大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件

人的差異在于業(yè)余時間大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)人的差異在于業(yè)余時間大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!相關(guān)幫助需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎fantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺需要相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問探生網(wǎng)biomean進(jìn)行咨詢，期待您的加入小學(xué)是學(xué)習(xí)語言的最佳年齡段，我們要抓住這一教育的契機(jī)，及時開展口語訓(xùn)練，并探索有效的途徑和方法，讓每一位學(xué)生都樂于交際，善于表達(dá)。目前農(nóng)村小學(xué)存在著教師不懂教，學(xué)生不會說、不敢說、說不好的弊端，因此教師要改革小學(xué)語文口語交際教學(xué)模式，開發(fā)口語交際的訓(xùn)練途徑，用各種方法引導(dǎo)學(xué)生學(xué)會傾聽，樂于表達(dá)，提高學(xué)生口語交際的能力。1.創(chuàng)設(shè)情境進(jìn)行口語交際訓(xùn)練新大綱提出這樣的要求：“要在課內(nèi)外創(chuàng)設(shè)多種多樣的交際情境，讓每個學(xué)生無拘無束地進(jìn)行口語交際”。這是口語交際訓(xùn)練的一條重要途徑。學(xué)生口語交際能力，是在具體情境的實(shí)踐中培養(yǎng)出來的，特別是小學(xué)生，他們年齡小、注意力易分散、形象思維占主要優(yōu)勢，沒有具體的情境，學(xué)生就不可能承擔(dān)有實(shí)際意義的交際任務(wù)，也不可能有雙向互動的實(shí)踐過程，因此，在教學(xué)中教師要為學(xué)生創(chuàng)設(shè)情境訓(xùn)練學(xué)生的口頭表達(dá)能力。1.1實(shí)物創(chuàng)設(shè)情境；小學(xué)生智能發(fā)展尚處于低級階段，他們觀察事物往往比較粗略，因此，在教小學(xué)生說話時，要教會他們觀察。直觀形象的實(shí)物展示，能很快吸引學(xué)生的注意力，易于學(xué)生觀察，引起學(xué)生口語交際的欲望，激發(fā)他們口語交際的熱情。如第六冊語文課本中有口語交際“說家鄉(xiāng)”，教師把一幅幅家鄉(xiāng)的山水畫、果園、田野、建筑、風(fēng)情世俗等熟悉的畫面呈現(xiàn)于學(xué)生面前，學(xué)生個個眼前一亮，隨著教師的相機(jī)點(diǎn)撥，人人有話想說、有話可說，學(xué)生根據(jù)自己喜歡的話題到“家鄉(xiāng)的景”“家鄉(xiāng)的人”“家鄉(xiāng)的建筑”“家鄉(xiāng)的風(fēng)情”小組中交流，然后每小組留下一人，其他成員帶著本組交流成果分別到其他小組分享，這樣學(xué)生入情入境地進(jìn)行口語交際，達(dá)到良好的訓(xùn)練效果。1.2表演創(chuàng)設(shè)情境；兒童是用形象、色彩來思維的，兒童只有通過表演，再現(xiàn)生活情景，從中感受、體驗(yàn)形象，觀察、思維、想象和表達(dá)能力才得到最充分的發(fā)展。如蘇教版二年級上冊練習(xí)4的口語交際“買文具”，這是小學(xué)生社會交際活動中常見的買賣交易，具有濃厚的生活氣息，買賣雙方本著各自的立場說話、做事，教師設(shè)計(jì)兩個層次的問題：“售貨員沒搭理你，怎么說？”“要求調(diào)換商品，怎么說？”，讓學(xué)生在小組內(nèi)扮演交際的主人公張小雨和售貨阿姨的對話情景：張小雨走進(jìn)文具店，沒有稱呼說“我要買一支鋼筆”，售貨員阿姨沒有搭理張小雨，“阿姨，我要買一支鋼筆”，售貨員阿姨隨手拿了一支筆遞給張小雨說“六元伍角一支”，張小雨看了看“這支筆不好，換一支吧，阿姨”“你想要什么檔次的筆？”，“中檔的吧，筆尖細(xì)點(diǎn)的”?！澳憧?，這支筆可以嗎？”“阿姨，請您多拿幾款給我挑選，行嗎？”，售貨員阿姨拿了幾支筆給張小雨，張小雨挑選到滿意的筆付了錢，說“謝謝阿姨！”。學(xué)生在表演的情境中輕松愉快、循序漸進(jìn)、步步深入地進(jìn)行口語交際訓(xùn)練，既順應(yīng)了學(xué)生的認(rèn)識規(guī)律和能力發(fā)展的過程，又有效地培養(yǎng)了學(xué)生良好的說話態(tài)度和語言習(xí)慣。2.聯(lián)系生活進(jìn)行口語交際訓(xùn)練培養(yǎng)學(xué)生的口語交際能力僅僅依靠課內(nèi)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，還必須引導(dǎo)學(xué)生運(yùn)用課內(nèi)學(xué)到的口語交際知識，積極主動地在平時的社會生活中進(jìn)行實(shí)踐。而豐富多彩的生活又給口語交際教學(xué)提供了活水源泉。因此，教師要主動幫助學(xué)生巧搭口語交際的“舞臺”，創(chuàng)設(shè)富有時代感和濃郁的生活情趣的語境，讓學(xué)生在多姿多彩的生活“舞臺”中觀察、表達(dá)，在活動中發(fā)展學(xué)生的口語交際能力。