生物儀器使用課件

加樣器

加樣器加樣器的校準(zhǔn)校準(zhǔn)環(huán)境和用具要求：室溫：20~25℃，測定中波動(dòng)范圍不大于±0.5℃。電子天平：放置于無塵和震動(dòng)影響的臺(tái)面上，房間盡可能有空調(diào)。稱量時(shí)，為保證天平內(nèi)的濕度（相對濕度60-90%），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10ml蒸餾水的小燒杯。小燒杯：5~10ml體積。測定液體：溫度為20~25℃的去氣雙蒸水。選定校準(zhǔn)體積：擬校準(zhǔn)體積；加樣器標(biāo)定體積的中間體積；最小可調(diào)體積（不小于擬校準(zhǔn)體積的10%）。如為固定體積加樣器，則只有一種校準(zhǔn)體積。校準(zhǔn)步驟：將加樣器調(diào)至擬校準(zhǔn)體積，選擇合適的吸頭；調(diào)節(jié)好天平；來回吸吹蒸餾水3次，以使吸頭濕潤，用紗布拭干吸頭垂直握住加樣器，將吸頭浸入液面2~3mm處，緩慢（1~3秒）一致地吸取蒸餾水；將吸頭離開液面，靠在管壁，去掉吸頭外部的液體；將加樣器以30℃角放入稱量燒杯中，緩慢一致地將加樣器壓至第一檔，等待1~3秒，再壓至第二檔，使吸頭里的液體完全排出；記錄稱量值；擦干吸頭外面；按上述步驟稱量10次；取10次測定值的均值作為最后加樣器吸取的蒸餾水重量，按附表所列蒸餾水Z因子計(jì)算體積。按校準(zhǔn)結(jié)果調(diào)節(jié)加樣器。

根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)要求使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染。吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開按鈕，將吸液嘴壓掉后再將拇指松開，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時(shí)，不要用力過猛，并應(yīng)注意計(jì)數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無吸頭時(shí)使用，吸頭有液體時(shí)不可平放或倒置。注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

操作時(shí)要慢和穩(wěn)，吸嘴浸入液體深度要合適，吸液過程盡量保持不變；改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸嘴；發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液時(shí)必須更換；新吸嘴使用前應(yīng)先預(yù)測。為防止液體進(jìn)入移液器套筒內(nèi)，注意以下幾點(diǎn)：壓放按鈕時(shí)保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉(zhuǎn)；吸嘴中有液體時(shí)不可將移液器平放；P5000及P10ML移液器一定要加過濾芯。切勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈。注意事項(xiàng)

