IVF實驗室的基本操作課件

IVF實驗室的基本操作實驗室操作原則

防止污染配子標本的標記；受精、胚胎移植；

兩人核對毒性測試；培養(yǎng)液、耗材的使用；實驗室的質量控制和管理無誤無菌無毒輔助生殖技術基本操作配子、胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)1配子的收集和處理2體外受精技術3胚胎培養(yǎng)和移植4胚胎冷凍和解凍5培養(yǎng)液的準備取卵前一日下午進行原則：高效、方便、安全、經濟四孔培養(yǎng)皿—卵處理精液所需培養(yǎng)液微滴培養(yǎng)—受精卵、胚胎胚胎移植液37℃，5%或6%CO2培箱內平衡過夜卵母細胞的獲取注射hCG后36-38小時取卵陰道超聲探頭引導下經陰道穿刺抽吸卵泡核對姓名解剖顯微鏡下辨認卵冠丘復合物OCCC37℃,5－6%CO2

培養(yǎng)操作迅速，避光精液處理正常精液：同IUI極度少精：增加離心力死精癥：低滲腫脹實驗附睪穿刺精子：睪丸穿刺或活檢精子：

1ml注射器針頭挑碎組織，離心懸液附睪、睪丸精子的冷凍常規(guī)受精

取卵后4-8h

適應癥：精液正常，輕度少、弱精癥受精率：65－80％（MII卵）受精時間：長受精、短受精卵母細胞漿內單精子顯微注射適應癥：嚴重少弱精、梗阻性無精、畸精癥、既往IVF常規(guī)受精失敗史、某些不明原因不孕等時間：取卵后2小時剝卵：利用透明質酸酶（80mIU/ml)和機械法剝除顆粒細胞卵母細胞漿內單精子顯微注射操作滴的準備：7％PVP加精裝針顯微注射受精率：70％非男性因素不孕ICSI治療結局非男性因素不孕癥，ICSI未顯現出優(yōu)勢檢查受精時間：受精后15－18小時機械法除去顆粒細胞及放射冠正常受精：兩個原核，兩個極體合子形態(tài)評價原核的大小、位置及方向核仁前體的數目、大小、分布胞漿的外觀早期卵裂情況異常受精－多PN發(fā)生率：IVF5-8%ICSI1%發(fā)生機制：

2精子進入第2極體滯留雙倍體卵母細胞未見原核－未受精可能機制

卵母細胞未成熟卵母細胞染色體異常卵裂率<10%

染色體二倍體率3%優(yōu)胚率低(12/38)囊胚形成(0/12)(Noyes2008)

胚胎培養(yǎng)胚胎質量評價胚胎評價標準細胞數碎片:無碎片碎片<10%

碎片10－30％碎片30－50％碎片>50%

卵裂球均勻程度

2AA5AA4BA4CC胚胎移植操作選擇需要移植的胚胎,移入移植滴內

35歲以下，首次移植的病人移植2枚胚胎

35歲以上，或非首次移植的病人移植3枚胚胎確認核對患者姓名D3orD5移植？移植液移植液移植液和胚胎氣～20μl 氣胚胎移植操作胚胎的冷凍:慢速冷凍室溫15min室溫5min室溫15minPBS1.5M丙二醇1.5M丙二醇0.1M蔗糖慢凍速融法冷凍程序

20℃→－7℃3℃/min-7℃人工植冰

-7℃→－30℃0.3℃/min-30℃→－120℃30℃/min胚胎復蘇12340.5M丙二醇0.2M蔗糖

5min0.2M蔗糖

5minPBS5min1.0M丙二醇0.2M蔗糖5min預防冰晶的再形成復蘇程序：室溫40s→30℃水浴1min胚胎凍融損傷復蘇胚胎評價：>50%卵裂球完整存活復蘇率>90%無損傷胚胎著床率高部分損傷胚胎著床能力下降玻璃化冷凍原理條件：高濃度冷凍保護劑極快的降溫速度載體：開放式密閉式適應癥：卵母細胞囊胚優(yōu)點：復蘇率高其他技術-IVM未成熟卵母細胞體外成