如蘇教版四年級上冊練習(xí)2的口語交際“介紹我的朋友”，讓學(xué)生把朋友帶到自己家中，向爸爸媽媽介紹朋友的年齡、家庭住址、興趣愛好、學(xué)習(xí)、特長等情況，通過這種生活實(shí)踐式的說話訓(xùn)練，讓我真正看到了學(xué)生語言表達(dá)能力的提高，也讓他們學(xué)會了在生活中交際。3.激勵評價進(jìn)行口語交際訓(xùn)練口語交際課上，要重視學(xué)生有興趣，才有交流的動機(jī)，他們需要老師常用肯定和表揚(yáng)的方式來保護(hù)他們的自尊心，激發(fā)他們的上進(jìn)心，如蘇教版三年級上冊的口語交際“介紹我的小制作”，讓學(xué)生把自己制作的過程跟大家說一說，不管學(xué)生講得是否有條理，只要他（她）想說、敢說，老師要耐心地聽學(xué)生發(fā)言，不要輕易打斷學(xué)生的思路；要善于發(fā)現(xiàn)學(xué)生微小的進(jìn)步及時肯定，不要輕易挑剔學(xué)生這個詞“不規(guī)范”，那個詞“有毛病”，即使某個詞說錯了，也要允許或提醒他重新?lián)Q個詞再說。小學(xué)生初練口語，往往語無倫次，更需要老師的細(xì)心呵護(hù)?？傊?，口語交際是人人必需掌握的工具，生活就是口語交際的內(nèi)容。我們老師應(yīng)培養(yǎng)和提高學(xué)生口語交際能力的多種切入點(diǎn)，創(chuàng)設(shè)寬松、愉悅的交際環(huán)境，讓學(xué)生創(chuàng)造性地說練，學(xué)生的口語交際能力一定會不斷提高，從而提高學(xué)生的綜合素質(zhì)。德育工作是學(xué)校教育的核心和關(guān)鍵，是全面發(fā)展教育的重要組成部分。特別是在我們農(nóng)村小學(xué)，由于相對貧窮落后，好多父母外出務(wù)工，加上小學(xué)生年齡小自我約束力差，在這種家庭德育教育滯后的情況下，就貪玩了，厭學(xué)了，也任性妄為了。在這種環(huán)境下，德育工作在農(nóng)村教育中就顯得尤為重要。由于受人文素質(zhì)和地理環(huán)境的影響，農(nóng)村的德育比起城市搞起來要難，在現(xiàn)實(shí)生活中，我們農(nóng)村學(xué)校的教育很難融入到家庭教育和社會環(huán)境中。比如，在學(xué)校教育中，同學(xué)們能互相關(guān)心、熱愛勞動，而回到家里則衣來伸手，飯來張口，一切勞動都有家長來承包，不懂得關(guān)心父母和長輩，成為了小皇帝。學(xué)校教育大打折扣。由此可見，如何對農(nóng)村學(xué)生開展道德教育，使德育的實(shí)效性更能顯現(xiàn)出來是擺在我們面前的一個不容忽視的問題。下面就我?guī)资甑牡掠ぷ?，總結(jié)出以下幾種方法：一、言傳身教影響學(xué)生，使學(xué)生知道應(yīng)該做什么，不該做什么記的《中國青年報》上看到過這樣一段話：“一個孩子，從小崇拜爸爸媽媽。一上學(xué)就開始崇拜老師，不再崇拜家長。原因一個是老師知識多了，更重要的是，孩子從人格上不再崇拜父母，因?yàn)楦改刚f話總不算數(shù)，或者家長自己說的，卻經(jīng)常做不到?！边@一段話說得是比較中肯的。在工作中我總是嚴(yán)格要求自己，注意自己的一言一行，平時我要求學(xué)生不遲到、不早退，那么我本人在工作中首先就早來晚走，經(jīng)常深入班級。有的學(xué)生自習(xí)時坐不住凳子，我就在這個時間到教室里備課、改作業(yè)，這樣做既保持了自習(xí)紀(jì)律，又為那些坐不住凳子的學(xué)生作了“示范”。應(yīng)該說，教師的一舉一動都潛移默化地影響著學(xué)生。從老師的身上，學(xué)生們會無形中感到什么是應(yīng)該做的，什么是不應(yīng)該做的他們會自覺地遵守學(xué)校的各項(xiàng)規(guī)章制度，自覺地約束好自己、管理好自己。二、既做慈母，又做嚴(yán)父作為教師，我們不僅要真心誠意地把你的愛心奉獻(xiàn)給有些學(xué)生時，使他們克服缺點(diǎn)、改正毛病。更要應(yīng)用情感教育進(jìn)行教學(xué)。如對那些平時比較散漫、不夠遵守紀(jì)律的學(xué)生應(yīng)耐心地給他們講道理;對他們的生活也特別關(guān)心，有的學(xué)生生病時我從家里給他們拿藥、買營養(yǎng)品;有的學(xué)生家庭困難，我毫不吝惜地資助他們生活費(fèi)?？墒?，對學(xué)生同時應(yīng)有嚴(yán)格要求。在《現(xiàn)代漢語詞典》中就有“慈”是母親，“嚴(yán)”是父親的解釋。而老師，尤其是班主任，則應(yīng)該既要當(dāng)好母親，又要做好父親，也就是對學(xué)生既要慈愛，又要嚴(yán)管。正如小樹的成長，既需要澆灌，也需要修剪。實(shí)際上，慈愛是愛，嚴(yán)管又何嘗不是愛呢？古人云：“君子愛人以德，小人愛人以姑息?！蔽覀兘處煻紤?yīng)該是君子。因此在情感教育的前提下，對那些經(jīng)常犯錯誤的學(xué)生，我總是讓他們嚴(yán)格遵守《小學(xué)生守則》和《小學(xué)生日常行為規(guī)范》，并配以靈活的措施。這樣才能讓學(xué)生們感到他們是生活在充滿溫暖而又有秩序的集體中。三、教育學(xué)生樹立遠(yuǎn)大的理想，并為自己理想的實(shí)現(xiàn)而努力幫助學(xué)生們樹立遠(yuǎn)大理想，并且引導(dǎo)他們?yōu)閷?shí)現(xiàn)自己的理想而奮斗是教師義不容辭的責(zé)任。但是，對“理想”這個誘人的字眼兒，談起來容易，要實(shí)現(xiàn)起來就困難了。