不同地方區(qū)域麻黃中麻黃堿含量的測定

中國是世界上惟一的天然麻黃堿生產國，麻黃為我國特產中藥。我國麻黃的主要產地是內蒙古，其次是新疆、山西、吉林、遼寧、寧夏、甘肅、陜西、河北、河南等地。草麻黃產量最大，麻黃商品主流；中麻黃次之，木賊麻黃產量最小。其他藥源：麗江麻黃產云南，四川，貴州。表面具較粗深的縱溝紋。膜質葉先端2裂。麻黃堿含量不少于0.6％。每年僅新疆地區(qū)，消耗麻黃草的用量在8～10萬噸左右。由于生長麻黃草的主產區(qū)是中國沙漠化最為嚴重的地方。而麻黃草又是這些地區(qū)的主要固沙植物，所以，近年來麻黃草的過度采挖，已經對這些地區(qū)的生態(tài)環(huán)境造成了嚴重影響。因此。以化學合成手段生產符合市場要求的麻黃堿將是減少麻黃草的采挖，保護生態(tài)環(huán)境，滿足市場需求的有效途徑。目前，化學合成手段生產麻黃堿面臨的主要問題是如何低成本地得到光學純的產物。后面合成的時候我們再具體介紹。三種麻黃的性狀比較：草麻黃（1）呈細長圓柱形，略扁，少分枝，直徑l～2mm。（2）表面淡綠色至黃綠色，有細縱棱線，觸之微有粗糙感。（3）節(jié)明顯，節(jié)間長2～6cm。節(jié)上有膜質鱗葉，裂片2（稀3），銳三角形，先端灰白色，反曲，基部連合成筒狀，紅棕色。（4）體輕，質脆，易折斷。斷面近圓形，略呈纖維性，周邊黃綠色，中央髓部紅色或紅棕色，類圓形。（5）氣微香，味澀、微苦。選擇時：以干燥、莖淡綠、內心充實紅棕、手拉不脫節(jié)、味苦澀者為佳。中麻黃：（1）多分枝，直徑1.5mm～3mm，有粗糙感。（2）節(jié)間長2cm～6cm。（3）膜質鱗葉長2mm～3mm，裂片3（稀2），先端銳尖、斷面髓部呈三角狀圓形。莖節(jié)表面觀木賊麻黃：（1）較多分枝,直徑1～1.5mm，無粗糙感。（2）節(jié)間上1.5cm～3cm，膜質鱗葉長1～2mm，裂片2（稀3），上部為短三角形，灰白色，先端多不反曲，基部棕紅色至棕黑色。

三種麻黃的共性：①均具節(jié)與節(jié)間。②表面具縱棱線。③葉退化成膜質鱗葉，基部聯(lián)合成筒狀。④折斷時有粉塵飛出。⑤斷面髓部紅棕色（玫瑰心）。⑥味苦澀（生物堿、鞣質）。【采收加工】秋季采割綠色的草質莖，陰干或晾至七成干時曬干。曝曬過久則色易變黃，受霜凍則色變紅，均影響藥效。本實驗對不同溶劑提取麻黃的方法進行比較，采用HPLCc4法測定不同產地麻黃中麻黃堿的含量，為制劑越婢加術顆粒的麻黃藥材來源提供可靠保障。一，麻黃與麻黃堿的來源之異同：麻黃的來源：麻黃是一種藥用植物,為麻黃科植物草麻黃或木賊麻黃或中麻黃的干燥草質莖。麻黃是一種與麻黃堿同效的草藥,而麻黃堿是其主要有效成分之一,5中國藥典6規(guī)定麻黃草中麻黃堿(C10H15NO)的含量018%以上才符合藥用標準。麻黃堿的來源：麻黃堿可以從麻黃植物中提取麻黃堿,也可以有機合成法合成麻黃堿、微生物發(fā)酵生成麻黃堿、細胞培養(yǎng)法生成麻黃堿。二，麻黃的化學成分：麻黃主含生物堿,主要是1-麻黃堿、d-偽麻黃堿、麻黃次堿及甲基麻黃堿和去甲基麻黃堿等,另含少量的揮發(fā)油、有機酸等成分。其中主要藥用成分為麻黃堿和偽麻黃堿。麻黃堿是植物麻黃的主要藥用成分之一。三，麻黃與麻黃堿的藥理作用之異同：麻黃的藥理作用：（1）發(fā)汗作用：麻黃發(fā)汗作用已為幾千年臨床所證實,古人也正是利用其發(fā)汗作用,治療風寒束表、發(fā)熱無汗的表實證。實驗證明,麻黃的揮發(fā)油有發(fā)汗作用,也曾有人觀察到在一般情況下,麻黃雖不能誘發(fā)人體出汗,但當人處在溫熱環(huán)境中,用麻黃50~60mg、經015~210h后,汗腺分泌確比未用麻黃者更多、更快。其發(fā)汗作用,有人認為可能是由于麻黃阻礙了汗腺導管對鈉的重吸收而導致汗液分泌增加?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn),麻黃根的生物堿部分能抑制低熱和煙堿所致的發(fā)汗,此與臨床經驗相吻合。（2）平喘作用麻黃平喘作用,沿用千年,但其作用及作用機理的探討,直至21世紀30年代始進行。大量的試驗研究證明,麻黃堿是平喘的有效成分。