化學(xué)物有4100種，約66%無致畸作用，7%對一種以上動(dòng)物有致畸性，18%對大多數(shù)動(dòng)物有致畸性，9%可疑經(jīng)證實(shí)可引起人類發(fā)育異常的致畸原只有40種左右；病例報(bào)告(bàogào)和出生缺陷監(jiān)測登記對獲得人類發(fā)育毒性證據(jù)是有用的。Schardein曾對28種人類化學(xué)致畸物的證據(jù)進(jìn)行分析，有23種是人類病例報(bào)告(bàogào)提出第一證據(jù)；只有4種化學(xué)物(酒精、多氯聯(lián)苯、卡馬西平和可卡因)是通過分析流行病學(xué)研究提供第一手證據(jù)，而丙戊酸證據(jù)主要來自于出生缺陷登記分析。二、人群流行病學(xué)(liúxínɡbìnɡxué)研究第一百零七頁，共130頁。107已知的人類(rénlèi)致畸物電離輻射：放射治療、放射性碘、原子武器感染：風(fēng)疹(fēnɡzhěn)、巨細(xì)胞病毒、單純性皰疹、梅毒、弓形體病毒代謝失調(diào)：克汀病、糖尿病、苯丙酮酸尿、男性化腫瘤、高溫藥物和化學(xué)品：反應(yīng)停、Abameetin、酒精、氨基蝶呤、雄性激素、麻醉劑、抗甲狀腺藥物、白消安、咖啡因、氯代聯(lián)苯類、香豆素抗凝劑、環(huán)磷酰胺、二已基乙烯雌酚、敵螨普、三氟氯溴乙烷、異維A酸、鋰、甲巰咪唑、有機(jī)汞化合物、有機(jī)溶劑類、苯妥因、腐霉利、四環(huán)素、三甲惡唑烷二酮、丙(基)戊酸第一百零八頁，共130頁。108第一百零九頁，共130頁。109確認(rèn)人類致畸物的標(biāo)準(zhǔn)一種特殊的缺陷或幾種缺陷并發(fā)（綜合征）的頻率突然增加；缺陷的增加與某種已知的環(huán)境改變（如一種新藥廣泛應(yīng)用）相關(guān)聯(lián)；在妊娠的特殊階段已知暴露于某種環(huán)境的改變，產(chǎn)生有特征性缺陷的綜合征；缺少妊娠時(shí)引起的特征性缺陷嬰兒(yīngér)的其他共同的因子。第一百一十頁，共130頁。110（1）國際生物科學(xué)研究所:1989年根據(jù)動(dòng)物試驗(yàn)中發(fā)育毒性(dúxìnɡ)效應(yīng)的類型、嚴(yán)重性和發(fā)病率，將化學(xué)物分成四類，并規(guī)定了不同類型安全系數(shù)范圍。二、人群(rénqún)流行病學(xué)研究3.致畸物及發(fā)育(fāyù)毒物的危險(xiǎn)性分類第一百一十一頁，共130頁。1113.致畸物及發(fā)育毒物(dúwù)的危險(xiǎn)性分類二、人群(rénqún)流行病學(xué)研究（2）ICH（人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)）人用藥物危險(xiǎn)性分類ICH規(guī)定(guīdìng)：分為5類，要求醫(yī)生在開處方時(shí)遵守，使懷孕婦女按規(guī)定(guīdìng)使用這些藥品。第一百一十二頁，共130頁。112A、B、C2：僅在明顯需要時(shí)，妊娠期間可使用；C1：僅在如果證明可能的效益與對胎兒的可能的危險(xiǎn)比較是可取時(shí)，妊娠期間可使用；D：如果在懷孕(huáiyùn)期間使用，應(yīng)通知病人對胎兒可能的危害；X：在懷孕(huáiyùn)或可能懷孕(huáiyùn)的婦女中禁止使用。（2）ICH人類用藥(yònɡyào)危險(xiǎn)度分類第一百一十三頁，共130頁。113（3）美國(měiɡuó)FDA關(guān)于妊娠期和哺乳期用藥的危險(xiǎn)性分類妊娠類用藥分類與ICH相同；哺乳期用藥也分為(fēnwéi)5類：L1很安全，L2安全，L3中等安全，L4有害，L5禁忌（4）WHO和全球(quánqiú)化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度（GHS）對于生殖毒物的危害分類和哺乳期影響的危害分類；第一百一十四頁，共130頁。1141.體外初篩試驗(yàn)體外初篩試驗(yàn)中，大鼠全胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、大鼠胚胎肢芽微團(tuán)實(shí)驗(yàn)和小鼠胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)得到歐洲替代方法驗(yàn)證中心（ECVAM）驗(yàn)證，并被推薦可作為出生前發(fā)育毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)（OECDTG414）和生殖/發(fā)育毒性(dúxìnɡ)預(yù)篩試驗(yàn)（OECDGL421）三、發(fā)育(fāyù)毒性的初篩和替代試驗(yàn)第一百一十五頁，共130頁。1151.體外初篩試驗(yàn)（1）大鼠全胚胎培養(yǎng)（wholeembryoculture,WEC）：是從孕期第9~10天大鼠子宮取出胚胎，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，觀察胚胎存活（心跳、血液循環(huán)）和生長發(fā)育情況（卵黃囊直徑、顱臀長和頭長、體節(jié)數(shù)和胚胎重）；根據(jù)Brown評分對器官形態(tài)分化做出評價(jià)?？梢院Y選化學(xué)物的發(fā)育毒性(dúxìnɡ)、探討其劑量反應(yīng)關(guān)系和作用機(jī)制。優(yōu)點(diǎn)：快速檢驗(yàn)致畸原；經(jīng)濟(jì)；能精確的控制胚胎的暴露。不足：技術(shù)操作要求精確，比較費(fèi)力；胚胎僅在器官發(fā)生期相對短暫的時(shí)間內(nèi)接觸藥物三、發(fā)育毒性的初篩和替代(tìdài)試驗(yàn)第一百一十六頁，共130頁。1161.體外初篩試驗(yàn)（2）胚胎細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)（micromassculture）：從孕期11天的大鼠胚胎獲取中腦區(qū)、肢芽區(qū)等部位細(xì)胞微團(tuán)，在培養(yǎng)瓶中，與化學(xué)物接觸共培養(yǎng)5天?？梢杂弥行约t染色判斷細(xì)胞存活；用Alcian藍(lán)染色判斷肢芽軟骨細(xì)胞分化數(shù)量(shùliàng)；蘇木素染色判斷CNS細(xì)胞分化數(shù)量(shùliàng)。求出IC50，評價(jià)化學(xué)毒物的細(xì)胞毒性和發(fā)育毒性。三、發(fā)育毒性的初篩和替代(tìdài)試驗(yàn)第一百一十七頁，共130頁。1171.體外初篩試驗(yàn)（3）小鼠胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)（embryostemcelltest,EST）：小鼠胚泡內(nèi)細(xì)胞團(tuán)衍生的胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞），在特定條件下，可定向分化為機(jī)體多種細(xì)胞，可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞分化、組織形成過程的發(fā)育(fāyù)毒性研究。目前較成熟的ES細(xì)胞是小鼠ES細(xì)胞株D3，可分化為心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、胰島細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等。優(yōu)點(diǎn)