作為教師，既要用理想激發(fā)學(xué)生們?nèi)タ炭鄬W(xué)習(xí)，又要幫助他們克服前進(jìn)道路上的障礙。對于每位小學(xué)生來說，他們的思想容易波動，情緒不夠穩(wěn)定，遇到困難猶豫徘徊，這些雖然屬于正?，F(xiàn)象，但卻很容易影響他們的學(xué)習(xí)積極性，那么教師就要經(jīng)常給他們講述學(xué)習(xí)的目的，激發(fā)他們拼搏進(jìn)取，讓他們清楚刻苦學(xué)習(xí)是實(shí)現(xiàn)理想的重要途徑。四、利用我們中華民族的傳統(tǒng)美德去影響學(xué)生的實(shí)際行為中華民族有著悠久的傳統(tǒng)美德，很多名人、偉人他們在立德修身、治國安邦方面有著感人的故事。像疏食淡飯不改其志的孔子，威武不屈、忠貞如一的蘇武，憂樂天下的范仲淹，萬古忠義的岳武穆等等。把這些可歌可泣的人物歷史事跡講給學(xué)生們聽，在思想上培養(yǎng)他們高尚的道德情操，引導(dǎo)他們走向人生正道。當(dāng)然這些人物事跡卻代替不了學(xué)生們的實(shí)際行動，作為德育工作者就是要讓學(xué)生把傳統(tǒng)美德教育與社會現(xiàn)實(shí)有機(jī)地結(jié)合起來，培養(yǎng)出有健康的、高尚的品德、有上進(jìn)心的一代新人。五、把嚴(yán)肅的紀(jì)律與活潑的班風(fēng)結(jié)合起來一個班級具有嚴(yán)肅的紀(jì)律是每個學(xué)生順利學(xué)習(xí)的保證，而活潑的班風(fēng)又能使每個學(xué)生以更加愉快的心情，飽滿的熱情投入到學(xué)習(xí)中去。嚴(yán)肅的紀(jì)律與活潑的班風(fēng)，二者缺一不可。在一個積極上進(jìn)的班集體中，每個學(xué)生會更加遵守紀(jì)律。所以在我擔(dān)任班主任時，總要與同學(xué)們制定一個切實(shí)可行，讓每一名學(xué)生沒有理由不執(zhí)行的班規(guī)，一旦有人違背這個班規(guī)，將要受到嚴(yán)肅的批評。與此同時，我又千方百計(jì)地創(chuàng)造一個活潑的班風(fēng)，鼓勵同學(xué)們積極參加學(xué)校組織的各項(xiàng)有意義活動。如演講比賽、體育競賽，學(xué)雷鋒活動。這些活動，豐富了學(xué)生們的學(xué)習(xí)生活，促進(jìn)了他們學(xué)習(xí)成績的提高，培養(yǎng)了他們的集體榮譽(yù)感。學(xué)校德育是一項(xiàng)系統(tǒng)的復(fù)雜的多環(huán)節(jié)密切配合的工作。任何環(huán)節(jié)的疏忽都會使德育效果大打折扣，我們做農(nóng)村德育工作者更要有師德之心、師德之范、師德之行，這樣才能搞好我們農(nóng)村學(xué)校的德育工作，才能使農(nóng)村學(xué)校的德育工作開出一片藍(lán)天，贏來一片曙光。人的差異在于業(yè)余時間大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)1大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件3大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件4大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件5細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法6結(jié)合生化和化學(xué)手段把已經(jīng)剪切成較小體積的組織進(jìn)行進(jìn)一步分離，制成細(xì)胞懸液。主要有：胰蛋白酶法膠原酶法EDTA法結(jié)合生化和化學(xué)手段把已經(jīng)剪切成較小體積的組織進(jìn)行進(jìn)一步分離，7細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法8從供體取得器官或器官組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在一定環(huán)境中培養(yǎng)，保持其原有器官細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和聯(lián)系并生存。從供體取得器官或器官組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在一定環(huán)境9體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型貼附型:細(xì)胞貼附在支持物上生長懸浮型：不貼附于支持物，呈懸浮生長體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型貼附型:細(xì)胞貼附在支持物上生長10細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用品細(xì)胞培養(yǎng)液、培養(yǎng)基準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備11“無菌”大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件12細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室無菌操作區(qū)（無菌操作室、超凈臺）孵育區(qū)制備區(qū)儲藏區(qū)清洗和消毒滅菌區(qū)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室無菌操作區(qū)（無菌操作室、超凈臺）13培養(yǎng)試劑的配制Hank’s液(單位g)CaCl20.14KCl0.4KH2PO40.06MgSO4.7H2O0.10NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.12D-glucose1.0Phenolred0.01培養(yǎng)試劑的配制Hank’s液14將CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在750mL的ddH2O中，混勻（用磁力攪拌器攪拌至溶解），定容至1000mL。