動物生物化學實驗

動物生物化學實驗主講：伍紅西南民族大學生命科學與技術學院動物生物化學實驗實驗一實驗室基本知識實驗二氨基酸紙層析實驗三血清蛋白含量測定實驗四影響酶活性的因素實驗五脂質的薄層層析實驗六凝膠層析法基本練習實驗七血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗八動物組織中DNA提取實驗一實驗室基本知識一、實驗室規(guī)則二、實驗室常用量器及儀器設備介紹三、試劑配制四、實驗誤差與克服五、實驗室安全知識簡介六、實驗記錄及實驗報告一、實驗室規(guī)則1.實驗前認真預習實驗內容。2.實驗時遵守課堂紀律，不大聲喧嘩。3.嚴格按操作規(guī)程操作。4.愛護實驗室各種器具及儀器設備，如有損壞，及時報告，并按規(guī)定賠償。5.公用試劑用后放回原處，瓶蓋隨開隨蓋防止污染。6.注意安全，不得將易燃試劑接近火焰，嚴禁用口吸取有毒藥品和試劑，凡發(fā)生煙霧，有毒氣體和不良氣味的實驗應在通風櫥內進行。7.保持實驗室整潔，每次實驗畢，由三個組同學打掃及整理實驗室。二、實驗室常用量器及儀器設備介紹1.常用量器（1）容量瓶

凡要求準確（0.01)配制一定濃度的溶液時，必須使用容量瓶。以容量瓶配制試劑時的操作（2）刻度吸管（3）移液器2.常用儀器設備（1）離心機承載離心管，并以離心力使管內物質沉降進而造成固體和液體分離的機具。高速冷凍離心機離心技術簡介