連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣加樣過程中應(yīng)注意移液嘴不能觸及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理，以方便操作過程、避免污染為原則。連續(xù)可調(diào)式移液器在使用完畢后應(yīng)置于以液器架上，遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。在取液之前，所取液體應(yīng)在室溫（15-25C）平衡；液體溫度與室溫有異時(shí)，將吸嘴預(yù)洗多次再用；移液溫度不得超過70℃。不可把容量計(jì)數(shù)調(diào)超其適用范圍。蒸餾水超純水使用方法離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使機(jī)器處于水平位置以免離心時(shí)造成機(jī)器震動(dòng)。打開電源開關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上（離心筒須與樣品同時(shí)平衡），關(guān)閉機(jī)蓋。按功能選擇鍵，設(shè)置各項(xiàng)要求：溫度、速度、時(shí)間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲(chǔ)存鍵，以便記憶輸入的各項(xiàng)信息。待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋。注意事項(xiàng)機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線。開機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭按裝是否牢固，機(jī)腔有無異物掉入。樣品應(yīng)預(yù)先平衡。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)，離心機(jī)周圍30cm范圍內(nèi)不能有人和危險(xiǎn)物品。揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。注意事項(xiàng)易燃易爆以及易與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)不能離心。在沒有相應(yīng)的防護(hù)措施時(shí)，不能離心有毒的、放射性的物質(zhì)或病原微生物。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)不可人為地打開蓋子。如果轉(zhuǎn)頭和蓋子有可見的腐蝕或磨損的痕跡，則應(yīng)立即停止使用。使用的玻璃或塑料離心管應(yīng)能承受相應(yīng)的離心力并大小合適。非金屬轉(zhuǎn)頭不可用紫外照射。如果被離心的物品密度大于說明書的規(guī)定范圍，應(yīng)根據(jù)RCF計(jì)算公式，減小離心體積。維護(hù)和保養(yǎng)轉(zhuǎn)頭應(yīng)定期清洗和消毒。擦拭離心機(jī)腔時(shí)動(dòng)作要輕，以免損壞機(jī)腔內(nèi)溫度感應(yīng)器。使用消毒液處理時(shí)，溫度不可超過25℃，時(shí)間不可超過規(guī)定時(shí)間?？梢杂酶邏合镜霓D(zhuǎn)頭，應(yīng)在清洗后，121℃消毒20分鐘，轉(zhuǎn)頭務(wù)必平放，并不受擠壓，以免變形。每次操作完畢；應(yīng)作好使用情況記錄，并定期對機(jī)器各項(xiàng)性能進(jìn)行檢修。離心過程中若發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，應(yīng)立即關(guān)閉電源，報(bào)請有關(guān)技術(shù)人員檢修。超速離心過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中離心機(jī)主要用于分離細(xì)胞和細(xì)菌；純化和收集病毒、RNA、DNA、質(zhì)粒和蛋白質(zhì)等生物大分子。一.離心機(jī)的組成離心機(jī)主要有驅(qū)動(dòng)電機(jī)、制冷系統(tǒng)、真空系統(tǒng)（超離有）、顯示系統(tǒng)、自動(dòng)保護(hù)系統(tǒng)和控制系統(tǒng)組成。必要的配件為離心轉(zhuǎn)頭和離心管。二.離心轉(zhuǎn)頭的選用在離心中最常使用的轉(zhuǎn)頭是角度頭和水平頭。角度頭常用于差速離心來分離s（沉降系數(shù)）值相差較大（1：10）的樣品。2.水平頭常用于密度梯度或等密度離心。另有一種垂直轉(zhuǎn)頭使用較少，此轉(zhuǎn)頭主要用于等密度離心，以縮短離心時(shí)間。三.離心管的選用1.玻璃離心管絕對不能在高、超速離心機(jī)上使用。2.PA(聚酰胺)管：化學(xué)性能穩(wěn)定，半透明，能耐高溫消毒。3.PP(聚丙烯)管：化學(xué)性能穩(wěn)定，半透明，能耐高溫消毒。4.PC(聚碳酸酯)管：透明度好，硬度大，能耐高溫消毒。但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿及某些有機(jī)溶劑。主要用于5萬(轉(zhuǎn)/分)以上離心。5.CN(硝酸纖維素)管：質(zhì)地較軟，透明，但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿及某些有機(jī)溶劑，不能高壓消毒。適合于蔗糖、甘油等密度梯度離心。應(yīng)透明，利于收集。高、超速離心過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)注意事項(xiàng)1.對稱平衡：當(dāng)離心轉(zhuǎn)速達(dá)1－5萬（轉(zhuǎn)/分）時(shí)，如對稱管相差1克，轉(zhuǎn)頭半徑5厘米，則離心力公式F=m×RCF查表得：1萬（轉(zhuǎn)/分）RCF=6000代入公式F=1×6000=6(公斤)5萬（轉(zhuǎn)/分）RCF=150000代入公式F=1×150000=150(公斤)此時(shí)引起兩邊不平衡可達(dá)6－150(公斤)，這對離心機(jī)的損傷是很大的，至少將縮短離心機(jī)的使用壽命。2.如離心管蓋子密封性差液體就不能加滿（針對高速離心且使用角度頭），以防外溢。失去平衡外溢后果污染轉(zhuǎn)頭和離心腔影響感應(yīng)器正常工作3.超速離心時(shí)，液體一定要加滿離心管，應(yīng)超離時(shí)需抽真空，只有加滿才能避免離心管變形。4.使用角度頭時(shí)別忘蓋轉(zhuǎn)頭蓋，如未蓋，離心腔內(nèi)會(huì)產(chǎn)生很大的渦流阻力和摩擦升溫，這等于給離心機(jī)的電機(jī)和制冷機(jī)增加了額外負(fù)擔(dān)，影響離心機(jī)的使用壽命。搖床脈沖場凝膠電泳雙向電泳向電泳服務(wù)項(xiàng)目價(jià)格/點(diǎn)工作日MALDI-TOF-MS鑒定肽質(zhì)量指紋譜技術(shù)300元1日譜圖解析150元1日檢索及結(jié)果分析(internet)：50元1日檢索及結(jié)果分析100元1日分子量測定分子量小于10000Da200元5日分子量大于10000Da：250元5日分子量大于30000Da：300元5日混合物：400元5日聚合物：400元5日聚合物且為混合物500元5日其它難分析樣品協(xié)商PCR擴(kuò)增儀的使用與保養(yǎng)PCR儀應(yīng)放在臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的第三區(qū)。儀器應(yīng)放置水平臺(tái)上，電源電壓須與儀器要求電壓相一致，并連接可靠的地線。儀器遠(yuǎn)離水源、明火及腐蝕性物質(zhì)。工作室溫要求：15-25℃，通風(fēng)保證散熱。接穩(wěn)壓電源。尤其是半導(dǎo)體升溫降溫的設(shè)備。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好能將擴(kuò)增儀內(nèi)的孔位全部放置樣品管，若樣品管少時(shí)可用空管代替，以保證實(shí)驗(yàn)的一致性和重復(fù)性。PCR擴(kuò)增儀的使用與保養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)及時(shí)擦干孔位內(nèi)存在的水分，蓋上機(jī)蓋。應(yīng)定期使用電子測溫儀校準(zhǔn)溫度。水浴式擴(kuò)增儀應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充水，以免水量過少，影響溫度穩(wěn)定性。定期清潔熱蓋和反應(yīng)孔。應(yīng)用1、比較經(jīng)過不處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異，及特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異2、比較正常組織與病理組織中各種mRNA表達(dá)量差異

3、驗(yàn)證基因芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果4、驗(yàn)證RNA干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果

DNA測序儀1．菌種

新鮮的菌液或平板，4℃保存，時(shí)間不超過3天；沉淀菌體體積大于30μl。引物2．PCR產(chǎn)物

提供特異性擴(kuò)增的產(chǎn)物和特異測序引物，產(chǎn)物濃度不低于30ng/μl，體積大于10μl；引物濃度不小于5pmol/μl，每個(gè)反應(yīng)提供20pmol。3．純化質(zhì)粒

標(biāo)明質(zhì)粒純化方法，濃度不低于100ng/μl,體積大于15μl,每個(gè)樣品所用的載體，引物名稱，單向或雙向測序，插入片段大小。DNA合成儀ACGTACGT核酸、蛋白定量毛細(xì)管電泳1.藥物分析

手性藥物分析及體內(nèi)的代謝過程

中藥成份的分析2核酸分析

寡核苷酸純度分析

DNA片段的分離分析及定量3.蛋白質(zhì)研究

PCR產(chǎn)物的分析及定量