高壓蒸氣消毒10分鐘，4℃冰箱保存。將CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在15D-Hank’s液（單位：g）KCl0.40KH2PO40.06NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.08Phenolred0.02D-Hank’s液（單位：g）16將以上成分溶于900mLddH2O中，充分混勻，加ddH2O至1000mL。高壓蒸氣消毒10分鐘，4℃冰箱保存。將以上成分溶于900mLddH2O中，充分混勻，加ddH217青霉素、鏈霉素液配制青霉素80萬U加Hank’s液至80mL，終濃度1萬u/mL鏈霉素100萬U（相當(dāng)于1g）加Hank’s液至100mL，終濃度10mg/mL分裝后至-20℃冰箱保存。青霉素、鏈霉素液配制18DMEM培養(yǎng)液900mLddH2O于1000mL容器中，將DMEM粉1包倒入容器中，盛粉袋用50mLddH2O分次沖洗，也倒入容器，磁力攪拌溶解。加NaHCO3調(diào)PH至7.2加青、鏈霉素至終濃度100u/mL和100ug/mL0.22umX50濾膜過濾（負(fù)壓泵抽吸），4℃冰箱保存。DMEM培養(yǎng)液19小牛、胎牛血清滅活55℃水浴箱30分鐘，置4℃冰箱保存滅活前放于-20℃冰箱保存待用臨用前加入DMEM液中小牛、胎牛血清滅活20平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)方法動物：大鼠150～180g，2～3只平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)方法動物：大鼠150～180g，2～3只21操作步驟大鼠頸椎脫臼致死固定操作步驟大鼠頸椎脫臼致死22消毒胸腹部大組織鑷、組織剪切開胸腹部皮膚另一組織鑷、組織剪切開胸腹部，并切除部分胸壁以利暴露眼科鑷和眼科彎剪分離胸腹主動脈并放入盛有Hank’s液的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，轉(zhuǎn)入無菌室。或先用生理鹽水漂洗，再放Hank’s液中，轉(zhuǎn)入無菌室消毒胸腹部23眼科直鑷和彎鑷去除血凝塊和血管外膜層。放入另一盛有Hank’s液的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，剪去血管外的小分支眼科直鑷和彎鑷去除血凝塊和血管外膜層。24放入含20%胎牛血清的DMEM中，眼科直剪剪開血管腔，以眼科彎鑷輕輕擦拭內(nèi)膜層，以去除內(nèi)皮細(xì)胞放入另一含20%胎牛血清的DMEM中，用眼科彎剪剪碎血管組織至1mm放入含20%胎牛血清的DMEM中，眼科直剪剪開血管腔，以眼科25用吸管把組織塊轉(zhuǎn)入玻璃培養(yǎng)皿中，均勻貼壁，組織塊的間距為0.5cm用吸管把組織塊轉(zhuǎn)入玻璃培養(yǎng)皿中，均勻貼壁，組織塊的間距為0.26蓋好瓶蓋，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，讓瓶底朝上，并向瓶內(nèi)注入適量培養(yǎng)液，于37oC孵箱內(nèi)放置4～5小時，使得組織塊干涸，并與瓶底貼附將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)平放，使組織塊完全浸入培養(yǎng)液中，繼續(xù)靜置3～5天，切勿移動。待有細(xì)胞從組織塊周圍游離出后換液蓋好瓶蓋，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，讓瓶底朝上，并向瓶內(nèi)注入適量培養(yǎng)液27平滑肌細(xì)胞傳代傳代時間：大部分組織塊長出細(xì)胞暈，并與相鄰細(xì)胞暈相接觸時就可以傳代平滑肌細(xì)胞傳代傳代時間：大部分組織塊長出細(xì)胞暈，并與相鄰細(xì)胞28傳代步驟：倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液用D-Hank’s液洗兩遍加2-3滴0.25%胰蛋白酶消化液，平放培養(yǎng)瓶，在倒置纖微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，可見到細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大時迅速翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離消化液傳代步驟：29注意：初次傳代對胰酶敏感，加入消化液30s，即消化充分，以后2分鐘左右注意：30細(xì)胞消化完成后，用吸管反復(fù)抽吸打散細(xì)胞中止消化：加入DMEM培養(yǎng)液3滴管，用吸管反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞離心：1500X5分鐘倒掉液體，加D-Hank’s液洗一次，再加10mLDMEM培養(yǎng)液，用吸管抽吸吹打分散細(xì)胞，分裝于2個培養(yǎng)瓶。