離心技術在生物科學，特別是在生物化學和分子生物學研究領域，已得到十分廣泛的應用，每個生物化學和分子生物學實驗室都要裝備多種型式的離心機。

離心技術主要用于各種生物樣品的分離和制備。

生物樣品懸浮液在高速旋轉下，由于巨大的離心力作用，使懸浮的微小顆粒（細胞器、生物大分子的沉淀等）以一定的速度沉降，從而與溶液得以分離，而沉降速度取決于顆粒的質量、大小和密度。離心力：：當一個粒粒子（生生物大分分子或細細胞器））在高速速旋轉下下受到離離心力作作用時，，此離心心力“F”由下下式定義義，即：：F=m·a=m.V2/r=m·ωω2ra—粒粒子旋旋轉的加加速度，，m——沉沉降粒子子的有效效質量，，ω—粒子子旋轉的的角速度度，r—粒子子的旋轉轉半徑(cm)。。離心的基基本原理理相對離心心力：離心力常常用地球球引力的的倍數來來表示，，因而稱稱為相對對離心力力“RCF”。?；蛘哂糜脭底殖顺恕癵””來表示示。相對離心心力是指指在離心心場中，，作用于于顆粒的的離心力力相當于于地球重重力的倍倍數，單單位是重重力加速速度“g”（980cm/sec2），相對離心心力RCF可用下式式計算：：RCF=1.119×10－5×(rpm)2r(rpm——revolutionsperminute每每分鐘轉轉數，r/min)由上式可可見，只只要給出出旋轉半半徑r，，則RCF和rpm之之間可以以相互換換算。但但是由于于轉頭的的形狀及及結構的的差異，，使每臺臺離心機機的離心心管，從從管口至至管底的的各點與與旋轉軸軸之間的的距離是是不一樣樣的，所所以在計計算時規(guī)規(guī)定旋轉轉半徑均均用平均均半徑““rav”代替：：rav=(rmin＋rmax)/2Rmin旋轉軸RaveRmaxr的測量量離心機可可分為工業(yè)用離離心機和和實驗用用離心機機實驗用離離心機又又分為：：制備型離心心機：主要用于分分離各種生生物材料，，每次分離離的樣品容容量比較大大.分析型離心心機：一般都帶有有光學系統統，主要用用于研究純純的生物大大分子和顆顆粒的理化化性質，依依據待測物物質在離心心場中的行行為（用離離心機中的的光學系統統連續(xù)監(jiān)測測），能推推斷物質的的純度、形形狀和分子子量等。分分析性離離心機都是是超速離心心機。工業(yè)離心機機：主要用用于工業(yè)上上的分離。。離心機的主主要類型制備性離心心機可分為為三類：普通離心機機：最大轉速6000rpm左左右，最大大相對離心心力近6000×g，容量為為幾十毫升升至幾升，，高速冷凍離離心機：最大轉速為為20000～25000rpm（r/min），最大大相對離心心力為89000××g，最大大容量可達達3升，超速離心機機：轉速可達50000～80000rpm，相相對離心力力最大可達達510000×g，最著名名的生產廠廠商有美國國的貝克曼曼公司和日日本的日立立公司等，，離心容量量由幾十毫毫升至2升升超速離心機機（2）分光光光度計分光光度計計是現代生生化及分子子生物學實實驗室常規(guī)規(guī)儀器。常常用于核酸酸，蛋白定定量以及細細菌生長濃濃度的定量量?；驹砣芤褐械奈镂镔|在光的的照射下，，產生了對對光吸收的的效應，物物質對光的的吸收是具具有選擇性性的。各種種不同的物物質都具有有其各自的的吸收光譜譜，因此當當某單色光光通過溶液液時，其能能量就會被被吸收而減減弱，光能能量減弱的的程度和物物質的濃度度有一定的的比例關系系，也即符符合比色原原理——蘭蘭伯特-比比耳定律（3）電熱熱恒溫水浴浴鍋三、試劑配配制1.確定所所配試劑濃濃度重量濃度：：單位體積中中所含溶質質的重量。。表示為克克/升（g/L），，或毫克/升（mg/L），，微克/升升（ug/L）百分濃度：：%，需注明明W/W,W/V,V/V摩爾濃度：：每升溶液中中所含溶質質的摩爾數數。mol/L,mmol/L,umol/L2.準確確稱量、量量取3.溶解解4.定容容四、實驗誤誤差與克服服由于外界條條件的影響響、儀器的的優(yōu)劣以及及感覺器官官的限制，，實驗測得得的數據只只能達到一一定的準確確度。實驗測得的的數據與真真實值之間間的差就是是實驗誤差實驗誤差一一般可分為為系統誤差、、偶然誤差差和過失誤誤差。在相同條件件下多次測測量同一物物理量時，，測量誤差差的大小和和符號都不不變；在改改變測量條條件時，它它又按照某某一確定規(guī)規(guī)律而變化化的測量誤誤差稱為系系統誤差。。系統誤差的的特點：和偶然誤差差不同，它它不具有抵抵償性，即即在相同條條件下重復復多次測量量，系統誤誤差無法相相互抵消。。產生系統誤誤差的諸因因素是可以以被發(fā)現和和加以克服服的。系統誤差消除產生系系統誤差的的根源從產生誤差差的根源上上消除系統統誤差是最最根本的方方法。通過過對測量過過程中可能能產生系統統誤差的各各種環(huán)節(jié)作作仔細分析析，找出原原因并在測測量前加以以消除。如果系統誤誤差是由外外界條件變變化引起的的，應在外外界條件比比較穩(wěn)定時時進行測量量。系統誤差的的減小和消消除采用修正法法消除系統統誤差預先將儀器器的系統誤誤差檢定出出來或計算算出來，做做出誤差表表或誤差曲曲線，然后后取與誤差差數值大小小相同、符符號相反的的值作為修修正值，進進行誤差修修正。即：x真=x測+x修如天平砝碼碼不準，應應采用標準準砝碼進行行校核，確確定每個砝砝碼的修正正值。在稱稱量時就應應加上相應應砝碼的修修正值，容容量瓶、滴滴定管、移移液管等容容量儀器均均可用水重重量法求出出各自的修修正值。對消法消除除系統誤差差進行兩次測測量，使兩兩次讀數時時出現的系系統誤差大大小相等、、符號相反反。兩次測測量值的平平均值作為為測量結果果，以消除除系統誤差差。例如，由于于儀器靈敏敏度的限制制，測量儀儀器的旋鈕鈕由右邊調調近測量值值與由左邊邊調近測量量值的結果果往往不同同。這時，，可取兩個個讀數的平平均值作為為測量值。。系統誤差的的消除很難難找到一個個普遍有效效的方法。。這是因為為造成系統統誤差的各各個因素，，沒有內在在的聯系。。要克服它它們，只能能具體問題題具體分析析。在實驗時即即使采用了了最完善的的儀器、選選擇了最恰恰當的方法法、經過了了十分精細細的觀測，，所測得的的數據也不不可能每次次重復，這這樣的誤差差即為偶然然誤差偶然誤差偶然誤差的的克服偶然誤差是是由于相互互制約、相相互作用的的一些偶然然因素所造造成的，它它有時大、、有時小、、有時正、、有時負，，方向不一一定，大小小和符號一一般服從正正態(tài)分布規(guī)規(guī)律。偶然然誤差可采采取多次測量，，取平均值值的辦法來來消除，而而且測量次次數越多（（在沒有系系統誤差存存在的情況況下），平平均值就接接近于"真真值"。五、實驗室室安全知識識簡介（一）實驗驗室安全1.安全全用電2.水火火無情3.嚴防防中毒4.避免免傷害5.生物物危害6.射線線傷害（二）實驗驗室滅火1.切斷斷室內所有有電源，火火源2.報警警3.導線線著火時，，切斷電源源或使用四四氯化碳滅滅火器，不不能用水及及二氧化碳碳滅火器，，以免觸電電4.可燃燃性液體著著火時，可可用濕布或或沙土覆蓋蓋，隔絕空空氣滅火。。不能用水水滅火，這這樣會擴大大燃燒面積積。5.金屬屬鈉著火時時可用砂子子覆蓋6.衣服服著火切忌忌奔走，應應臥地滾動動滅火。（三）實驗驗室急救1.觸電2.玻璃割割傷及其他機機械損傷3.燙傷4.化學試試劑灼傷5.汞中毒毒六、實驗記錄錄及實驗報告告每次實驗要做做到課前認真真預習，實驗驗操作中仔細細觀察并如實實記錄實驗現現象與數據，，課后及時完完成實驗報告告。課前預習實驗課前要將將實驗名稱、、目的和要求求、實驗內容容與原理、操操作方法和步步驟等簡單扼扼要地寫在記記錄本中，做做到心中有數數。實驗記錄準備一本正規(guī)規(guī)的筆記本作作為實驗記錄錄本。將實驗條件下下觀察到的現現象仔細地記記錄下來。將實驗中觀測測的每個結果果和數據及時時如實地記錄錄。實驗中中使用用儀器器的類類型、、編號號以及及試劑劑的規(guī)規(guī)格、、化學學式、、分子子量、、準確確的濃濃度等等，也也應記記錄清清楚。。實驗報報告實驗結結束后后，應應及時時整理理和總總結實實驗結結果，，寫出出實驗驗報告告。按按照實實驗內內容可可分為為