其平喘機理主要是通過以下環(huán)節(jié)實現(xiàn)的。(1)促進腎上腺素能神經和腎上腺髓質嗜鉻細胞釋放去甲腎上腺素和腎上腺素而間接發(fā)揮擬腺素的作用。(2)因其化學結構與腎上腺素相似,亦可直接與支氣管平滑肌上的B-腎上腺素受體結合,使支氣管平滑肌松弛。(3)阻止過敏介質的釋放。(4)直接興奮A-腎上腺素受體,使末梢血管收縮,從而可緩解支氣管粘膜的腫脹,對哮喘的發(fā)作和預防有效。麻黃堿的平喘作用與腎上腺素相比,其特點是顯效較慢,而作用溫和、持久,且口服有效。（3）利尿作用麻黃有一定的利尿作用,以d-偽麻黃堿作用最顯著。利尿作用的機理,有人認為是由于其擴張腎血管使腎血流增加的結果,也有人認為是阻礙腎小管對鈉離子重吸收的緣故。（4）升高血壓麻黃堿能興奮腎上腺素能神經而使心跳加快,心肌收縮力增強,心輸出增加,血管收縮,血壓升高。因其同時興奮A、B-腎上腺素受體。故收縮壓的升高較舒張壓明顯,其升壓特點是緩慢、溫和、持久,反復應用易產生快速耐受體。（5）興奮中樞神經系統(tǒng)麻黃對中樞神經系統(tǒng)有興奮作用,以麻黃堿最為突出,治療劑量即能興奮大腦皮質和皮質下中樞,引起精神興奮、失眠等癥狀,并可縮短巴比妥類催眠作用時間,亦能興奮中腦,延腦呼吸中樞和血管運動中樞。（6）解熱、抗病毒。麻黃堿的藥理作用：對心血管系統(tǒng)的作用(1)對心臟的影響麻黃堿通過激動B受體,加快心率,增加收縮力。(2)對血管及血壓的影響麻黃堿激動A受體而收縮動脈。麻黃堿和偽麻黃堿均有升高血壓、增加心輸出量的作用。對胃腸道、氣管、輸精管等平滑活動的影響麻黃堿激動A受體增強小鼠輸精管的自發(fā)收縮活動,同時麻黃堿作用于突觸前膜受體,而增強電刺激致小鼠輸精管的收縮[1,2]。激動B受體,舒張氣管平滑肌,且麻黃堿與異丙腎上腺素有交叉脫敏現(xiàn)象。對神經肌肉傳遞的作用低濃度麻黃堿可通過選擇性激動B2受體,而拮抗高K去極化引起的大鼠膈肌麻痹。對中樞神經系統(tǒng)的作用麻黃堿興奮中樞神經系統(tǒng)。1儀器與試藥1．1儀器島津(SHIMADZU)LC高效液相色譜儀，SHIMADZULC一20AT多功能紫外檢測儀，SHIMADZUSPD一20A型泵，LCsolutionLite色譜工作站，海爾冰箱，萬用電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)，循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)，1／10萬分析天平(上海精天電子儀器廠)，超聲波清洗器(鞏義市予華儀器有限責任公司，型號KQ一500E)，回流裝置。1．2試藥甲醇(上海沃凱)色譜純，乙腈(上海沃凱)色譜純，甲醇，磷酸二氫鉀，三乙胺，磷酸，95％乙醇，鹽酸均為分析純，娃哈哈純凈水，氫氧化鈉，鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品鑒定所，批號1241—200102，含量>99．9％)，蒸餾水。1．3藥材4種麻黃藥材來源于哈爾濱醫(yī)科大學大慶校區(qū)中藥標本館，經該校生藥研究室魏東華教授鑒定均為麻黃科植物草麻黃(Ephedraesinicastapf)的干燥草質莖。2方法和結果2．1色譜條件色譜柱為INERTSILODS—SP柱(4．6mnl×150mm，5m)，檢測波長：205nm，流動相：乙腈一(0．02mol／L磷酸二氫鉀+0．02％三乙胺+0．2％磷酸水溶液)(10：90)，流速：1ml／min，進樣量10l。2．2溶液制備2．2．1對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿標準品4mg，置50ml量瓶中，甲醇溶液稀釋至刻度，得80g／ml對照品溶液。2．2．2樣品溶液的制備分別精密稱取產地為山西、河北、陜西、內蒙的麻黃粗粉各5g，各置于250ml圓底燒瓶中，加70％乙醇50ml回流1h，過濾，重復回流3次，合并濾液，最后制成每100ml相當麻黃生藥lg的4份不同產地的麻黃樣品溶液。對照品和樣品色譜圖如圖1。1．鹽酸麻黃堿圖1對照品(A)樣品(B)HPLC色譜圖2．