在倒置纖微鏡下可見圓形細(xì)胞。放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞消化完成后，用吸管反復(fù)抽吸打散細(xì)胞31血管平滑肌細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇凍存時間：較早期傳代，以防細(xì)胞因?yàn)閭鞔螖?shù)過多而造成細(xì)胞衰老或發(fā)生改變，以保持實(shí)驗(yàn)條件的一致性。凍存方法：凍存前24小時更換培養(yǎng)液，凍存時要將密閉好的凍存管依次放于：4oC2小時-20oC2.5小時液氮表面2小時浸入液氮血管平滑肌細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇凍存時間：較早期傳代，以防細(xì)胞因?yàn)?2培養(yǎng)細(xì)胞的鑒定1、形態(tài)學(xué)鑒定：用相差顯微鏡常規(guī)觀察細(xì)胞生長形態(tài)以及生長規(guī)律。并依據(jù)常規(guī)制作電鏡標(biāo)本進(jìn)行觀察

電鏡觀察結(jié)果：細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，胞漿內(nèi)有肌絲，縱向排列，有密區(qū)，具備平滑肌細(xì)胞特征培養(yǎng)細(xì)胞的鑒定1、形態(tài)學(xué)鑒定：332、免疫組織化學(xué)鑒定：特異性鼠抗α－平滑肌肌動蛋白單克隆抗體，采用SP法對細(xì)胞爬片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色免疫組織化學(xué)鑒定結(jié)果：鏡下觀察到細(xì)胞爬片，可見細(xì)胞漿內(nèi)大量平行陽性染色胞核不著色。所有細(xì)胞染色，結(jié)果均為陽性2、免疫組織化學(xué)鑒定：3456、書不僅是生活，而且是現(xiàn)在、過去和未來文化生活的源泉?！獛旆ㄒ?/p>

57、生命不可能有兩次，但許多人連一次也不善于度過。——呂凱特

58、問渠哪得清如許，為有源頭活水來。——朱熹

59、我的努力求學(xué)沒有得到別的好處，只不過是愈來愈發(fā)覺自己的無知。——笛卡兒

60、生活的道路一旦選定，就要勇敢地走到底，決不回頭。——左拉56、書不僅是生活，而且是現(xiàn)在、過去和未來文化生活的源泉?！?5人的差異在于業(yè)余時間大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)人的差異在于業(yè)余時間大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!相關(guān)幫助需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎fantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺需要相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問探生網(wǎng)biomean進(jìn)行咨詢，期待您的加入小學(xué)是學(xué)習(xí)語言的最佳年齡段，我們要抓住這一教育的契機(jī)，及時開展口語訓(xùn)練，并探索有效的途徑和方法，讓每一位學(xué)生都樂于交際，善于表達(dá)。目前農(nóng)村小學(xué)存在著教師不懂教，學(xué)生不會說、不敢說、說不好的弊端，因此教師要改革小學(xué)語文口語交際教學(xué)模式，開發(fā)口語交際的訓(xùn)練途徑，用各種方法引導(dǎo)學(xué)生學(xué)會傾聽，樂于表達(dá)，提高學(xué)生口語交際的能力。1.創(chuàng)設(shè)情境進(jìn)行口語交際訓(xùn)練新大綱提出這樣的要求：“要在課內(nèi)外創(chuàng)設(shè)多種多樣的交際情境，讓每個學(xué)生無拘無束地進(jìn)行口語交際”。這是口語交際訓(xùn)練的一條重要途徑。學(xué)生口語交際能力，是在具體情境的實(shí)踐中培養(yǎng)出來的，特別是小學(xué)生，他們年齡小、注意力易分散、形象思維占主要優(yōu)勢，沒有具體的情境，學(xué)生就不可能承擔(dān)有實(shí)際意義的交際任務(wù)，也不可能有雙向互動的實(shí)踐過程，因此，在教學(xué)中教師要為學(xué)生創(chuàng)設(shè)情境訓(xùn)練學(xué)生的口頭表達(dá)能力。1.1實(shí)物創(chuàng)設(shè)情境；小學(xué)生智能發(fā)展尚處于低級階段，他們觀察事物往往比較粗略，因此，在教小學(xué)生說話時，要教會他們觀察。直觀形象的實(shí)物展示，能很快吸引學(xué)生的注意力，易于學(xué)生觀察，引起學(xué)生口語交際的欲望，激發(fā)他們口語交際的熱情。如第六冊語文課本中有口語交際“說家鄉(xiāng)”，教師把一幅幅家鄉(xiāng)的山水畫、果園、田野、建筑、風(fēng)情世俗等熟悉的畫面呈現(xiàn)于學(xué)生面前，學(xué)生個個眼前一亮，隨著教師的相機(jī)點(diǎn)撥，人人有話想說、有話可說，學(xué)生根據(jù)自己喜歡的話題到“家鄉(xiāng)的景”“家鄉(xiāng)的人”“家鄉(xiāng)的建筑”“家鄉(xiāng)的風(fēng)情”小組中交流，然后每小組留下一人，其他成員帶著本組交流成果分別到其他小組分享，這樣學(xué)生入情入境地進(jìn)行口語交際，達(dá)到良好的訓(xùn)練效果。1.2表演創(chuàng)設(shè)情境；兒童是用形象、色彩來思維的，兒童只有通過表演，再現(xiàn)生活情景，從中感受、體驗(yàn)形象，觀察、思維、想象和表達(dá)能力才得到最充分的發(fā)展。如蘇教版二年級上冊練習(xí)4的口語交際“買文具”，這是小學(xué)生社會交際活動中常見的買賣交易，具有濃厚的生活氣息，買賣雙方本著各自的立場說話、做事，教師設(shè)計(jì)兩個層次的問題：“售貨員沒搭理你，怎么說？”“要求調(diào)換商品，怎么說？”，讓學(xué)生在小組內(nèi)扮演交際的主人公張小雨和售貨阿姨的對話情景：張小雨走進(jìn)文具店，沒有稱呼說“我要買一支鋼筆”，售貨員阿姨沒有搭理張小雨，“阿姨，我要買一支鋼筆”，售貨員阿姨隨手拿了一支筆遞給張小雨說“六元伍角一支”，張小雨看了看“這支筆不好，換一支吧，阿姨”“你想要什么檔次的筆？”，“中檔的吧，筆尖細(xì)點(diǎn)的”?！澳憧矗@支筆可以嗎？”“阿姨，請您多拿幾款給我挑選，行嗎？”，售貨員阿姨拿了幾支筆給張小雨，張小雨挑選到滿意的筆付了錢，說“謝謝阿姨！”。學(xué)生在表演的情境中輕松愉快、循序漸進(jìn)、步步深入地進(jìn)行口語交際訓(xùn)練，既順應(yīng)了學(xué)生的認(rèn)識規(guī)律和能力發(fā)展的過程，又有效地培養(yǎng)了學(xué)生良好的說話態(tài)度和語言習(xí)慣。2.聯(lián)系生活進(jìn)行口語交際訓(xùn)練培養(yǎng)學(xué)生的口語交際能力僅僅依靠課內(nèi)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，還必須引導(dǎo)學(xué)生運(yùn)用課內(nèi)學(xué)到的口語交際知識，積極主動地在平時的社會生活中進(jìn)行實(shí)踐。而豐富多彩的生活又給口語交際教學(xué)提供了活水源泉。因此，教師要主動幫助學(xué)生巧搭口語交際的“舞臺”，創(chuàng)設(shè)富有時代感和濃郁的生活情趣的語境，讓學(xué)生在多姿多彩的生活“舞臺”中觀察、表達(dá)，在活動中發(fā)展學(xué)生的口語交際能力。如蘇教版四年級上冊練習(xí)2的口語交際“介紹我的朋友”，讓學(xué)生把朋友帶到自己家中，向爸爸媽媽介紹朋友的年齡、家庭住址、興趣愛好、學(xué)習(xí)、特長等情況，通過這種生活實(shí)踐式的說話訓(xùn)練，讓我真正看到了學(xué)生語言表達(dá)能力的提高，也讓他們學(xué)會了在生活中交際。3.激勵評價進(jìn)行口語交際訓(xùn)練口語交際課上，要重視學(xué)生有興趣，才有交流的動機(jī)，他們需要老師常用肯定和表揚(yáng)的方式來保護(hù)他們的自尊心，激發(fā)他們的上進(jìn)心，如蘇教版三年級上冊的口語交際“介紹我的小制作”，讓學(xué)生把自己制作的過程跟大家說一說，不管學(xué)生講得是否有條理，只要他（她）想說、敢說，老師要耐心地聽學(xué)生發(fā)言，不要輕易打斷學(xué)生的思路；要善于發(fā)現(xiàn)學(xué)生微小的進(jìn)步及時肯定，不要輕易挑剔學(xué)生這個詞“不規(guī)范”，那個詞“有毛病”，即使某個詞說錯了，也要允許或提醒他重新?lián)Q個詞再說。小學(xué)生初練口語，往往語無倫次，更需要老師的細(xì)心呵護(hù)。總之，口語交際是人人必需掌握的工具，生活就是口語交際的內(nèi)容。我們老師應(yīng)培養(yǎng)和提高學(xué)生口語交際能力的多種切入點(diǎn)，創(chuàng)設(shè)寬松、愉悅的交際環(huán)境，讓學(xué)生創(chuàng)造性地說練，學(xué)生的口語交際能力一定會不斷提高，從而提高學(xué)生的綜合素質(zhì)。德育工作是學(xué)校教育的核心和關(guān)鍵，是全面發(fā)展教育的重要組成部分。特別是在我們農(nóng)村小學(xué)，由于相對貧窮落后，好多父母外出務(wù)工，加上小學(xué)生年齡小自我約束力差，在這種家庭德育教育滯后的情況下，就貪玩了，厭學(xué)了，也任性妄為了。在這種環(huán)境下，德育工作在農(nóng)村教育中就顯得尤為重要。由于受人文素質(zhì)和地理環(huán)境的影響，農(nóng)村的德育比起城市搞起來要難，在現(xiàn)實(shí)生活中，我們農(nóng)村學(xué)校的教育很難融入到家庭教育和社會環(huán)境中。比如，在學(xué)校教育中，同學(xué)們能互相關(guān)心、熱愛勞動，而回到家里則衣來伸手，飯來張口，一切勞動都有家長來承包，不懂得關(guān)心父母和長輩，成為了小皇帝。學(xué)校教育大打折扣。由此可見，如何對農(nóng)村學(xué)生開展道德教育，使德育的實(shí)效性更能顯現(xiàn)出來是擺在我們面前的一個不容忽視的問題。下面就我?guī)资甑牡掠ぷ鳎偨Y(jié)出以下幾種方法：一、言傳身教影響學(xué)生，使學(xué)生知道應(yīng)該做什么，不該做什么記的《中國青年報》上看到過這樣一段話：“一個孩子，從小崇拜爸爸媽媽。