3線性關系考察精密吸取8Og／ml對照品溶液l0、8、6、5和2．5Tn1分別置10m1量瓶中，甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為80、64、48、40和20g／IIll的對照品溶液，在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液各10l進樣，記錄色譜峰峰面積，以鹽酸麻黃堿對照品的含量(g)為橫坐標，峰面積積分值l，為縱坐標進行回歸，得回歸方程為Y=5E+0．6X+119445(r=0．9997)，線性范圍為0．2—0．8g02．4精密度試驗精密吸取對照品溶液10，分別自上述色譜條件下，連續(xù)進樣5次，記錄色譜峰面積，計算麻黃堿峰面積積分值，RSD值為0．71％。理論塔板數(shù)為2354，表明儀器的精密度良好。2．5穩(wěn)定性試驗精密吸取山西樣品溶液，于配制后0、2．5、5．0、7．5、10．0和l2．5h自上述色譜條件下分別進樣測定，共測定5次，記錄色譜峰面積，計算麻黃堿峰面積積分值，RSD值為1．53％。表明山西樣品溶液在l2．5h內穩(wěn)定。2．6加樣回收率試驗精密稱取已知麻黃堿含量的山西麻黃5份，每份2．5g，分別準確加入鹽酸麻黃堿標準品適量，依照樣品溶液的制備方法制備成5份樣品，按上述色譜條件進樣，記錄麻黃堿峰面積，計算麻黃堿平均回收率(r／,=5)為98．21％，RSD值為0．79％。2．7提取方法的確定本實驗在考察含量測定的同時，注重提取方法的研究。本實驗對水蒸氣蒸餾法，酸水回流法，乙醇回流法，鹽酸乙醇回流法，半仿生法進行了對比[引。2．7．1水蒸氣蒸餾法取麻黃粗粉10g，置圓底燒瓶中，加100ml水，冷浸10min，回流3次，分別為1、0．5和0．5h，每次過濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。2．7．2酸水回流法取麻黃粗粉10g，置圓底燒瓶中，加100ml水，O．75ml鹽酸，冷浸10min，回流3次，分別為l、0．5和0．5h，每次過濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。2．7．3乙醇回流法取麻黃粗粉10g，置圓底燒瓶中，加60％乙醇100ml，回流3次，每次1h，每次過濾，合并濾液，濃縮，于6O℃干燥，稱重。2．7．4酸水乙醇回流法取麻黃粗粉l0g，置圓底燒瓶中，加60％乙醇100ml，0．75ml鹽酸，回流3次，分別為1、0．5和0．5h，每次過濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重"J。2．7．5半仿生法取麻黃粗粉1Og，置錐形瓶中，加100ml水，加鹽酸調至pH=1，煎煮0．5h，過濾，濾渣加80ml水，加氫氧化鈉調至pH=10，煎煮2次，每次0．5h，每次過濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。精密吸取按上述5種方法提取的麻黃浸膏適量，分別加入甲醇適量制成每100ml相當麻黃生藥1g的樣品溶液。精密吸取對照品溶液和上述5種樣品溶液各10l，按照“2．1”項下色譜條件分別進樣，記錄色譜峰面積，計算麻黃堿含量，結果半仿生法從麻黃中提取的鹽酸麻黃堿含量最高，乙醇回流法次之，其次為鹽酸乙醇回流法，酸水回流法，水蒸氣蒸餾法?？紤]到乙醇回流法較半仿生法差距不甚顯著，且半仿生法對實驗器材要求較高，由此確定了乙醇回流法為提取麻黃較好的方法，其原因在于游離的麻黃堿在提取和干燥的過程中易蒸發(fā)損失，水的沸點比乙醇高，因而損失較多，乙醇可減少蒸發(fā)損失，提取量也較高引。見表1。表1提取方法結果比較2．8樣品含量測定結果精密吸取“2．2．2”項下方法制備的四種不同產地麻黃樣品溶液l0l，按“2．1”項下色譜條件，分別注入液相色譜儀，每份測定3次，記錄峰面積，計算樣品溶液中麻黃堿含量。結果見表23討論：HPLC法測定麻黃堿含量的報道較多，色譜條件多樣，本實驗分別考察了5種流動相：甲醇一水、乙腈一水、乙腈一0．1％磷酸