一上學(xué)就開始崇拜老師，不再崇拜家長。原因一個是老師知識多了，更重要的是，孩子從人格上不再崇拜父母，因?yàn)楦改刚f話總不算數(shù)，或者家長自己說的，卻經(jīng)常做不到?！边@一段話說得是比較中肯的。在工作中我總是嚴(yán)格要求自己，注意自己的一言一行，平時我要求學(xué)生不遲到、不早退，那么我本人在工作中首先就早來晚走，經(jīng)常深入班級。有的學(xué)生自習(xí)時坐不住凳子，我就在這個時間到教室里備課、改作業(yè)，這樣做既保持了自習(xí)紀(jì)律，又為那些坐不住凳子的學(xué)生作了“示范”。應(yīng)該說，教師的一舉一動都潛移默化地影響著學(xué)生。從老師的身上，學(xué)生們會無形中感到什么是應(yīng)該做的，什么是不應(yīng)該做的他們會自覺地遵守學(xué)校的各項(xiàng)規(guī)章制度，自覺地約束好自己、管理好自己。二、既做慈母，又做嚴(yán)父作為教師，我們不僅要真心誠意地把你的愛心奉獻(xiàn)給有些學(xué)生時，使他們克服缺點(diǎn)、改正毛病。更要應(yīng)用情感教育進(jìn)行教學(xué)。如對那些平時比較散漫、不夠遵守紀(jì)律的學(xué)生應(yīng)耐心地給他們講道理;對他們的生活也特別關(guān)心，有的學(xué)生生病時我從家里給他們拿藥、買營養(yǎng)品;有的學(xué)生家庭困難，我毫不吝惜地資助他們生活費(fèi)?？墒?，對學(xué)生同時應(yīng)有嚴(yán)格要求。在《現(xiàn)代漢語詞典》中就有“慈”是母親，“嚴(yán)”是父親的解釋。而老師，尤其是班主任，則應(yīng)該既要當(dāng)好母親，又要做好父親，也就是對學(xué)生既要慈愛，又要嚴(yán)管。正如小樹的成長，既需要澆灌，也需要修剪。實(shí)際上，慈愛是愛，嚴(yán)管又何嘗不是愛呢？古人云：“君子愛人以德，小人愛人以姑息。”我們教師都應(yīng)該是君子。因此在情感教育的前提下，對那些經(jīng)常犯錯誤的學(xué)生，我總是讓他們嚴(yán)格遵守《小學(xué)生守則》和《小學(xué)生日常行為規(guī)范》，并配以靈活的措施。這樣才能讓學(xué)生們感到他們是生活在充滿溫暖而又有秩序的集體中。三、教育學(xué)生樹立遠(yuǎn)大的理想，并為自己理想的實(shí)現(xiàn)而努力幫助學(xué)生們樹立遠(yuǎn)大理想，并且引導(dǎo)他們?yōu)閷?shí)現(xiàn)自己的理想而奮斗是教師義不容辭的責(zé)任。但是，對“理想”這個誘人的字眼兒，談起來容易，要實(shí)現(xiàn)起來就困難了。作為教師，既要用理想激發(fā)學(xué)生們?nèi)タ炭鄬W(xué)習(xí)，又要幫助他們克服前進(jìn)道路上的障礙。對于每位小學(xué)生來說，他們的思想容易波動，情緒不夠穩(wěn)定，遇到困難猶豫徘徊，這些雖然屬于正常現(xiàn)象，但卻很容易影響他們的學(xué)習(xí)積極性，那么教師就要經(jīng)常給他們講述學(xué)習(xí)的目的，激發(fā)他們拼搏進(jìn)取，讓他們清楚刻苦學(xué)習(xí)是實(shí)現(xiàn)理想的重要途徑。四、利用我們中華民族的傳統(tǒng)美德去影響學(xué)生的實(shí)際行為中華民族有著悠久的傳統(tǒng)美德，很多名人、偉人他們在立德修身、治國安邦方面有著感人的故事。像疏食淡飯不改其志的孔子，威武不屈、忠貞如一的蘇武，憂樂天下的范仲淹，萬古忠義的岳武穆等等。把這些可歌可泣的人物歷史事跡講給學(xué)生們聽，在思想上培養(yǎng)他們高尚的道德情操，引導(dǎo)他們走向人生正道。當(dāng)然這些人物事跡卻代替不了學(xué)生們的實(shí)際行動，作為德育工作者就是要讓學(xué)生把傳統(tǒng)美德教育與社會現(xiàn)實(shí)有機(jī)地結(jié)合起來，培養(yǎng)出有健康的、高尚的品德、有上進(jìn)心的一代新人。五、把嚴(yán)肅的紀(jì)律與活潑的班風(fēng)結(jié)合起來一個班級具有嚴(yán)肅的紀(jì)律是每個學(xué)生順利學(xué)習(xí)的保證，而活潑的班風(fēng)又能使每個學(xué)生以更加愉快的心情，飽滿的熱情投入到學(xué)習(xí)中去。嚴(yán)肅的紀(jì)律與活潑的班風(fēng)，二者缺一不可。在一個積極上進(jìn)的班集體中，每個學(xué)生會更加遵守紀(jì)律。所以在我擔(dān)任班主任時，總要與同學(xué)們制定一個切實(shí)可行，讓每一名學(xué)生沒有理由不執(zhí)行的班規(guī)，一旦有人違背這個班規(guī)，將要受到嚴(yán)肅的批評。與此同時，我又千方百計(jì)地創(chuàng)造一個活潑的班風(fēng)，鼓勵同學(xué)們積極參加學(xué)校組織的各項(xiàng)有意義活動。如演講比賽、體育競賽，學(xué)雷鋒活動。這些活動，豐富了學(xué)生們的學(xué)習(xí)生活，促進(jìn)了他們學(xué)習(xí)成績的提高，培養(yǎng)了他們的集體榮譽(yù)感。學(xué)校德育是一項(xiàng)系統(tǒng)的復(fù)雜的多環(huán)節(jié)密切配合的工作。任何環(huán)節(jié)的疏忽都會使德育效果大打折扣，我們做農(nóng)村德育工作者更要有師德之心、師德之范、師德之行，這樣才能搞好我們農(nóng)村學(xué)校的德育工作，才能使農(nóng)村學(xué)校的德育工作開出一片藍(lán)天，贏來一片曙光。人的差異在于業(yè)余時間大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)36大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件38大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件39大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件40細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法41結(jié)合生化和化學(xué)手段把已經(jīng)剪切成較小體積的組織進(jìn)行進(jìn)一步分離，制成細(xì)胞懸液。主要有：胰蛋白酶法膠原酶法EDTA法結(jié)合生化和化學(xué)手段把已經(jīng)剪切成較小體積的組織進(jìn)行進(jìn)一步分離，42細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法43從供體取得器官或器官組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在一定環(huán)境中培養(yǎng)，保持其原有器官細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和聯(lián)系并生存。從供體取得器官或器官組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在一定環(huán)境44體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型貼附型:細(xì)胞貼附在支持物上生長懸浮型：不貼附于支持物，呈懸浮生長體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型貼附型:細(xì)胞貼附在支持物上生長45細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用品細(xì)胞培養(yǎng)液、培養(yǎng)基準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備46“無菌”大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件47細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室無菌操作區(qū)（無菌操作室、超凈臺）孵育區(qū)制備區(qū)儲藏區(qū)清洗和消毒滅菌區(qū)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室無菌操作區(qū)（無菌操作室、超凈臺）48培養(yǎng)試劑的配制Hank’s液(單位g)CaCl20.14KCl0.4KH2PO40.06MgSO4.7H2O0.10NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.12D-glucose1.0Phenolred0.01培養(yǎng)試劑的配制Hank’s液49將CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在750mL的ddH2O中，混勻（用磁力攪拌器攪拌至溶解），定容至1000mL。高壓蒸氣消毒10分鐘，4℃冰箱保存。將CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在50D-Hank’s液（單位：g）KCl0.40KH2PO40.06NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.08Phenolred0.02D-Hank’s液（單位：g）51將以上成分溶于900mLddH2O中，充分混勻，加ddH2O至1000mL。高壓蒸氣消毒10分鐘，4℃冰箱保存。將以上成分溶于900mLddH2O中，充分混勻，加ddH252青霉素、鏈霉素液配制青霉素80萬U加Hank’s液至80mL，終濃度1萬u/mL鏈霉素100萬U（相當(dāng)于1g）加Hank’s液至100mL，終濃度10mg/mL分裝后至-20℃冰箱保存。青霉素、鏈霉素液配制53DMEM培養(yǎng)液900mLddH2O于1000mL容器中，將DMEM粉1包倒入容器中，盛粉袋用50mLddH2O分次沖洗，也倒入容器，磁力攪拌溶解。加NaHCO3調(diào)PH至7.2加青、鏈霉素至終濃度100u/mL和100ug/mL0.22umX50濾膜過濾（負(fù)壓泵抽吸），4℃冰箱保存。DMEM培養(yǎng)液54小牛、胎牛血清滅活55℃水浴箱30分鐘，置4℃冰箱保存滅活前放于-20℃冰箱保存待用臨用前加入DMEM液中小牛、胎牛血清滅活55平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)方法動物：大鼠150～180g，2～3只平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)方法動物：大鼠150～180g，2～3只56操作步驟大鼠頸椎脫臼致死固定操作步驟大鼠頸椎脫臼致死57消毒胸腹部大組織鑷、組織剪切開胸腹部皮膚另一組織鑷、組織剪切開胸腹部，并切除部分胸壁以利暴露眼科鑷和眼科彎剪分離胸腹主動脈并放入盛有Hank